- 何平;杨文娟;李法凯;赵卫锋;周华波;李瑞凯;梁明丽;韦红云;何剑桥;祝健;韦祖樟;黄伟坚;陈樱;
本研究采用MDCK细胞从养殖场患病猪的鼻拭子样品中分离获得1株猫的杯状病毒(Feline calicivirus,FCV),命名为GX01-2013。采用RT-PCR方法扩增了该毒株的全基因组,并进行了序列测定和分析。结果表明,该毒株基因组全长7704 bp,与哈尔滨分离株HRB-SS较为相近,其核苷酸同源性为82.3%。根据FCV衣壳蛋白构建的遗传进化树分析,发现该病毒与F9、F4、225和2024疫苗株均不在同一分支,氨基酸同源性为84.2%~87.7%,各毒株间无明显地域差异。此外,VP1蛋白的E区(426~521aa)发现有4个中和性抗原位点发生改变。
2016年01期 v.24;No.109 1-6页 [查看摘要][在线阅读][下载 851K] [阅读次数:125 ] |[下载次数:597 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:9 ] - 丁明洋;戚伟强;陈宗艳;朱杰;吴巧梅;缪秋红;李传峰;吴润;刘光清;
该研究旨在建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)的荧光定量PCR诊断方法。本实验以感染新型鸭呼肠孤病毒的鸭组织RNA提取物为模板,根据Gen Bank数据库中呼肠孤病毒S1基因全序列,设计合成了一对特异性引物,PCR扩增基因片段,将其克隆至p ET-30a载体,重组质粒测序并进行同源性分析;以阳性质粒为模板,建立SYBR Green II荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性和特异性检测。经测序证实扩增片段与预期目的片段相符,所建立的SYBR Green II荧光定量PCR检测S1的反应在101~108 copies/u L之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10 copies/μL,而H5型禽流感病毒、H9型禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、C型鸭肝炎病毒、新城疫病毒、鹅细小病毒、鸭瘟病毒等病毒的检测为阴性,表明该方法敏感、特异。本研究成功建立了SYBR Green II荧光定量PCR检测新型鸭呼肠孤病毒的方法,为新型鸭呼肠孤病毒致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台。
2016年01期 v.24;No.109 7-14页 [查看摘要][在线阅读][下载 973K] [阅读次数:102 ] |[下载次数:384 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:18 ] - 汪招雄;欧阳金旭;杨玉莹;杨丰利;江涛;陈雪娇;
为了解湖北省规模化蛋鸡场H9N2亚型禽流感疫苗的免疫效果,本研究在2014年1月至12月从湖北省13个地区选择不同规模化蛋鸡场,随机采集蛋鸡血样2189份,用血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验测定了H9N2亚型禽流感抗体滴度。对样本检测结果进行统计与分析显示,1月份到5月份样本HI抗体滴度平均值呈上升趋势,1月份检测的样本抗体滴度最低,为9.26log2,5月份检测的样本抗体滴度最高,为12.34log2。13个不同地区样本抗体滴度存在一定的差异,抗体滴度最低地区的平均值为5.76log2,滴度最高地区为11.58log2。对不同日龄蛋鸡样本检测结果分析显示,随着日龄增长,样本平均抗体滴度值呈现逐渐上升趋势,蛋鸡日龄≤120 d的样本抗体滴度平均值最低,为10.21log2,300日龄以上的蛋鸡样本抗体滴度平均值最高,为11.31log2。检测结果表明,湖北省规模化蛋鸡场H9N2亚型禽流感的平均抗体滴度值水平总体良好,合格率和优秀率较高,但不同地区、不同日龄和不同月份蛋鸡H9N2亚型禽流感抗体存在差异。
2016年01期 v.24;No.109 15-21页 [查看摘要][在线阅读][下载 831K] [阅读次数:106 ] |[下载次数:209 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:8 ] - 刘健;李鑫;徐锋;杨显超;邓波;杨德全;鞠厚斌;葛杰;龚国华;周锦萍;
采用直接免疫荧光和测序方法对5株病毒分离株进行了病毒的鉴定;并采用免疫学、化学和生物学方法对这5株病毒分离株进行了研究。结果显示,5株病毒分离株被鉴定为猫疱疹病毒I型;g D序列未发生变化;病毒仅在F81细胞中增殖,能引起F81细胞明显的细胞病变;猫、公鸡、人O型、牛、猪、兔、绵羊的红细胞不具有凝集作用;病毒对pH3.0、有机溶剂和60℃高温敏感;病毒蚀斑形成单位为3×10~6个PFU/m L,纯化株TCID50值为10~(-5.0)TCID_(50)/0.1m L。该研究结果表明,上海地区宠物猫存在猫传染性鼻气管炎流行风险,其病原为猫疱疹病毒I型且部分病原特性未发生变化。
2016年01期 v.24;No.109 22-26页 [查看摘要][在线阅读][下载 857K] [阅读次数:131 ] |[下载次数:661 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:16 ] - 冯琳琳;滕巧泱;闫丽萍;李雪松;申之义;李泽君;
为建立H7N3亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)A/Duck/Zhejiang/690/2009(H7N3)(ZJ690)、A/Duck/Zhejiang/766/2009(H7N3)(ZJ766)反向遗传操作系统,本研究采用8质粒系统共转染293T细胞,成功拯救出了R-ZJ690和R-ZJ766 2株病毒。对获救病毒株进行全基因序列的测定,证实获救病毒的序列与亲本毒的序列完全一致。将H7N3亚型AIV亲本毒ZJ690株、ZJ766株和拯救病毒R-ZJ690株、R-ZJ766株均以106EID50剂量经鼻腔感染6周龄BALB/c小鼠,病毒均引起小鼠的体重下降但不造成死亡,感染后d4,仅在小鼠的鼻和肺中可以分离到病毒。由此可见,R-ZJ690、R-ZJ766与其亲本毒ZJ690株、ZJ766株保持了一致的生物学特性。本研究成功建立了H7N3 AIV ZJ690、ZJ766株的反向遗传操作系统,为H7亚型AIV的致病机理和跨宿主传播机制研究等奠定了基础。
2016年01期 v.24;No.109 27-31页 [查看摘要][在线阅读][下载 822K] [阅读次数:109 ] |[下载次数:153 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] - 宫晓倩;阮宝阳;刘晓敏;张鹏;汪琪;汪秀会;周艳君;李泽君;童武;郑浩;童光志;于海;
核糖体移码蛋白PA-X是流感病毒的一种新型蛋白,为了研究该蛋白对于猪流感病毒的生物学特性的影响,我们进行了PA-X特有序列的原核表达、蛋白纯化及其鉴定。通过RT-PCR和重叠PCR方法扩增PA-X特有序列的基因,利用基因重组技术构建原核表达载体,并进行菌液PCR和菌液测序鉴定,鉴定正确后克隆转化到BL21(DE3)中,进行蛋白表达及可溶性分析,同时用镍柱亲和层析法对其进行纯化。通过菌液PCR序列鉴定,PA-X特有序列的原核表达载体序列正确,编码框正确。转化BL21后目的蛋白表达成功,且大多数为可溶性蛋白。Western blot结果表明制备的多克隆抗体具有良好的免疫反应性。
2016年01期 v.24;No.109 32-37页 [查看摘要][在线阅读][下载 826K] [阅读次数:163 ] |[下载次数:154 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] - 唐井玉;李传峰;宫晓华;李琦;丁明洋;陈宗艳;王桂军;刘光清;
根据犬细小病毒(Canine Parvovirus,CPV)SH14株基因序列设计引物,采用PCR方法扩增CPV VP2基因,经Bam HⅠ、XhoⅠ双酶切后,将其克隆至p GEX-4T-1载体,构建重组表达载体p GEX-4T-VP2,经酶切鉴定和测序验证正确后转化大肠杆菌BL21中进行诱导表达,应用SDS-PAGE法检测蛋白的表达。然后,使用纯化的重组VP2蛋白制备其兔源多克隆抗体,分别应用蛋白免疫印迹、间接免疫荧光检测该抗体的免疫原性。结果表明,p GEX-4T-VP2能在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达,所制备的兔抗CPV-VP2抗体能与重组蛋白和病毒蛋白发生特异性反应。本研究为研发CPV亚单位疫苗、检测技术及致病机理研究等奠定了物质基础。
2016年01期 v.24;No.109 38-43页 [查看摘要][在线阅读][下载 880K] [阅读次数:125 ] |[下载次数:206 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ]
- 蒋蔚;易力;陈永军;何再平;白雪瑞;赵梦苏;刘景云;王权;
霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌是引起全球范围的食源性疾病的重要病原菌,建立一种能准确鉴别这3种弧菌的方法具有重要意义。groEL基因是包括弧菌属在内的多种细菌检测的分子标记。本研究根据3种弧菌的groEL基因分别设计引物,经PCR扩增及反应条件的优化,建立一种能同时检测这3种弧菌的多重PCR方法。结果表明应用多重PCR技术对霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌能分别特异性地扩增出418、644、192 bp的目的片段。检测其他非目标供试菌时,不出现任何扩增条带。敏感性检测结果表明,对霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌最低检测限分别为102、102、103CFU/m L。人工染菌水产品检测结果显示,所建立的多重PCR方法能够有效检测出目的细菌,而未染菌组均为阴性。本文通过建立的多重PCR方法实现了对这3种弧菌的同时检测,具有快速、灵敏度高和特异性强等优点,对水产品中这3种弧菌的检测和流行病学调查具有重要意义。
2016年01期 v.24;No.109 44-51页 [查看摘要][在线阅读][下载 955K] [阅读次数:99 ] |[下载次数:575 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:19 ] - 李伦锋;魏建超;谢春阳;彭帅;李蓓蓓;刘珂;邵东华;邱亚峰;史子学;马志永;
以猪链球菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪支气管败血波氏杆菌、猪致病性大肠杆菌、化脓性链球菌7株猪呼吸道常见菌为实验菌,检测猪小肠抗菌肽对常见的猪呼吸道菌的抑菌效果。结果显示,猪小肠抗菌肽对这7株呼吸道菌均有不同程度的抑菌作用,对化脓性链球菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌作用最为明显,最小抑菌浓度均为49.5μg/m L,对猪链球菌和大肠杆菌也有较为明显的抑菌活性,而对猪支气管败血波氏杆菌的最小抑菌浓度为398μg/m L。当前在抗生素大量使用导致细菌产生广泛的耐药性的情况下,抗菌肽以其具有抗菌谱广、无毒、稳定性高、不易产生耐药性且在体内无残留等优点,使抗菌肽抑菌活性的研究显得尤为重要。
2016年01期 v.24;No.109 52-56页 [查看摘要][在线阅读][下载 854K] [阅读次数:113 ] |[下载次数:196 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:10 ] - 胡利群;刘俞君;郭利伟;杨小林;刘国平;
利用大肠杆菌表达猪水肿病大肠杆菌的水肿毒素SLT-IIe B,提取表达产物包涵体,再加入自行分离的我国流行的猪水肿病大肠杆菌Ee株(O139),和油乳佐剂乳化后制成亚单位菌苗,免疫昆明鼠,间隔2 w加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒素的ELISA抗体和Ee株的凝集效价,第2次免疫2 w后用5LD50的猪水肿病大肠杆菌Ee株进行攻毒。结果显示,亚单位菌苗组与灭活菌苗组ELISA抗体水平有显著性差异,两种疫苗对Ee的保护力分别为90%和70%。本研究表明新型亚单位菌苗模式对同型菌株具有较好的保护力,为进一步研制高效的亚单位菌苗打下基础。
2016年01期 v.24;No.109 57-61页 [查看摘要][在线阅读][下载 786K] [阅读次数:83 ] |[下载次数:92 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ]
- 王自文;董辉;赵其平;夏伟丽;朱顺海;门启婓;李聪;朱雪龙;韩红玉;黄兵;
为了筛选出柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶(Et CDPK4)在虫体内发挥作用时的作用受体即相互作用蛋白,构建了能够应用于筛选柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交c DNA文库的诱饵重组质粒p GBKT7-Et CDPK4,本研究以柔嫩艾美耳球虫子孢子为材料,提取了总RNA,经反转录得到c DNA第一链,利用PCR的方法扩增获得了该基因大小为1660 bp的Et CDPK4的功能区片段,并将其连接于酵母BD诱饵p GBKT7载体上,经双酶切鉴定和序列分析,以及检测了p GBKT7-Et CDPK4在酵母双杂交系统中的自激活、细胞毒性和表达情况。结果显示,成功构建了酵母双杂交诱饵重组质粒p GBKT7-Et CDPK4,在酵母双杂交系统中没有自激活活性和细胞毒性,且在酵母细胞Y2HGold中能够进行表达。表明所构建的诱饵质粒p GBKT7-Et CDPK4可以应用于酵母双杂交系统中,用于筛选柔嫩艾美耳球虫子孢子酵母双杂交c DNA文库,获得可能与Et CDPK4具有相互作用的蛋白质。
2016年01期 v.24;No.109 62-69页 [查看摘要][在线阅读][下载 917K] [阅读次数:110 ] |[下载次数:129 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] - 韩娇娇;夏茂华;吴秀山;李复煌;罗毅;郑常明;张成林;潘保良;
北京动物园因引进羊驼携带疥螨,并造成了数只羊驼患疥螨病死亡。在对该病例进行分析和确诊的基础上,对该群羊驼进行了防治,成功治愈了剩余的羊驼。本病例提示我们,疥螨是一种传染性、致病性很强的寄生虫病,在引进羊驼时需要采取有效的隔离和防治措施,严防疥螨引入;羊驼有特殊的生理特点,使用药物防治羊驼疥螨病时,不能照搬其他动物疥螨病的用药方案。本病例的治疗方案:给羊驼的患部涂搽高效氯氰菊酯油剂,每次涂搽20~30 m L,每周涂搽2次;同时给羊驼皮下注射0.6 mg/kg的乙酰氨基阿维菌素注射剂,每周给药2次;连续给药1个月左右。以上方案有效治愈了羊驼的疥螨病,为今后我国羊驼疥螨病防治提供了参考。
2016年01期 v.24;No.109 70-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 902K] [阅读次数:358 ] |[下载次数:194 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:12 ]