- 汪凯;蔡骁垚;叶建强;刘红梅;张泉;刘芹防;李泽君;陈鸿军;
2015年在江苏省某养鸡场疑似心包炎-包涵体肝炎病死鸡肝脏中分离获得1株病毒,经SPF鸡胚4代纯化,并针对其hexon基因设计特异性引物进行PCR扩增,测序结果表明该分离株属于I群禽腺病毒(Fowl adenovirus,FAdV)血清4型,命名为JS7株。ORF29和fiber2基因测序分析表明,该毒株为最近在国内流行的新型突变株。JS7株以1000 ELD_(50)病毒量肌肉接种21日龄雏鸡,5 d内呈现80%死亡率,剖检可见典型的心包炎、肝炎症状,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、气管、法氏囊、脑、小肠、盲肠、腺胃、胸腺、胰脏中均能检测到病毒分布;H&E染色结果显示,在组织切片中,肝脏呈现典型的嗜碱性核染色,其他组织脏器也呈现不同程度的病理变化。可见JS7株在雏鸡中具有较强的致病性及广泛的组织嗜性。
2016年04期 v.24;No.112 1-6页 [查看摘要][在线阅读][下载 1223K] [阅读次数：103 ] |[下载次数：322 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：27 ] - 孟琼;孔宁;单同领;吴永光;左叶雯;童武;郑浩;李国新;于海;童光志;徐永杰;
本研究获得5个猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1基因截短基因,原核表达后制备多克隆抗体。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、Western blot和间接免疫荧光检测(indirect immunofluorescence assay,IFA)显示,仅有SE蛋白诱导的多克隆抗体具有免疫活性。因此以SE蛋白为抗原建立间接ELISA抗体检测方法,优化各反应参数并确定临界值为0.155。经特异性和符合性分析,该ELISA检测方法具有PEDV特异性,符合率为93.7%。批内、批间重复率变异系数均小于10%,表明建立的iELISA方法重复性良好。抗S蛋白的ELISA检测方法的建立为PEDV血清学抗体检测和疫苗评估奠定了基础。
2016年04期 v.24;No.112 7-12页 [查看摘要][在线阅读][下载 689K] [阅读次数：111 ] |[下载次数：148 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] - 于周璐;滕巧泱;崔宏锐;荣广玉;李雪松;杨健美;陈鸿军;李泽君;
动物流感DNA疫苗是非常有应用前景的新型疫苗之一,本研究构建了能同时表达禽流感病毒2种血凝素H5HA和H9HA以及1种神经氨酸酶N1NA的真核表达质粒。间接免疫荧光结果表明,构建的真核表达质粒转染MDCK细胞后,同时表达出H5HA、H9HA和N1NA蛋白;转染293T细胞上清通过血凝试验可检测到2~4血凝价;通过透射电镜观察到了病毒样颗粒。本研究用一种质粒同时表达不同亚型流感病毒蛋白并且形成了病毒样颗粒,为流感病毒多价DNA疫苗研究提供了坚实基础。
2016年04期 v.24;No.112 13-18页 [查看摘要][在线阅读][下载 624K] [阅读次数：173 ] |[下载次数：110 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 杨永立;王培坤;邹广珍;林璐璐;韦平;
为了解J亚群禽白血病病毒(subgroup J Avian leukosis virus,ALV-J)在广西省鸡群中的变异趋势,对2013~2015年现场分离到的8株ALV-J毒株的gp85基因进行PCR扩增、克隆、测序及分析比较。结果表明,8株分离病毒核苷酸及氨基酸序列同源性依次为92.5%~99.8%和89.2%~100%,与原型株HPRS-103的同源性依次为92.8%~98.1%和88.6%~97.1%,与国内外其他分离株的同源性为92.9%~99.9%和87.6%~99.4%。位点的有义突变和沉默突变的比例显示,除了2014年的1个分离株GX14YY17的高变区(hypervariable region 1,hr1)外,均未发现选择压对连续几年的分离株的gp85基因有明显的作用。
2016年04期 v.24;No.112 19-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 1164K] [阅读次数：106 ] |[下载次数：105 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] - 朱小甫;吴旭锦;
为建立一种能够鉴别伪狂犬病毒gE基因缺失疫苗毒与野毒套式PCR方法,根据GenBank上发表的伪狂犬病毒gD、gE基因序列,设计并合成了4对引物,对反应体系和条件进行优化,建立复合套式PCR方法。通过灵敏性试验、特异性试验、病料中PRV检测对比等方法验证建立方法的适用性。结果表明,该方法检测的极限为2.78×10~(-4)pg/L,并且仅能从PRV野毒株扩增出354、217 bp目的条带,PRV疫苗扩增出了217bp单条带,其他5种常见感染猪的病毒均为阴性。
2016年04期 v.24;No.112 26-30页 [查看摘要][在线阅读][下载 573K] [阅读次数：143 ] |[下载次数：149 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] - 何世成;邹玖零;王卫国;王昌建;唐小明;林源;鲁杏华;邱立新;
对GenBank中的小反刍兽疫野毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)及疫苗毒株的基因序列进行分析,设计两对引物和两条特异探针,建立小反刍兽疫病毒野毒与疫苗毒株的双重荧光RT-PCR鉴别检测方法。特异性检测表明,建立的双重荧光RT-PCR方法,可特异检测野毒(FAM通道)和疫苗毒(VIC通道)。灵敏度实验表明,FAM通道可检测到10~(-5)稀释度的RNA(3.576 ng/mL),VIC通道可检测到10~(-3)稀释度的RNA(27.6 ng/mL)。重复性实验表明,该双重荧光RT-PCR方法重复性较好。用建立的二重荧光RT-PCR方法对20份组织样品进行检测,结果显示,该方法可以有效区分野毒和疫苗毒株,且野毒检测结果与实验室确诊阳性结果一致,可以用于临床检测。
2016年04期 v.24;No.112 31-35页 [查看摘要][在线阅读][下载 651K] [阅读次数：146 ] |[下载次数：148 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ]
- 王艳;张小文;王政;邱璐;
通过时GenBank中马鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderia mallei)、亨德拉病毒(Hendra virus,Hev)和西尼罗热病毒(West nile virus,WNV)的主要基因进行分析比较,分别设计合成了引物和TaqMan荧光探针,对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能同时检测这3种病原的三重实时荧光定量PCR方法。本研究建立的三重荧光定量PCR具有良好的特异性、敏感性和重复性,适合于大批量样品的检测,可广泛用于出入境马匹这3种病原体的检疫。
2016年04期 v.24;No.112 36-40页 [查看摘要][在线阅读][下载 912K] [阅读次数：114 ] |[下载次数：102 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 徐旺烨;樊琛;乔薪瑗;唐丽杰;刘敏;王丽;徐义刚;姜艳平;崔文;李一经;
本研究从鸡泄殖腔取样,分离大肠杆菌菌株,进行生化鉴定。结果显示34株菌株符合大肠杆菌的培养特性。将分离得到的34株大肠杆菌与购买的4株鸡大肠杆菌分别接种鸡胚,对致病力进行分析。结果采用数据处理软件SPSS分析90%置信区间,其中19株为致病力较强菌株(致死率大于上限38.4%),16株为致病力较弱或无致病力菌株(致死率小于下限25.1%),3株为中等致病力菌株(致死率在上限和下限之间)。通过套式PCR对38株菌的iss基因进行检测,阳性率为100%。结果表明,iss基因(increased serum survival gene)在鸡大肠杆菌中广泛存在,38株鸡大肠杆菌均有iss基因,但致病力大小不同,故推测致病力大小可能与iss基因的存在无关。
2016年04期 v.24;No.112 41-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 1001K] [阅读次数：107 ] |[下载次数：251 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] - 刘丽娜;钟乃凤;王赟;周静;张洁;
为研究金黄色葡萄球菌疫苗候选抗原SirH和StbA及其抗血清的免疫保护作用,分别用纯化蛋白StbA、SirH以及甲醛灭活的金黄色葡萄球菌为免疫原免疫小鼠,收集抗血清,测定血清效价,然后用致死剂量的金黄色葡萄球菌攻击,评价两种抗原的免疫保护作用。分别用SirH和StbA抗血清免疫小鼠,4 h后用致死剂量的金黄色葡萄球菌攻击,评价抗血清的保护作用。结果显示,StbA和SirH抗血清效价均为1:1 638 400。金黄色葡萄球菌攻击主动免疫小鼠,SirH纯化蛋白免疫组(60%)和StbA纯化蛋白免疫组(70%)存活率均明显高于对照组(0%)(P<0.05),金黄色葡萄球菌全菌免疫组(20%)存活率与对照组(0%)差异不具备显著统计学意义(P>0.05)。SirH纯化蛋白免疫组(60%)和StbA纯化蛋白免疫组(70%)存活率均高于金黄色葡萄球菌全菌免疫组(20%)。将抗血清免疫小鼠后,用金黄色葡萄球菌腹腔内注射攻击小鼠,免疫组小鼠16~18 h内全部死亡,而对照组小鼠在攻毒后12~14 h内全部死亡。结果表明,SirH和StbA是具有潜力的保护性抗原,但其抗血清都不具有保护作用。
2016年04期 v.24;No.112 48-51页 [查看摘要][在线阅读][下载 466K] [阅读次数：119 ] |[下载次数：56 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 杨铭伟;剡根强;王静梅;王树杰;王学;
为研发用于预防犊牛支原体肺炎及关节炎灭活油佐剂疫苗并评价其免疫效果,本研究采用牛支原体(Mycoplasma bovis,M.bovis)新疆分离株做为制苗菌株,经牛支原体专用液体扩大培养基培养后进行膜分离浓缩、甲醛灭活,加入油佐剂乳化制备牛支原体灭活疫苗,经无菌检验、实验动物安全性检验及乳化效果检测后进行犊牛免疫效果测定。结果显示,免疫组犊牛在二免后14 d,血清中M.bovis抗体达到0.465(OD_(450)),3头攻毒犊牛均保持良好的精神状态且体温变化不明显,临床症状综合评分为3,肺脏解剖学及病理组织学观察无异常,肺脏病变指数为2且肺脏中未分离回收到M.bovis;未免疫对照组犊牛同期血清M.bovis抗体为0.142(OD_(450)),3头攻毒犊牛均先后出现体温升高、轻度咳喘、脓性鼻液、明显消瘦等症状,临床症状综合评分为11,肺脏病变指数为17,肺脏尖叶、心叶及部分膈叶均表现明显肝变,2头犊牛表现胸膜与肺脏黏连,1头犊牛整个尖叶广泛分布黄白色蚕豆状大小坏死性结节,与自然感染病例相同,病理组织学观察显示肺泡腔和支气管中有大量中性粒细胞浸润,支气管管壁充血、水肿,肺脏部分坏死灶呈均质红染,为典型的化脓性及坏死性肺炎变化,从病变肺组织中均分离回收到M.bovis。结果表明,本研究制备的牛支原体灭活疫苗给犊牛免疫后能产生良好的免疫应答反应,并能抵抗M.bovis感染所致的肺脏病变作用。
2016年04期 v.24;No.112 52-58页 [查看摘要][在线阅读][下载 1218K] [阅读次数：99 ] |[下载次数：223 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ]
- 吴斯宇;黄健妮;崔进;冯赛祥;欧阳国文;向程威;郭旸;廖明;焦培荣;
根据大肠杆菌密码子的偏好性对GenBank中发表的鸡β干扰素基因序列进行密码子优化与人工合成,构建原核表达质粒pET-28b-ChIFN-β,重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,产物主要以包涵体形式存在。包涵体进行变性、复性和镍柱亲和纯化后,SDS-PAGE、Western blot分析表明pET-28b-ChIFN-β表达正确,并且表达量较高。重组鸡β干扰素蛋白在DF-1细胞上能明显抑制水疱性口炎病毒繁殖,抗病毒活性达2.73×10~6UI/mg。本研究结果为鸡β干扰素在临床防治禽类病毒性疾病的探索奠定了基础。
2016年04期 v.24;No.112 59-63页 [查看摘要][在线阅读][下载 777K] [阅读次数：156 ] |[下载次数：216 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] - 王春梅;林析;张可煜;张丽芳;田玉柱;费陈忠;张晓晓;赵娟;肖遂;王霄旸;王米;郑文丽;薛飞群;
本研究的目的是建立检测SD大鼠血浆内AC4的分析方法,考察高、中、低3个剂量的AC4在SD大鼠体内的药代动力学特征,获得主要的药代动力学参数。采用超高液相色谱法检测SD大鼠血浆内AC4含量,使用乙酸乙酯作为提取溶剂,妥曲珠利亚砜作为内标。研究表明,建立的方法专属性良好,标准曲线定量范围0.08~80μg/mL,线性关系良好;准确度和精密度均能达到检测目的,样品在室温放置8 h或者反复冻融3次后稳定;该方法灵敏、准确,可以用于检测SD大鼠血浆内AC4含量。药时曲线下面积和最大血药浓度存在剂量正相关关系,给药后4~5 h达到最大血药浓度,生物消除半衰期在不同性别、不同剂量组之间存在较大差异,AC4在SD大鼠的药动学存在较为明显的性别差异。本研究结果为AC4后期研究和临床合理应用提供了参考依据。
2016年04期 v.24;No.112 64-71页 [查看摘要][在线阅读][下载 948K] [阅读次数：110 ] |[下载次数：96 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ]