- 姜一峰;周艳君;王亚欣;朱建平;虞凌雪;徐彦召;童武;童光志;
为研究高致病性猪繁殖和呼吸综合征病毒非结构蛋白对病毒毒力的影响,本研究通过反向遗传操作技术将高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株的非结构蛋白编码区nsp9、nsp10、nsp11分别置换弱毒疫苗株HuN4-F112中的相应片段,经间接免疫荧光鉴定拯救的重组病毒,分别命名为rHuN4-F112-nsp9、rHuN4-F112-nsp10、rHuN4-F112-nsp11,测序证实HuN4强毒nsp9、nsp10、nsp11片段正确替换入HuN4-F112骨架。拯救病毒在Marc-145细胞上的生长曲线显示,rHuN4-F112-nsp9和rHuN4-F112-nsp10在前24 h的复制速度明显高于rHuN4-F112-nsp11和拯救的母源毒rHuN4-F112,36 h后无明显差别。将拯救病毒以105TCID50剂量接种仔猪,对体温、临床症状、病毒血症、组织器官病变情况进行观察和检测。结果显示,拯救病毒rHuN4-F112-nsp9、rHuN4-F112 nsp10、rHuN4-F112 nsp11在致病性、发热以及病毒血症强度上与rHuN4-F112无显著差异,提示单独nsp9、nsp10、nsp11对病毒致病性以及病毒在体内的复制无影响。
2011年06期 v.19;No.84 1-6页 [查看摘要][在线阅读][下载 1535K] [阅读次数：169 ] |[下载次数：243 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 高飞;陆嘉琦;姚火春;杨倩;袁世山;童光志;
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reporoductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)基因组5′非翻译区(untranslated region,UTR)对病毒复制转录等过程至关重要,但其发挥作用的机制尚不清楚。本实验室将欧洲型PRRSV 5′UTR替换入北美型PRRSV弱毒株感染性克隆pAPRRS的骨架中,构建pAPLV5。经过DNA转染入MARC-145细胞系中,两次传代后,拯救出嵌合病毒vAPLV5。通过对嵌合病毒的全长测序发现,嵌合病毒基因组较亲本病毒发生了碱基突变,突变主要集中于Nsp2和Nsp9位置。将Nsp9位置(病毒的RNA依赖的RNA聚合酶,RNA-dependent KNA povymerase,RdRp)的4处突变位点引入嵌合病毒的感染性克隆pAPLV5,所构建的4个突变嵌合克隆转染MARC-145细胞后无需传代即产生细胞病变(cytopathic effect,CPE),且P0代病毒滴度较原嵌合病毒vAPLV5高。通过半定量负链和亚基因组检测发现,突变嵌合病毒的RNA合成水平也较亲本嵌合病毒高。由此推测PRRSV 5′UTR功能可能与RdRp相关,异源的5′UTR通过突变RdRp来发挥其调控作用,完成病毒拯救过程。
2011年06期 v.19;No.84 7-14页 [查看摘要][在线阅读][下载 1956K] [阅读次数：104 ] |[下载次数：86 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] - 张石磊;于圣青;陈鸿军;丁铲;
根据禽网状内皮组织增生症病毒SNV株的前病毒基因组cDNA序列设计并合成1对引物,以pPB101质粒为模板,通过PCR扩增获得该病毒p30基因片段。将PCR产物克隆入表达载体pCold-HF中,构建的原核表达质粒pCold-p30转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,p30蛋白呈现可溶性表达。用表达产物免疫6周龄BALB/c小鼠,制备p30抗体,经Westernblot和间接免疫荧光法检测,结果发现,原核表达的SNV株p30蛋白具有良好的免疫原性。
2011年06期 v.19;No.84 15-19页 [查看摘要][在线阅读][下载 1101K] [阅读次数：106 ] |[下载次数：183 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 朱小丽;陈少莺;程晓霞;林锋强;陈仕龙;王劭;黄梅清;李兆龙;
为了建立快速、简便的番鸭小鹅瘟病诊断方法,用纯化的小鹅瘟病毒(Goose parpovirus,GPV-PT)免疫BABL/c鼠,取脾细胞和骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA和间接免疫荧光检检(indirect immunofluorescence assay,IFA)筛选,获得3株能稳定分泌抗GPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株(分别命名为D11、7-7和E16)。三株单抗的免疫球蛋白亚类分别为IgM、IgG3和IgM,3株单抗均具有ELISA、IFA和中和特性;其中两株(D11和E16)具有致敏胶乳特性;特异性测定显示3株单抗仅与GPV反应,而与番鸭细小病毒(Duck parpovirus,MPV)、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)、禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)、鸭副粘病毒(Paramyxovirus,PMV)、鸭肝炎病毒(Duck hepatis virus,DHV)、正常细胞和胚液等均无交叉反应;在-20℃保存期为18个月。结果表明3株单抗均具有良好的特异性,为研制免疫学快速诊断奠定了基础。
2011年06期 v.19;No.84 20-24页 [查看摘要][在线阅读][下载 847K] [阅读次数：112 ] |[下载次数：168 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] - 刘振江;刘昊;刘燕瑜;郭欢欢;凡敏;岳云强;陆飞;秦艳青;李国江;鲁会军;金宁一;
为了构建表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒,本研究通过基因重组的方法将辛德毕斯病毒E基因及绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因分别连接至痘苗病毒转移载体pSTK,酶切鉴定得到阳性重组质粒pSTK-SINE-EGFP。采用脂质体转染的方法,将该重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染BHK-21细胞,通过同源重组获得重组痘苗病毒。利用EGFP筛选阳性重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP,收集感染重组痘苗病毒的BHK-21细胞,SDS-PAGE电泳检测辛德毕斯病毒E基因在细胞中的表达情况,Western blot分析表达产物的免疫原性。结果证明辛德毕斯病毒E基因能在重组痘苗病毒vTTVV-SINE-EGFP中获得表达,且表达产物具有良好的免疫原性。表达辛德毕斯病毒E基因的重组痘苗病毒的成功构建,为研制辛德毕斯病毒活载体疫苗奠定了基础。
2011年06期 v.19;No.84 25-30页 [查看摘要][在线阅读][下载 2168K] [阅读次数：117 ] |[下载次数：71 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] - 鲁会军;霍晓伟;任静强;常巧呈;金扩世;金宁一;
为构建Asia1型口蹄疫重组鸡痘病毒疫苗,采集口蹄疫发病牛的水泡液及水泡皮,用RT-PCR法扩增出Asia 1型口蹄疫病毒的前体蛋白基因P1-2A片段和蛋白酶基因3C片段,分别克隆至pMD18-T载体上,通过酶切连接获得质粒pMD18-T-P1-2A-3C。再将P1-2A-3C片段与pUTAL-IL18片段连接起来,构建鸡痘病毒中间转移质粒pUTAL-P1-2A-3C-IL18。通过脂质体转染法,将pUTAL-P1-2A-3C-IL18与鸡痘病毒282E4株共感染染鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEF),通过BrdU三次加压筛选,筛选出重组鸡病毒株vUTAL-P1-2A-3C-IL18。经RT-PCR和间接免疫荧光法鉴定,证明所筛选的1株重组鸡痘病毒在CEF中能正确表达P1-2A-3C基因。本研究为研制安全、高效的亚洲Ⅰ型FMD重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。
2011年06期 v.19;No.84 30-35页 [查看摘要][在线阅读][下载 1525K] [阅读次数：120 ] |[下载次数：84 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ]
- 李莎;韩利方;黄甜;朱景龙;刘毅;黄夕瑶;闫文朝;
目前,妥曲珠利的用药时间和用药途径及其治疗效果存在争议。为了确定妥曲珠利对鸡球虫病的最佳用药时间和途径,本试验以自由饮水和灌服两种途径分别在感染球虫孢子化卵囊后24、48、72 h连续用药2 d,通过抗球虫指数(anticoccidialindex,ACI)、排卵囊减少率和死亡率等指标分析妥曲珠利饮水剂合理用药方案。结果表明,感染后24 h用药妥曲珠利可有效控制鸡柔嫩艾美耳球虫病,48 h后治疗效果不佳;嗉囊灌服的治疗效果优于自由饮水。本试验结果为生产中有效利用妥曲珠利控制鸡球虫病提供了重要依据。
2011年06期 v.19;No.84 36-39页 [查看摘要][在线阅读][下载 744K] [阅读次数：116 ] |[下载次数：163 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] - 黄海滨;盛晓枫;李芬;刘毅;
为查明猪细颈囊尾蚴在犬体内发育为成虫后节片的最早排出时间(潜在前期),将新鲜的猪细颈囊尾蚴经口感染6只无绦虫犬后,采用反复水洗沉淀法检测感染犬粪中排出的第1个绦虫节片,并用特异PCR方法鉴定其种属。结果显示,6只感染犬的潜在前期分别为60、63、65、69、72、73 d。同时,特异性PCR结果显示其序列与Genbank收录的泡状带绦虫序列的相似性为99%,确认犬排出的节片为泡状带绦虫。本研究为建立泡状带绦虫在宿主体内的发育模型提供了一定的基础资料。
2011年06期 v.19;No.84 40-43页 [查看摘要][在线阅读][下载 715K] [阅读次数：100 ] |[下载次数：110 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 阮正祥;陈兴忠;何雪锋;刘君;王芸华;
为探索在电脑显示屏上直接观察、记录和测量球虫卵囊的方法,作者采用漂浮法、麦克马斯特氏法、卵囊培养等方法,并应用电脑和配置有彩色数码摄像机的双目光学显微镜设备,对毕节市的122份山羊粪样进行调查,在电脑显示屏上观察、记录和测量球虫卵囊。结果显示,球虫卵囊的感染率为96.72%,OPG值为600~23 400枚,平均70 57枚,鉴别出艾美耳属球虫8种,并对其卵囊的形态学特征进行了详细地描述。本调查调查结果表明在电显示屏上直接观察、记录和测量球虫卵囊的方法比在显微镜下易于观察鉴别,测量也准确、方便和省力。
2011年06期 v.19;No.84 44-48页 [查看摘要][在线阅读][下载 841K] [阅读次数：105 ] |[下载次数：58 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ]
- 薛梅;
猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种严重危害养猪业的传染病,主要引起妊振母猪的流产、死产、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍和仔猪的呼吸道疾病。本次调查采用RT-PCR对山东省潍坊市7个县20家猪场的送检样品进行PRRSV检测。结果显示,7个县猪场均检出PRRSV阳性,阳性检出率为35%~82%,平均阳性率为67.9%。流行病学调查结果表明,PRRSV感染已在潍坊市猪群中普遍存在,PRRS已成为危害当地养猪业的重要疫病。但各县市之间PRRSV感染率差异较大,在拥有较多小规模猪场的县市阳性率较高;不同日龄猪之间PRRSV感染率及死亡率差异较大,30~60日龄最高;不同品种猪群对该病毒的易感性和感染阳性率差别不大。
2011年06期 v.19;No.84 48-53页 [查看摘要][在线阅读][下载 1167K] [阅读次数：75 ] |[下载次数：89 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] - 李彩英;岳修伟;侯怡轩;顾江萍;王淑杰;刘永刚;蔡雪辉;李培锋;杨志彪;
猪链球菌病是由猪链球菌引起的一种重要人畜共患病,尤其是猪链球菌2型,不仅对猪的致病性最强,而目可感染特定人群并致死,给人类公共卫生和养猪业带来巨大影响。本研究采集临床症状疑似2型猪链球菌感染猪的全血及内脏器官,通过观察菌落形态及培养特征,筛选出可疑样品,纯化培养并进行PCR鉴定,筛选到31株2型猪链球菌,最后用纸片扩散法对临床分离到的2型猪链球菌菌株测定其耐药性,结果显示对5种药物耐药率分别为:80%(AM)、68%(GM)、84%(CHL)、52%(SXT)、55%(CIP)。试验结果表明分离的31株2型猪源性链球菌,均为多重耐药株,且青霉素类药物的耐药性较为严重,这为临床在治疗2型猪链球菌病提供了合理的指导作用。
2011年06期 v.19;No.84 54-59页 [查看摘要][在线阅读][下载 1085K] [阅读次数：165 ] |[下载次数：287 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] - 蒋蔚;刘迎春;陈永军;王权;
为研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,快速检测猪尿中莱克多巴胺(ractopamine,RAC药物残留),采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒,标记莱克多巴胺单克隆抗体并喷于玻璃纤维上制备胶金垫,RAC-BSA偶联抗原和羊抗鼠IgG分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组装并切割成莱克多巴胺胶体金免疫层析快速检测试纸条。试验结果表明该快速检测试纸条的检测限为5 ng/mL,可在8~10 min内完成测试,肉眼即可判断,无需其他检测设备。该试纸条灵敏度、特异性、稳定性和重复性均达到临床使用要求,适用于现场快速检测和筛选工作。
2011年06期 v.19;No.84 59-64页 [查看摘要][在线阅读][下载 727K] [阅读次数：127 ] |[下载次数：389 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：18 ]
- 高飞;孙志;郑海红;袁海峰;刘长龙;陆嘉琦;刘萍;尹扬;袁世山;童光志;
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界养猪业的一个巨大的威胁。近年来,此病给各国养猪业造成了巨大的经济损失。本文立足于反向遗传操作技术,介绍了调控PRRS病毒粒子的感染性、基因组RNA复制、亚基因组mRNA转录以及翻译等重要过程的顺式调控元件的一级序列和高级结构的最新研究进展。
2011年06期 v.19;No.84 65-70页 [查看摘要][在线阅读][下载 355K] [阅读次数：150 ] |[下载次数：109 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 周艳;郑海红;袁世山;
RNA重组是RNA病毒普遍存在的变异方式之一,但仍有很多关键性问题尚未阐释清楚。目前认为重组机制主要有两种,复制型重组机制即模板转换(template-switch),又称为copy-choice机制;另一种为非复制型重组机制,即断裂连接机制(breakage-religation)和类似于剪接的反酯作用(splicing-like transesterification)机制。由于重组在病毒进化变异过程中发挥着不同的作用,阐明重组机制有助于研究病毒进化变异和复制转录等生命周期过程。本文拟就RNA重组类型、重组机制、对RNA病毒重组的研究、重组的生物学意义及应用4个方面,综述RNA病毒重组机制及其研究进展。
2011年06期 v.19;No.84 71-76页 [查看摘要][在线阅读][下载 628K] [阅读次数：112 ] |[下载次数：419 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：18 ] - 丁娜;孙英杰;丁铲;
Toll样受体家族(Toll-like receptors,TLRs)作为一种膜表面分子,是模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)的主要组分,在脊椎动物和无脊椎动物中都可识别入侵的病原体相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)。通过对鸡和斑胸草雀的基因组进行比对分析,发现禽中存在10种Toll样受体,其中TLR2 a、b、3、4、5和7已经证明和哺乳动物同源;有些经过基因倍增生成两个基因,TLR1La和TLR1Lb,TLR2 a和2 b;禽TLR21可能与鱼类和两栖动物的同源;禽TLR15是禽类特有的一类受体。各种禽Toll样受体在抵御各种微生物的感染过程中发挥各自重要的作用,本文就禽Toll样受体的研究进展进行简要综述。
2011年06期 v.19;No.84 77-83页 [查看摘要][在线阅读][下载 353K] [阅读次数：127 ] |[下载次数：777 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：31 ]