鸭源新型鹅细小病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用DEVELOPMENT AND PRELIMINARY APPLICATION OF A TAQMANBASED REAL-TIME PCR ASSAY FOR DETECTION OF NOVEL GOOSE PARVOVIRUS
曹旭阳;王宇飞;张志飞;魏笑笑;秦立廷;陈佶慧;滕巧泱;杨健美;刘芹防;陈鸿军;李泽君;李景环;李雪松;
摘要(Abstract):
2015年暴发了一种由新型鹅细小病毒(NGPV)引起的鸭喙萎缩-侏儒症(BADS)的疾病,造成了严重的经济损失。本研究根据GenBank中NGPV相对保守的VP3基因序列,设计1对特异性引物和1条TaqMan探针,并对其反应条件进行优化,建立了一种检测NGPV的TaqMan荧光定量PCR方法。敏感性试验结果表明,该方法检测敏感性达到37.2拷贝/μL,比常规PCR灵敏度高100倍,而且该方法对鸭其他主要病原核酸检测均为阴性,具有良好的特异性。批内和批间的检测变异系数均小于等于2.2%。对收集的50份病料进行检测,本研究建立的荧光定量PCR方法NGPV检出率为78%,普通PCR方法为50%,荧光定量PCR方法的敏感性明显高于普通常规PCR方法。研究结果表明该方法具有操作简便、敏感性高和特异性强的特点,可用于NGPV的快速诊断。
关键词(KeyWords): 新型鹅细小病毒;荧光定量PCR;检测
基金项目(Foundation): 国家重点研发计划“家禽重要疫病诊断与检测新技术研究”(2016YFD0500800);; 国家自然科学基金项目(31702237,31771000);; 上海市自然科学基金项目(17ZR1437400);; 上海科委创新行动计划农业项目(17391901700)
作者(Author): 曹旭阳;王宇飞;张志飞;魏笑笑;秦立廷;陈佶慧;滕巧泱;杨健美;刘芹防;陈鸿军;李泽君;李景环;李雪松;
Email:
DOI:
参考文献(References):
- [1]Jansson D S,Feinstein R,Kardi V,et al.Epidemiologic Investigation of an Outbreak of Goose Parvovirus Infection in Sweden[J].Avian Dis,2007,51(2):609-613.
- [2]Liu H M,Wang H,Tian X J,et al.Complete genome sequence of goose parvovirus Y strain isolated from Muscovy ducks in China[J].Virus Genes,2014,48(1):199-202.
- [3]Glávits R,Zolnai A,SzabóE,et al.Comparative pathological studies on domestic geese Anser anser domestica and Muscovy ducks (Cairina moschata) experimentally infected with parvovirus strains of goose and Muscovy duck origin[J].Acta Vet Hung,2005,53(1):73-79.
- [4]方定一.“小鹅瘟”的介绍[J].中国兽医杂志,1962(8):19-20.
- [5]王燕.新型鹅细小病毒VP3抗体特异性ELISA检测方法的建立[D].保定:河北大学,2017.
- [6]王艳秋.鹅细小病毒Taq Man荧光定量PCR方法的建立及初步应用[D].延边:延边大学,2017.
- [7]葛志琪,刘亚刚,陈舜,等.新型鹅细小病毒四川株的全基因组扩增及遗传进化分析[J].四川农业大学学报,2017,35(4):574-580.
- [8]朱海侠,万春和,黄瑜.鹅细小病毒基因组结构特征研究进展[J].中国动物传染病报,2011,19(1):82-86.
- [9]万春和,朱海侠,黄瑜,等.一株鹅细小病毒全基因特征分析[J].中国动物传染病学报,2011,19(4):19-24.
- [10]郭卉,涂飞,吕亚楠,等.抗鹅细小病毒单克隆抗体的制备及其免疫荧光检测方法的建立[J].中国动物传染病学报,2013,21(4):1-6.
- [11]窦砚国,陈浩,郑肖强,等.鸭细小病毒套式PCR检测方法的建立与应用[J].中国兽医学报,2016,36(10):1706-1709.
- [12]李鹏飞.新型鹅细小病毒检测方法的建立及流行病学调查[D].泰安:山东农业大学,2018.
- [13]Jones C D,Yeung C,Zehnder J L.Comprehensive validation of a real-time quantitative bcr-abl assay for clinical laboratory use[J].Am J Clin Pathol,2003,120(1):42-48.
- [14]欧阳松应,杨冬,欧阳红生,等.实时荧光定量PCR技术及其应用[J].生命的化学,2004,24(1):74-76.
- [15]毕建敏.鹅细小病毒荧光定量PCR检测方法的建立与应用及其VP3基因序列分析[D].泰安:山东农业大学,2007.
- [16]Kisary J,Derzsy D.A viral disease of goslings.IV,Characterization of the causal agent in tissue culture systems[J].Acta Vet Hung,1974(24):287-292.
- [17]吴蓓.德州地区新型鹅细小病毒流行病学调查及DZ-01株新型鹅细小病毒全基因组序列分析[D].泰安:山东农业大学,2016.
- [18]Chen H,Tang Y,Dou Y,et al.Evidence for vertical transmission of novel duck-origin goose parvovirus-related parvovirus[J].Transbound Emerg Dis,2016,63(3):243-247.
- [19]Bustin S A,Mueller R.Real-time reverse transcription PCR(qRT-PCR) and its potential use in clinical diagnosis[J].Clin Sci(Lond),2005,10(9):365-379.
- [20]Huang Y,Kong D,Yang Y,et al.Real-time quantitative assay of telomerase activity using the duplex scorpion primer[J].Biotechnol Lett,2004,26(11):891-895.
- [21]Niu X,Chen H,Yang J,et al.Development of a TaqMan-based real-time PCR assay for the detection of Novel GPV[J].J Virol Methods,2016,(237):32-37.
- [22]Wang J,Wang J,Cui Y,et al.Development of a taqman-based real-time PCR assay for the rapid and specific detection of novel duck-origin goose parvovirus[J].Mol Cell Probes,2017(34):56.