- 陈柳;刘光清;倪征;余斌;云涛;华炯钢;李双茂;
病毒蛋白VP2是兔出血症病毒(Rabbit Hemorrhagic Disease Virus,RHDV)的一种次要结构蛋白。本文旨在构建VP2与绿色荧光蛋白融合的真核表达载体,进而利用它研究VP2在细胞内的定位情况。首先在大肠杆菌中表达GST-VP2融合蛋白,然后用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备抗VP2的抗血清。对制备的抗VP2抗血清进行特异性分析,再利用该抗体对转染pEGFP-VP2的BHK-21细胞进行检测,以研究VP2蛋白在细胞内的定位情况。结果表明,pEGFP-VP2转染BHK-21细胞后,不仅VP2蛋白得到了成功表达,而且通过检测偶联的绿色荧光蛋白可判断出VP2蛋白主要分布于BHK-21细胞的细胞质。本研究成功构建了VP2与绿色荧光蛋白融合的表达载体,并在真核细胞内实现了表达,通过检测荧光蛋白,发现VP2主要在细胞质内表达并分布,为深入探讨VP2的生物学功能奠定了基础。
2009年02期 v.17;No.v.17 1-7页 [查看摘要][在线阅读][下载 570K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：155 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] - 曾伟伟;石星明;高宏博;王玫;黄婷婷;李继松;孙妍;崔红玉;童光志;王云峰;
为提高新城疫病毒(Newcastl Disease Virus,NDV)F基因DNA疫苗的表达量,增强其免疫效果。按照鸡体内偏嗜性密码子人工合成了NDV F48E9株的F基因optiF,插入到真核表达载体pVAX1中获得pVAX1-optiF。将F48E9株的F基因pVAX1-F与pVAX1-optiF分别转染COS-7细胞,72h后间接免疫荧光和Western blot检测细胞中瞬时表达的F蛋白。将质粒pVAX1、pVAX1-F和pVAX1-opti F以200μg/只的剂量分别股四头肌多点注射18只2周龄SPF鸡,2周后加强免疫1次,同时设立PBS对照。二免2周后每组取12只鸡以105EID50的F48E9株NDV强毒进行攻毒,评价这2种DNA疫苗的免疫效果。结果表明,F基因密码子的优化可显著提高NDVDNA疫苗诱导的保护性体液免疫和细胞免疫应答水平,攻毒后所有pVAX1-optiF免疫鸡均获得保护(12/12),而pVAX1-F组保护率只有17%(2/12)。DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量及表达抗原的免疫原性有直接关系。与未经修饰的F基因相比,修饰后的F基因体外瞬时表达水平明显提高。
2009年02期 v.17;No.v.17 8-16页 [查看摘要][在线阅读][下载 976K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：196 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] - 肖朝庭;时莉;宋翥远;刘然;阿合买提·买买提;周继勇;
采用RT-PCR方法克隆测定传染性支气管炎病毒(Infections Bronchitis Virus,IBV)疫苗株H52全基因组序列,并与其它已知全基因组序列的我国分离株进行比较分析,以分析我国IBV地方分离株与疫苗株的分子遗传关系。结果表明,H52基因组全长为27 630bp(不包括polyA),A+T含量为61.8%,它与我国IBV分离株全基因组同源性在83.9%~95.2%之间,其中与KQ6的同源性最高(95.2%),与其余株均在88%以下。在基因组内基因的同源性中,以S1、S2与E变异最大,除KQ6外,其余各株(含台湾株)与H52在S1蛋白上的同源性只有72.4%~80.7%,在S2蛋白上的同源性为85.5%~88.1%,E蛋白为82.9%~93.3%。系统进化分析表明,国内分离株,除KQ6外,在进化分支中已独立于H52和其它Massachusetts型衍生毒株。H52与我国地方分离株存在较大的分子遗传差异,这些差异可能导致单纯Massachusetts型疫苗(如H120,H52)不能有效地免疫保护我国的鸡群。
2009年02期 v.17;No.v.17 17-23页 [查看摘要][在线阅读][下载 480K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：151 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] - 徐艇;刘长龙;石逢庄;袁世山;
猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virns,PRRSV)欧洲株(PRRSV-I)、北美株(PRRSV-II)常与猪圆环病毒2型(Porcine Circorirns type2,PCV-2)呈混合感染,严重影响养猪业的经济效益。本文根据GenBank上已发表的PRRSV北美型(PRRSV-I)、PRRSV欧洲型(PRRSV-II)、圆环病毒2型(PCV-2)的基因组全序列,分别设计了3对能特异性扩增PRRSV-I、PRRSV-II和PCV-2的引物,建立并优化了可同时检测PRRSV-I、PRRSV-II和PCV-2三种病毒的多重PCR方法,通过对临床病料的检测,证实了此方法具有高特异性、高灵敏度、高效率、低成本的特点,适合大量样本的分析与鉴定。利用该方法能在24h内对样品进行检测并获得结果,因此本方法的建立对这3种病毒的早期快速诊断有十分重要的意义。
2009年02期 v.17;No.v.17 24-30页 [查看摘要][在线阅读][下载 470K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：156 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] - 时莉;肖朝庭;宋翥远;张秀美;阿合买提·买买提;周继勇;
1996~2008年从我国不同地区分离30株传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Viruses,IBV)野毒株的M基因,采用RT-PCR方法克隆测定所分离的野毒株和澳大利亚T株的M基因序列,利用生物信息学软件与GenBank中公布的部分国内外IBV毒株的M基因序列进行比较分析,研究我国IBV的分子流行学特点和分子遗传变异规律。结果发现所测毒株M基因具有4种不同长度的开放阅读框:669bp、672bp、678bp和681bp,分别编码222、223、225和226个氨基酸的多肽,这些长度的差异是由5′端的核苷酸插入或缺失造成的。30个IBV分离株间的同源性在89.5%~100%之间。以疫苗株H120氨基酸位置为参照,在被比较的73株IBV M蛋白中发现62个位点存在变异,其中以2~5、10~16、44~46、217~222等4个区域氨基酸取代率较高。系统进化分析显示,被比较的73个IBV毒株分为5个进化群,我国的IBV分属于其中的4个群,其中第一群和第四群与我国所使用的疫苗病毒株相距较远。同时发现部分近年的分离株与10多年前分离株具有很近遗传进化关系。从M基因看,在我国出现了多种基因型IBV共存的现象,分离株与疫苗株的遗传差异提示我们需要对疫苗的选用做出重新评估。
2009年02期 v.17;No.v.17 31-37页 [查看摘要][在线阅读][下载 421K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：170 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] - 赵春梅;陈鸿军;宋翠萍;于圣青;丁铲;
本研究通过对鸡败血支原体(MG)强毒株黏附素GapA的N端(98aa~322aa)高变区作为免疫原免疫小鼠,利用Bac-to-bac系统构建GapAN重组杆状病毒,感染Sf9昆虫细胞,以作为检测抗原,筛选获得5株抗GapAN端的单克隆抗体:3D4、5B10、1B5、1D7和4B3。经部分免疫学特性鉴定,5株单抗具备良好的免疫反应性,并且在免疫荧光试验及Western-blot检测过程中发现这些单抗针对的抗原表位存在明显差异,这些单抗的成功制备为下一步深入研究MG的黏附特性奠定了基础。
2009年02期 v.17;No.v.17 38-43页 [查看摘要][在线阅读][下载 487K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] - 李万奎;程安春;汪铭书;朱德康;罗启慧;陈孝跃;范波;
将小鹅瘟病毒(Goose Parvovirns,GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别按每只6、3、1μg的剂量基因枪轰击免疫4周龄BALB/c小鼠,于免疫后不同时间采集小鼠心、肝、脾、肺、肾、肠、脑和免疫部位皮肤等组织,用原位杂交方法检测pcDNA-GPV-VP3在小鼠体内的分布规律。结果显示,pcDNA-GPV-VP3在免疫后1h即分布于小鼠除脑外各个组织,脑组织于免疫后3h呈阳性,各组织阳性信号随时间的推移逐渐减弱;pcDNA-GPV-VP3在不同组织中持续时间依次为肝脏>心>脾>免疫部位>肾、肠>肺>脑;pcDNA-GPV-VP3不同剂量组信号强弱和持续时间存在的总体规律依次为6μg组>3μg组>1μg组。基因枪轰击pcDNA-GPV-VP3于免疫后能快速而广泛的分布于小鼠各个组织且持续存在达63d。
2009年02期 v.17;No.v.17 43-49页 [查看摘要][在线阅读][下载 534K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：115 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] - 张鑫宇;何玲;袁维峰;孙怀昌;
用miRNA Target Finder分析软件预测干扰RB1B株马立克氏病病毒(Marek’s Disease Virus,MDV)gM基因翻译的潜在靶序列,从中筛选出3个作为干扰对象,根据干扰载体pRFPRNAiC特点,设计合成3对单链DNA序列,经PCR反应扩增出双链DNA,并将其插入干扰载体pRFPRNAiC,构建重组干扰质粒pRFPRNAiCgM1、pRFPRNAiCgM2、pRFPRNAiCgM3。将质粒pRFPRNAiCgM1以不同的剂量转染鸡胚成纤维(CEF)细胞,确定最佳转染质粒量,试验结果表明1μg转染剂量转染效果最佳。以1μg剂量将3种重组干扰质粒分别转染CEF细胞,24h后感染RB1B株MDV,72h后用空斑计数MDV在CEF细胞上增殖数量,以此判定miRNA干扰效果,结果显示,重组干扰质粒中质粒pRFPRNAiCgM2干扰效果较好,能有效抑制MDV在CEF上的生长繁殖。
2009年02期 v.17;No.v.17 50-54页 [查看摘要][在线阅读][下载 565K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：185 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ]
- 樊玉娟;姜连连;黄兵;岳城;赵其平;韩红玉;董辉;李玉剑;姚倩;颜彦;
为了建立毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)的鸡胚培养体系,用毒害艾美耳球虫子孢子分别接种8~11日龄鸡胚以确定最佳接种日龄,用不同剂量子孢子接种同一日龄鸡胚以确定最佳子孢子接种剂量,并在子孢子混悬液中分别加入不同剂量的胰岛素和叶酸以观察对球虫在鸡胚中发育的影响。结果显示,毒害艾美耳球虫子孢子接种9日龄的鸡胚,其卵囊产量(平均每只胚的卵囊量)和卵囊成熟率均为最高,成熟率达到99%;当每个鸡胚接种子孢子1×104个时,其卵囊产量最高;在子孢子混悬液中分别加入胰岛素1 000U/mL、叶酸0.05mg/mL,均能明显增加鸡胚中的卵囊产量。本文通过对毒害艾美耳球虫的鸡胚接种日龄、子孢子接种剂量、营养物质添加等因素的研究,初步建立了毒害艾美耳球虫的鸡胚培养体系。
2009年02期 v.17;No.v.17 63-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 149K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：160 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 陈立;孙媛;刘清神;李海云;穆莉;
本文采用粪便直接涂片、浮聚和麦克马斯特法,对采自广州市番禺区欢乐鸟场的17种共183个鹦鹉粪便样品进行了肠道寄生虫感染率及感染强度调查。先后进行了两次采样,检查结果显示:该鸟场养殖的鹦鹉总肠道寄生虫感染率为38.3%。其中吸虫感染比较普遍,感染率达19.1%,其次是绦虫,感染率为10.4%,线虫和原生动物的感染率分别为9.3%和5.5%。感染强度EPG值随寄生虫和鹦鹉种的不同,在300到2 400之间不等。调查中没有发现球虫感染,鉴于调查结果建议对鸟场阳性感染鹦鹉进行针对性驱虫。
2009年02期 v.17;No.v.17 67-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 253K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：283 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] - 古努尔·吐尔逊;郭宝平;张壮志;赵莉;石保新;吐尔洪·依米提;哈斯也提·艾力;王进成;米小云;刘斌;张文宝;
把含有EgM9基因的质粒pET-41b转化至大肠杆菌BL-21中,IPTG诱导重组质粒的表达,亲和层析纯化表达产物,用SDS-PAGE和Western blot进行分析鉴定,显示分离纯化的EgM9和GST蛋白纯度较高,1L的培养物约可以得到5mg纯化蛋白,分子量为60kDa。EgM9免疫后的血清与成熟虫体蛋白有特异性反应。融合蛋白获得高效表达,并成功纯化,初步实验证明EgM9具有良好的免疫原性,可进一步用于疫苗的免疫实验。
2009年02期 v.17;No.v.17 74-77页 [查看摘要][在线阅读][下载 251K] [阅读次数：2 ] |[下载次数：98 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ]