- 曲昱蓉;詹媛;仇旭升;谭磊;孙英杰;宋翠萍;孟春春;丁铲;
为了研究泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)具体参与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)复制的哪个阶段,本研究通过在NDV感染不同阶段加入泛素-蛋白酶体系统抑制剂MG-132,结合使用蛋白酶K试验证明泛素-蛋白酶体系统并未参与NDV入侵细胞的过程,而是参与了NDV入侵细胞之后的复制早期阶段(0~6 h)。再利用蔗糖密度梯度离心试验分离细胞内体,使用针对内体标志蛋白Rab5的抗体确定内体位于第8~10层。建立了检测Herts/33毒株P基因的绝对荧光定量方法,绘制了标准曲线。并通过该绝对荧光定量法比较MG-132和DMSO处理的细胞内体中病毒含量,发现使用抑制剂处理的细胞内体所在层中病毒含量较高,提示蛋白酶体抑制剂可以使NDV滞留于细胞内体中。本研究首次证明泛素-蛋白酶体系统参与了NDV进入细胞后从内体释放出来的过程。
2017年06期 v.25;No.120 1-7页 [查看摘要][在线阅读][下载 1170K] [阅读次数：94 ] |[下载次数：156 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 王宾宾;闫大为;倪欣涛;李雪松;滕巧泱;杨健美;陈鸿军;刘芹防;李泽君;
本文采集2015年浙江省2个鸭养殖场中疑似鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)感染的雌麻鸭卵巢病料,经组织研磨处理,DF-1细胞纯化,成功分离了2株鸭坦布苏病毒(DTMUV),分别命名为ZJ201501和ZJ201504。利用9对两两相互重叠的PCR引物,对这2株病毒的全基因进行分段PCR扩增,经序列测定和拼接,得到病毒的全基因组序列。核苷酸序列和E蛋白氨基酸序列比对分析发现:ZJ201501和ZJ201504的核苷酸同源性高达99.9%,全长氨基酸仅有2个位点差异;与选取的19株DTMUV参考序列相比,在核苷酸水平和E蛋白氨基酸水平上,其同源性分别大于97.1%和98.4%,而ZJ201501和ZJ201504与早期分离的DTMUV FX2010遗传距离最远,这表明DTMUV在鸭群中发生了一定的变异。本研究为进一步了解DTMUV的遗传进化提供了理论依据。
2017年06期 v.25;No.120 8-14页 [查看摘要][在线阅读][下载 1248K] [阅读次数：120 ] |[下载次数：412 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] - 覃勇;黄文炳;黄金山;赵聪;唐云姣;班雪花;施开创;
为探索和评估口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)、猪瘟(classical swine fever,CSF)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征(highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome,HP-PRRS)的合理免疫程序,选择6个规模猪场,其中3个猪场采用"332法"免疫程序(即先用FMD和CSF疫苗同时在颈部两侧注射,间隔14 d后再用HP-PRRS疫苗注射),另3个猪场采用"321法"免疫程序(即将CSF和HP-PRRS疫苗混合后作1针在颈部一侧注射,FMD疫苗作1针在颈部另一侧注射),每季度采集血清和病死猪组织样品。应用ELISA方法检测血清中的FMD、CSF和HP-PRRS抗体,应用RT-PCR方法检测组织样品中的FMD、CSF和HP-PRRS病原体;统计分析抗体阳性率、发病率、死亡率、死亡猪病原阳性率等评价指标。结果显示,应用"321法"的3个猪场与应用"332法"的3个猪场相比,其生猪死亡率(下降1.3%)、HP-PRRS病原体阳性率(下降6.6%)显著下降(P<0.05),而其他考核指标则差异不具备显著统计学意义(P>0.05)。本研究表明,规模猪场应用"321法"免疫程序的免疫效果优于"332法"免疫程序的免疫效果,值得在临床推广应用。
2017年06期 v.25;No.120 15-22页 [查看摘要][在线阅读][下载 1181K] [阅读次数：84 ] |[下载次数：119 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] - 马秀丽;刘存霞;亓丽红;胡峰;裴宗飞;于可响;黄兵;李玉峰;宋敏训;艾武;
从山东省一起疑似禽肺病毒感染的病例中分离到1株H9亚型禽流感病毒(H9 subtype Avian influenza virus,AIV-H9),未分离到禽肺病毒(Avian metapneumovirus,APV),但血清学检测发现APV-ELISA抗体参差不齐。根据已公布的APV的G基因和AIV-H9的HA基因序列分别设计合成引物,进行RT-PCR扩增,结果得到大小为692 bp和1683 bp的目的条带;测序分析发现,该发病鸡场感染的APV(SD/RZ/15)G基因片段与Genbank中登录的B型APV核苷酸序列同源性最高(92.1%~-94.5%)且遗传距离最近,处于同一个分支。分离到的AIV-H9毒株(CK/SD/RZ/H9/15)的HA基因与参考毒株的核苷酸序列同源性为87.3%~98.9%,遗传进化关系分析表明该分离毒株与近几年分离的H9处于同一个分支上。综合上述试验结果,确定该病例为B型APV与AIV-H9的混合感染引起。
2017年06期 v.25;No.120 23-27页 [查看摘要][在线阅读][下载 1288K] [阅读次数：86 ] |[下载次数：99 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] - 于可响;侯艳霞;胡峰;亓丽红;刘存霞;路晓;黄兵;宋敏训;
将Ⅰ群4型禽腺病毒卵黄抗体注射到SPF鸡体内,通过测定不同时间点鸡血清的抗体效价,确定卵黄抗体在体内的消长规律。结果发现,注射后6 h即可在实验鸡体内检测到较高水平的抗体,平均中和效价达到1:82,12 h抗体水平达到高峰,平均中和效价为1:124,然后逐渐降低,到12 d抗体平均效价降至1:13。卵黄抗体注射后3、6、9、12 d,利用Ⅰ群4型禽腺病毒进行攻毒试验,结果显示,抗体注射后6 d(体内平均中和抗体为1:36)能起到完全保护作用,9 d(体内平均中和抗体为1:22)只能产生部分保护作用,12 d(体内平均中和抗体为1:13)完全起不到保护作用。
2017年06期 v.25;No.120 28-31页 [查看摘要][在线阅读][下载 1125K] [阅读次数：140 ] |[下载次数：248 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] - 赵卫锋;何平;周华波;丁仰保;陈泉江;刘琳;李瑞凯;邹媛婧;廖卓韵;王凌霄;韦祖樟;欧阳康;孙文博;黄伟坚;陈樱;
本研究通过建立犬流感病毒(Canine influenza virus,CIV)感染BALB/c小鼠模型,探索新发现的甲流重组CIVs对小鼠的致病性。我们采用9株H1N1和1株H3N2甲流重组CIVs,以106 TCID_(50)/mL的剂量滴鼻攻毒10组小鼠。结果表明:感染后4 d小鼠体重均有一定程度的下降,其中A/Canine/Guangxi/LZ56/2015(H1N1)(简称LZ56)组的小鼠体重下降最为明显(P<0.5),其存活率为77.78%;通过TCID_(50)测定发现10株甲流重组CIVs均能在小鼠的鼻窦和肺脏复制,以LZ56组的复制滴度最高,分别达到107.3 TCID_(50)/mL和10~(5.3) TCID_(50)/mL;肺脏病理切片观察发现LZ36、LZ45、LZ56和QZ5组出现不同程度病变,以支气管上皮细胞坏死脱落,肺泡壁增厚,肺泡腔以及支气管内有大量的弥漫性浸润的单核细胞为主要特征。结果表明,新型重组CIVs均能感染BALB/c小鼠,并能在小鼠体内较好复制,甚至致死,一旦这些新型CIVs以犬为中间宿主传播给人,势必对人类健康构成重大威胁。因此,加强对CIVs的监测将为防控人流感大暴发提供提前预警。
2017年06期 v.25;No.120 32-36页 [查看摘要][在线阅读][下载 1891K] [阅读次数：114 ] |[下载次数：165 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] - 戴建华;孟春春;高崧;丁铲;
为了比较Class Ⅰ新城疫弱毒JS10株和Class Ⅱ新城疫弱毒La Sota株免疫雏鸡后的免疫损伤和黏膜应答情况。本研究将60只SPF白来航鸡,随机分成A、B、C 3组。7日龄时,A组和B组分别用JS10株和La Sota株进行滴鼻、点眼免疫,C组以同样方式接种PBS,并于免疫后的d1、4、7、14,每组随机抽取5只扑杀,分别收集唾液、气管、肺和肠的冲洗液,使用双夹心ELISA试剂盒测定SIgA、IgM和IgY的抗体水平。结果显示,2株病毒均未产生免疫损伤;JS10株产生的黏膜抗体水平均高于La Sota株,并且免疫后的d7、14的唾液、气管和肠冲洗液中的SIgA的抗体水平以及肺中IgY抗体水平均显著高于La Sota(p<0.05)。研究表明,2株新城疫弱毒滴鼻、点眼后都能诱导消化道和呼吸道产生强烈的黏膜免疫反应,并且与免疫后的日龄存在明显相关性。由于JS10株可诱导更好的黏膜免疫应答,提示其可作为新型新城疫弱毒疫苗的候选株。
2017年06期 v.25;No.120 37-42页 [查看摘要][在线阅读][下载 1912K] [阅读次数：130 ] |[下载次数：143 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] - 黄翠琴;范克伟;余佳;傅文源;林开雄;杨守深;林青青;杨小燕;
对1例疑似感染猫细小病毒的死亡华南虎幼虎进行病理剖检、病原PCR检测和病理组织切片观察。结果表明,死亡幼虎的肠道组织中能检测出猫细小病毒核酸;病理组织切片镜检结果显示,死亡幼虎胃、肠粘膜出血,大量粘膜上皮细胞坏死、脱落,严重部位粘膜层基本消失,并伴有大量炎性细胞浸润;心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑等组织也均有较为严重的病理损伤。以上结果提示,该死亡幼虎感染了猫细小病毒,且该病毒对幼虎多种主要器官造成了严重的损伤。
2017年06期 v.25;No.120 43-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 2723K] [阅读次数：161 ] |[下载次数：352 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ]
- 任春宇;薛书江;梁晚枫;倪婷婷;伍生军;宋建臣;
为了制备特异的抗猪附红细胞体单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb),将纯化的猪附红细胞体抗原浓缩后免疫6周龄BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术制备MAb。制备的MAb分别通过抗体亚类试剂盒、Western blot进行单抗亚类和特异性检测。结果显示,共获得了2株能稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株,命名为3F7和2C4。2株MAb的亚型均为IgG2a,其腹水效价分别可达1:16 000和1:14 000。特异性检测表明,2株MAb均能特异性地与猪附红细胞体结合,而与弓形虫、猪链球菌、猪肺炎支原体和猪繁殖与呼吸综合症病毒均无反应。2株MAb的获得有望为猪附红细胞体病的诊断和防治提供新的材料。
2017年06期 v.25;No.120 56-59页 [查看摘要][在线阅读][下载 1087K] [阅读次数：103 ] |[下载次数：114 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 肖长广;赵秋华;魏建超;许金朋;刘珂;李蓓蓓;邵东华;邱亚峰;钟登科;马志永;
为初步了解我国上海市及周边部分地区猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoiae,APP)的感染情况,对2015~2016年间采集于上海市、江苏省、江西省以及浙江省部分地区的1031份猪血清进行胸膜肺炎放线杆菌感染情况检测。结果显示,上海市及周边地区部分规模化猪场猪群中APP抗体总阳性率为27.06%,其中APP抗体阳性率江西省(38.08%)、江苏省(33.09%)和浙江省(25.21%)均高于上海市(11.20%);种猪(37.74%)高于哺乳仔猪(33.16%)和育肥猪(25.96%)以及保育猪(14.68%);APP抗体水平夏季(40.25%)高于冬季(25.00%)、春季(28.21%)和秋季(15.29%);小型猪场(42.11%)高于中型(24.86%)和大型猪场(17.97%)中APP抗体阳性率。统计分析显示,APP抗体阴、阳性与地区、猪群的生长阶段、生长季节以及猪场规模有关(P<0.001)。检测结果表明,我国上海市及周边地区猪群中胸膜肺炎放线杆菌感染较为普遍。本研究结果为我国猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia,PCP)的防控以及净化工作提供了一定的数据支持。
2017年06期 v.25;No.120 60-63页 [查看摘要][在线阅读][下载 1113K] [阅读次数：100 ] |[下载次数：175 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] - 戴振清;胡序明;王芳;陈世豪;贾崇信;豆春峰;耿拓宇;崔恒宓;
已知鸡基因组中含有禽内源性反转录病毒ALVE1序列,而ALVE1在鸡基因组中的上游和下游区域位置在参考基因组中并未成功鉴定。本研究成功鉴定出ALVE1所在鸡基因组中的上、下游序列,并通过提取CEF细胞和DF-1细胞基因组反过来验证了ALVE1的位置信息。与参考基因组不同的是,我们发现ALVE1序列包含3'LTR序列,在鸡1号染色体上的插入位置为chr1:65,995,534~65,993,540。本研究不仅提供了ALVE1在鸡基因组中的完整信息,也为进一步研究ALVE1的功能奠定了基础。
2017年06期 v.25;No.120 64-69页 [查看摘要][在线阅读][下载 1812K] [阅读次数：165 ] |[下载次数：145 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] - 单玉平;李锋;邓建新;洪枫;闫艳;黄继康;周庆雨;史慧;王韶山;朱国强;
为了有效防控连云港市规模猪场新生仔猪腹泻,本研究对其辖区内50头以上的规模猪场进行了流行病学调查和主要病因分析。结果显示:致病性大肠杆菌是主要的细菌病病原体,猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis of pigs,TGEV)、猪轮状病毒(Porcine Rotavirus,PROV)为主要的病毒病病原体。上述研究为连云港市甚至国内其他猪场的新生仔猪腹泻的防控提供了科学依据。
2017年06期 v.25;No.120 70-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 1017K] [阅读次数：86 ] |[下载次数：94 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ]