中国动物传染病学报

2020, v.28;No.137(05) 23-30

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超级细菌bla_(NDM-1)和mcr-1基因双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
ESTABLISHMENT OF DUPLEX TAQMAN REAL-TIME PCR FOR DETECTION OF BLA_(NDM-1) AND MCR-1 GENES OF SUPERBUG

屈素洁;施开创;尹彦文;冯淑萍;陆文俊;

摘要(Abstract):

为了建立可同时检测超级细菌bla_(NDM-1)基因和mcr-1基因的快速检测方法,针对bla_(NDM-1)基因和mcr-1基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,以构建含有bla_(NDM-1)基因和mcr-1基因片段的重组质粒作为阳性标准品,通过优化各种反应条件,建立同时检测bla_(NDM-1)基因和mcr-1基因的双重荧光定量PCR方法。该方法能够特异性扩增bla_(NDM-1)基因和mcr-1基因质粒标准品,而对照标准菌株的检测结果均为阴性。两种质粒标准品的检出下限均为1.63×10~1拷贝/μL,比常规PCR敏感性高100倍;组内和组间重复试验的变异系数均小于2%。应用所建立的方法对55株鸡源致病性沙门氏菌、10株生鲜畜禽产品源大肠杆菌临床分离株进行检测,未发现携带bla_(NDM-1)基因和mcr-1基因的沙门氏菌分离株,发现2株携带bla_(NDM-1)基因和1株携带mcr-1基因的大肠杆菌分离株。结果表明,本研究所建立的双重荧光定量PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,为bla_(NDM-1)基因和mcr-1基因的快速检测提供了有效的技术手段。

关键词(KeyWords): 超级细菌;bla_(NDM-1)基因;mcr-1基因;TaqMan探针;双重荧光定量PCR

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 广西水产畜牧科技项目(桂渔牧科1304559);; 广西科技重大专项(桂科AA17204057)

作者(Author): 屈素洁;施开创;尹彦文;冯淑萍;陆文俊;

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DOI:

参考文献(References):

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