- 翟少伦;张建武;韦祖樟;袁世山;岳城;冉多良;龙进学;
猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是严重危害养猪业的重要病原之一,根据基因组大小可分为2个基因型:PCV2a和PCV2b。为更好地掌握PCV2a和PCV2b在我国猪场的流行情况,本研究对先前的鉴别PCR诊断方法(涉及到引物、PCR体系及程序)进行优化,并应用优化的鉴别PCR方法对118份PCV2阳性样品进行检测,结果显示PCV2a占30.5%(36/118),PCV2b占37.3%(44/118),共感染占32.2%(38/118),与常规PCR检测结果符合率为100%,此外,对30份临床送检组织和血清样品也有很高的检出率。部分鉴别PCR扩增的目的产物进行测序及序列进化树分析,表明扩增序列为PCV2a与PCV2b的特征序列。经本研究优化后的鉴别PCR方法易操作、特异性强、敏感性好,可广泛用于临床样品中PCV2a和PCV2b的快速检测。
2010年01期 v.18;No.73 1-7页 [查看摘要][在线阅读][下载 1336K] [阅读次数:99 ] |[下载次数:264 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:8 ] - 何冉娅;于淼;张玉玲;张得玉;曹宗喜;张桂红;
为了分析华南地区鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)的遗传进化情况,本试验对2007~2009年华南地区各鸭场发病雏鸭进行DHV的病原学检测以及VP1基因扩增、克隆和测序,并运用生物信息学软件对VP1基因进行了序列分析。结果表明:所分离的R、SS1、ZJ株为DHV-A、VP1 DHV-A参考毒株核苷酸序列相似性分别为93.8%~100%、93.7%~99.6%、91.7%~98.9%,氨基酸序列相似性分别为94.5%~100.0%、94.1%~99.2%、95.0%~99.2%。其余15株DHV-C分离病毒株与台湾新型DHV核苷酸和氨基酸序列相似性均在71.4%~72.0%和78.2%~79.0%之间,与韩国新型DHV相似性在94.0%~95.1%和91.6%~93.3%之间,与国内分离的新型DHV相似性均在97.9%~100.0%和97.5%~100.0%之间。VP1氨基酸序列比对分析表明:VP1的高变区主要分布在46~64、95~149、180~223位,尤其是C′末端,存在点突变或连续变异。在第145~146位,15株新型DHV毒株比3株Ⅰ型DHV多2个氨基酸(G和G)。小RNA病毒科的VP1蛋白中保守的RGD基序,在DHV中分别显示为SGD和QSD。结果表明,危害华南地区鸭场的DHV已经发生变异,且存在两种基因型毒株的流行。
2010年01期 v.18;No.73 7-17页 [查看摘要][在线阅读][下载 1188K] [阅读次数:203 ] |[下载次数:282 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:50 ] - 孙英杰;陈鸿军;仇旭升;詹媛;于洋;宋翠萍;于圣青;丁铲;
根据ClassⅠ新城疫病毒分离株9a5b编码序列,设计特异性引物扩增融合蛋白(F)基因截短片段(199~1 500 nt),利用原核表达获得重组蛋白,切胶免疫Balb/c小鼠,制备特异性多抗血清,利用制得的血清进行F蛋白表达时相分析。结果表明:NDV 9a5b病毒按5M.O.I(multiplicity of infection,多重感染复数)感染量接种DF1单层细胞,经IFA检测,在感染6 h时,F蛋白开始出现,主要分布于细胞浆内;12~16 h胞浆中的F蛋白含量逐渐增多,形成包涵体,开始在细胞膜上分布;当病毒感染24h后,F蛋白在细胞膜上形成明显的膜周染色;至感染36h后,出现多个细胞融合的包涵体,细胞已基本崩解。此时,F蛋白也散在分布于包涵体中。这为深入开展F蛋白与该病毒的毒力演化机制研究工作奠定了基础。
2010年01期 v.18;No.73 17-22页 [查看摘要][在线阅读][下载 1437K] [阅读次数:96 ] |[下载次数:117 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] - 邓小芸;祁小乐;高玉龙;高宏雷;秦立廷;高立;王笑梅;
禽网状内皮组织增生病是一种重要的肿瘤病和免疫抑制病。本研究从黑龙江省某鸡场分离到一株禽网状内皮组织增生病病毒,经间接免疫荧光、PCR和电镜鉴定,将该株病毒命名为HLJR0901。克隆HLJR0901主要保护性抗原的基因gp90,并进行了序列分析。HLJR0901与我国早期分离的南方毒株HA9901亲缘关系较远,而与美国和台湾的某些毒株同源性较高。HLJR0901的TCID_(50)为10~(5.2)/mL。通过绘制复制动力学曲线对HLJR0901在CEF细胞上的增殖动态规律进行了研究,发现d6和d7 REV增殖的滴度最高。该研究丰富了REV流行病学调查,为后续研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础。本研究不仅丰富了我国REV流行病学资料,也为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定了基础。
2010年01期 v.18;No.73 23-27页 [查看摘要][在线阅读][下载 1392K] [阅读次数:119 ] |[下载次数:313 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:13 ] - 刘邓;袁秀芳;冉多良;徐丽华;牛登元;王朝文;王一成;
根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒N基因序列,设计了一对特异性引物和探针,扩增长度为186bp的片段。以克隆N基因的质粒作为阳性标准品,建立了一种快速检测猪流行腹泻病毒含量的TaqMan荧光定量PCR方法。该方法在10~8~10~1 copies/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中10 copies/μL的质粒DNA,以猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒为模板时,均检测不到荧光信号,而重复性实验中其变异系数均小于2%,表明此方法具有很好的特异性和重复性。应用此方法对采集的60份临床样品进行检测,其阳性检出率为92%,而用常规RT-PCR方法进行检测,阳性检出率仅为80%。表明荧光定量RT-PCR方法的敏感性明显高于常规PCR检测方法。
2010年01期 v.18;No.73 28-34页 [查看摘要][在线阅读][下载 1254K] [阅读次数:183 ] |[下载次数:651 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:50 ] - 王景艳;李中明;赵鹏;陈浩;崔治中;
为了从怀疑污染禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)的禽痘病毒(Fowlpoxvirus,FPV)活疫苗中分离病毒,将市场上购买的某些厂家的禽痘弱毒疫苗接种7日龄SPF雏鸡。在5d后采其抗凝血浆接种鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF),在连续传2代后,用REV特异性单抗做间接免疫荧光试验,确认REV感染,命名为JS0809。提取感染细胞的DNA,采用PCR扩增env基因。测序分析表明,该毒株的env基因开放阅读框同大部分REV毒株一致,为1 761 bp。JS0809的囊膜蛋白基因(envelope protein gene,env)与国内已发表株的同源性高达96.0%~99.%。相对而言,它与早年分离到的毒株的同源性只有96%~97.3%,但与近几年的分离珠的同源性则均高达99.5%~99.8%。它与整合进FPV野毒株中的全基因组REV的env基因同源性很高为99.8%,而与整合进FPV疫苗株中全基因组REV的env基因同源性较低仅为97.3%。本研究证实了在我国生产的某些FPV疫苗中存在REV污染,所污染的REV的env基因更接近最近的流行野毒,这是国内第一次报道从禽痘弱毒疫苗中分离到REV活毒。
2010年01期 v.18;No.73 35-40页 [查看摘要][在线阅读][下载 2048K] [阅读次数:108 ] |[下载次数:262 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:26 ] - 鞠厚斌;曹火仁;张维谊;刘健;周锦萍;
为掌握动物疫情动态,消除疫情隐患,及时了解上海及周边地区猪主要病毒病的流行趋势,采用实时荧光RT-PCR方法对2006~2009年上海地区规模猪场和养猪散户送检的门诊收集的临床病例样本进行主要病毒病的病原学检测,主要包括猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2),通过临床检测,结果表明这些病原在上海及周边地区是普遍存在的,给猪病防疫带来了重大隐患。
2010年01期 v.18;No.73 40-44页 [查看摘要][在线阅读][下载 737K] [阅读次数:107 ] |[下载次数:88 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:10 ]
- 周勇志;李庄;石磊;郭凤璕;周金林;
为了评估镰形扇头蜱肌钙蛋白Ⅰ(TroponinⅠ,TnI)作为候选疫苗分子的潜力,应用肌钙蛋白Ⅰ重组蛋白进行了抗蜱免疫实验。将重组蛋白按常规方法免疫新西兰兔,三次免疫后分别用若蜱、成蜱进行攻虫实验,观察其免疫保护效果。结果发现蜱的吸血行为受到一定的影响,与对照相比,若蜱和成蜱吸附率、饱血率、饱血体重和死亡率有显著差异,而在饱血时间上差异不显著,说明TnI基因的重组表达产物具有一定的免疫保护作用。
2010年01期 v.18;No.73 51-55页 [查看摘要][在线阅读][下载 830K] [阅读次数:92 ] |[下载次数:70 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] - 王时伟;李秋明;段嘉树;
对来自我国河南省汤阴县的布氏艾美耳球虫的生物学特性进行了较为详细的研究,包括卵囊大小、最短孢子化时间、最小潜在期、致病性、免疫原性以及内生性生活史,建立了一个完整的实验室虫株。布氏艾美耳球虫汤阴株平均大小为29.2μm×22.5μm,最小潜在期为119 h,最短孢子化时间为21 h,具有很强的致病性和免疫原性。组织学研究显示,这个种至少有3代裂殖生殖。
2010年01期 v.18;No.73 55-59页 [查看摘要][在线阅读][下载 280K] [阅读次数:119 ] |[下载次数:116 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] - 黄燕;张龙现;李晓虹;徐梅倩;朱顺海;曹杰;何国声;
为建立一种快速检测果汁饮料中卡耶他环孢子虫的方法,采用FTA卡片法提取果汁饮料中的卡耶他环孢子虫DNA,利用特异性引物组F1E/R2B、CC719/CRP999进行巢式PCR。以柔嫩艾美耳球虫、贝氏隐孢子虫等作为对照,结果显示,除卡耶他环孢子虫外,均无特异性条带。用卡耶他环孢子虫卵囊进行巢式PCR敏感性试验,结果显示敏感度最高达1.0×10~0个/mL。可见,FTA-PCR方法特异、敏感,能用于新鲜食品中卡耶他环孢子虫的检测。
2010年01期 v.18;No.73 59-63页 [查看摘要][在线阅读][下载 1275K] [阅读次数:101 ] |[下载次数:98 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:4 ] - 蔡进忠;李春花;
本文简要介绍青海省畜禽寄生虫虫种资源与分布,并对绵羊主要线虫虫卵和幼虫在天然草场的生活力进行了观察。迄今从该省牛、羊、马、猪、鸡、免等畜禽检出寄生虫301种,隶属于6门,9纲,22目,58科,97属。
2010年01期 v.18;No.73 64-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 266K] [阅读次数:117 ] |[下载次数:138 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:11 ]
- 孙艳敏;李海云;陈立;亓霄;陈仕焯;
采用常规尸解,石蜡切片、苏木精-曙红染色(H-E)、绦虫整体醋酸明矾洋红染色等方法对一只病死蓝眼葵花鹦鹉的绦虫病原及肠道组织病理进行了初步研究。结果表明:该蓝眼葵花鹦鹉肠道内寄生有大量瑞氏绦虫,集结成团堵塞了肠道。肠道组织病理分析发现肠黏膜上皮部分组织坏死、脱落,小肠绒毛固有层、黏膜下层及浆膜内有充血、炎细胞浸润,显示该种绦虫对鹦鹉肠道组织造成了一定损伤,影响了鹦鹉对营养物质的消化吸收。
2010年01期 v.18;No.73 68-72页 [查看摘要][在线阅读][下载 1665K] [阅读次数:72 ] |[下载次数:84 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] - 卢旺银;哈利;曹丽萍;
为摸清兰州市宠物犬、猫胃肠道寄生蠕虫的感染情况,于2008年6月~2009年5月通过肛门直接收集,或采集自然排出的粪便,用沉淀法和漂浮法相结合对256只犬、57只猫进行了虫卵或虫体检查。结果显示,256只犬中有48只犬感染胃肠道寄生虫,感染率18.75%,主要检出犬弓首蛔虫、泡状带绦虫、犬钩虫、犬复孔绦虫、细粒棘球绦虫、华支睾吸虫6种虫卵或/和虫体;57只猫中有14只感染胃肠道寄生虫,感染率24.56%,主要检出犬复孔绦虫、华支睾吸虫、泡状带绦虫3种虫卵或/和虫体。
2010年01期 v.18;No.73 72-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 159K] [阅读次数:105 ] |[下载次数:357 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:16 ] - 王礞礞;周艳君;侯军委;童光志;
根据GenBank上发表的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)基因组序列和TTV(Torquetenovirus)1、2型的UTR序列设计合成引物,建立了分别用于检测PCV2和TTV1、TTV2的PCR及巢式PCR方法。应用建立的PCR方法对送检的广东、福建和江西等7个省份258份血液和组织样品进行了PCV2、TTV1和TTV2的检测,确定猪群中PCV2与TTV1和/或TTV2混合感染情况。结果表明,94份样品表现为PCV2和TTV1的混合感染,占样品总数的36.4%;193份样品表现为PCV2和TTV2的混合感染,占74.8%;另外,还有一些样品为三重感染,占34.5%。由此可以看出,猪群中PCV2和/或TTV1和/或TTV2的混合感染很普遍。
2010年01期 v.18;No.73 75-79页 [查看摘要][在线阅读][下载 259K] [阅读次数:126 ] |[下载次数:345 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:20 ]