- 童武;周艳君;肖少波;童光志;陈焕春;
随着规模化养猪业的发展,传染性疾病越来越多,混合感染或多重感染十分普遍,给疾病的诊断和预防带来很大困难。本文将我们实验室2010年分别采自福建、广西、河南、上海、内蒙、浙江、江苏和山西等地发病猪场的185份病料,通过RT-PCR和PCR方法对其进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪繁殖障碍的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪圆环病毒2(Porcine circovirus type 2,PCV2)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、细环病毒2(Torque teno virus 2,TTV2)等病毒检测。结果表明在所检的病料中PRRSV、PCV2和TTV2的阳性率比较高,分别为49.2%、62.2%和95.1%。有些地方TTV2的阳性率高达100%;同时,还存在很普遍的PRRSV与PCV2、PRRSV与TTV2、PCV2与TTV2等混合感染,混合感染率分别为27.6%、45.4%、58.4%;以及PRRSV、PCV2与TTV2的三重感染率为24.9%。同时对部分PRRSV阳性病料的PRRSV GP5和nsp2基因分别进行测序,分析测序结果表明病料中的PRRSV的GP5和nsp2序列与PRRSV HuN4株的相应序列的亲缘关系分别在98.2%和96.2%以上,且在nsp2区域都存在30个不连续氨基酸的缺失,说明现在临床中所流行的PRRSV可能仍是与高致病性PRRSV基因型相似的病毒。通过本文可以及时了解当前养猪场的病毒性疾病的流行情况,为猪场病毒性疾病的防控提供依据。
2011年05期 v.19;No.83 1-7页 [查看摘要][在线阅读][下载 2932K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：396 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：31 ] - 孟春春;段云兵;仇旭升;金仕强;詹媛;张向乐;于圣青;丁铲;
根据Ⅶ型新城疫病毒基质蛋白基因保守序列设计并合成特异性引物,建立快速检测Ⅶ型新城疫病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。通过RT-PCR方法克隆Ⅶ型新城疫病毒M基因靶序列,并将其连入T-Easy载体,制备阳性标准品,优化反应条件,以10倍系列稀释的标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.999。检测结果显示,该方法的灵敏度可达100 copies/μL,而且特异性良好,除Ⅶ型新城疫病毒外,对Ⅱ型/Ⅲ型/IV型/Ⅸ型新城疫病毒、H5亚型禽流感病毒、H9亚型禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒检测结果均为阴性。本研究所建立的检测方法重复性好,批内和批间变异系数均小于5%。对40份实验感染样品的检测结果表明,其检出率为95%,而常规RT-PCR方法检出率仅为70%,表明该方法比常规RT-PCR检测方法灵敏度更高、特异性更强。
2011年05期 v.19;No.83 8-14页 [查看摘要][在线阅读][下载 2182K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：225 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] - 李玲;李国新;徐彦召;高景鹏;周艳君;童光志;
本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)PCV2b的ORF2基因插入供体质粒pFastBacTMⅠPPH启动子控制下的多克隆位点,构建的质粒转化DH10BAC感受态细胞,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒rBacmid-cap。将rBacmid-cap转染对数生长期的Sf9昆虫细胞,间接免疫荧光试验证明目的蛋白在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得了表达。将该重组杆状病毒感染HighFiveTM细胞后,用Western blot在细胞培养上清中检测到了目的蛋白,并于d 5达到表达高峰。电镜观察结果显示上清中的目的蛋白可以装配成直径约为17 nm的病毒样颗粒。病毒样颗粒在培养上清中的大量存在,为目的蛋白进一步的分离和纯化提供了便利,也为PCV2基因工程疫苗的产业化奠定了基础。
2011年05期 v.19;No.83 15-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 1821K] [阅读次数：2 ] |[下载次数：518 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：17 ] - 毕振威;王永山;范红结;
将非典型犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)的核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)基因克隆到杆状病毒表达系统供体质粒pFastBacHTA中,构建含N基因的重组供体质粒pFastBac-N,转化E.coli DH10Bac感受态细胞,经筛选获得含N基因的重组Bacmid DNA(rBacmid-N),脂质体法转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒vBacmid-N。用vBacmid-N感染昆虫细胞Sf9,免疫印迹(Western blot)分析,在62kDa处出现一条特异蛋白条带,与重组N蛋白的理论值相符合;间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescent assay,IFA)检测,vBacmid-N感染的昆虫细胞sf9出现特异绿色荧光。以纯化的重组N蛋白为抗原建立CDV抗体间接ELISA检测方法,犬CDV阳性血清A450大于0.40,而犬CDV阴性血清A450小于0.05,显示了良好的抗原特异性与稳定性。
2011年05期 v.19;No.83 21-26页 [查看摘要][在线阅读][下载 2334K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：173 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] - 万春和;黄瑜;程龙飞;傅光华;施少华;陈红梅;
运用PCR技术从福建省某地发病信鸽组织中获得鸽圆环病毒(Pigeon circovirus,PICV)福建株(简称fj1株)全基因组序列,并对鸽圆环病毒福建株基因组核苷酸组成、结构及其遗传进行分析。结果表明,所获fj1株全基因大小2037 nt,包含有2个主要的开放阅读框(open reading frame,ORF):ORF-V1(41～994nt)编码复制相关结构蛋白(the replicated-associated protein,Rep),ORF-C1(1987～1166nt)编码核衣壳蛋白(the putative capsid protein,Cap);在V1和C1的5'端之间存在一个与圆环病毒滚环复制有关的高度保守的环状发夹结构。fj1株与GenBank登录所有鸽圆环病毒核苷酸同源性在84.5%～93.8%之间,与中国浙江鸽圆环病毒分离株zj1和zj2核苷酸同源性分别为88.7%和88.9%。从遗传进化上看,中国3株鸽圆环病毒均处在Cap蛋白起始密码子"ATG"分支,但分居不同亚群。
2011年05期 v.19;No.83 27-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 1063K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：286 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：16 ] - 朱春华;江斌;林甦;刘斌琼;陈珍;程龙飞;黄瑜;
为进一步了解福建省H9N2亚型禽流感病毒的基因遗传进化关系,本研究将福建省2011年分离的毒株FZ-04、FZ-11与GenBank上登录的2000～2011年福建省分离的H9N2毒株及国内外典型代表株进行HA、NA基因的序列比对和遗传进化分析。结果表明,分离株FZ-04和FZ-11的HA基因与CK/FJ/G9/09株核苷酸同源性最高,属于国内常见的CK/BJ/1/94亚系。HA裂解位点处的氨基酸序列为-PSRSSR/GL-,符合低致病性禽流感病毒的分子特征。NA基因在遗传进化关系上呈现独立的分支,与CK/FJ/10954/05毒株核苷酸序列同源性最高,属于CK/HK/G9/97亚系,且NA基因推导的469个氨基酸序列中没有缺失。同时,从HA和NA基因的遗传进化树上可知,2000～2011年福建省H9N2禽流感病毒进化相对比较稳定,可能有一个共同的起源。
2011年05期 v.19;No.83 32-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 1273K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：145 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 宋翠萍;仇旭升;陈鸿军;于圣青;丁铲;
本研究从上海市某鸭场发病鸭群中分离到1株DHV-1型强毒株,对其进行毒价测定、琼脂扩散试验和动物回归实验,结果显示:按103.41 ELD50/0.2 mL接种1日龄雏鸭,该毒株对雏鸭有明显的致病性,死亡率为60%,肝脏病变率为100%。经全基因组测序显示:该毒株长度为7652 nt,含626 nt的5'非编码区和314 nt的3'非编码区,编码一个2249 aa大小的多聚蛋白。根据Blast比对发现,该毒株属于经典的DHV-1A群,与韩国经典强毒株R85952(99.7%)和中国分离强毒株HP-1(99.3%)的同源性最高。
2011年05期 v.19;No.83 39-44页 [查看摘要][在线阅读][下载 1587K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：112 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] - 胡青海;宋翠萍;于圣青;丁铲;韩先干;屠晶;苗双;卢凤英;吴冬明;糜益锋;
2011年4月份,河北省某地一些鸭场饲养的20～45日龄的樱桃谷肉鸭发生了以腹腔中充满大量清亮、茶色或啤酒样腹水为主要病变特征的疾病,即鸭腹水综合征。采集两个不同日龄的病死鸭肝脏样品,接种SPF鸭胚进行病毒分离,获得两个病毒分离物(HB01和HB02)。这两个病毒分离物对鸡、鸭和鹅的红细胞均无血凝活性。RT-PCR或PCR检测表明,HB01和HB02中鸭肝炎病毒检测为阳性,而鸭呼肠孤病毒、鸭圆环病毒、鸭黄病毒等检测均为阴性。将HB02接种5日龄SPF鸭,致死率为40%;对20日龄的鸭不致死。HB02分离物中鸭肝炎病毒的序列分析表明其与鸭肝炎病毒NA株及弱毒疫苗株C80和F64遗传距离较近。根据试验结果,推测鸭肝炎病毒可能是诱发本次鸭腹水综合症的因素之一。
2011年05期 v.19;No.83 45-50页 [查看摘要][在线阅读][下载 1345K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：211 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] - 杨云霞;石艳丽;刘萍萍;刘金明;金亚美;
目前广泛应用的各类胶原及胶原蛋白多为人工提取的方法获得,为了得到高纯度原核表达的胶原蛋白,本研究构建了血吸虫V型胶原蛋白(Schistosoma japonicum type V collagen,Sj Col V)(a1)基因AY815998.1的原核表达质粒,并对其进行了原核表达。结果表明SjColV(a1)蛋白能在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中高效表达,但原核表达的融合蛋白不够稳定,且存在形式多样。本文就其表达情况进行了分析,并纯化得到原核表达的全长rSjColV(a1),用V型胶原蛋白的单抗对其进行鉴定,同时分析其在?80℃保存的稳定性,研究结果为SjColV(a1)的深入研究和利用提供了一定的理论依据。
2011年05期 v.19;No.83 50-56页 [查看摘要][在线阅读][下载 3482K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：68 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 赵其平;李婷;董辉;韩红玉;孔春林;姜连连;朱顺海;黄兵;
为检测巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对常用抗球虫药的敏感性,选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西等8种抗球虫药进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比(percent of optimum anticoccidial aetivity,POAA)、病变记分减少率(reduction of lesion scores,RLS)、相对卵囊产量(relative oocyst production,ROP)和抗球虫指数(anticoccidial index,ACI)4项指标进行综合评价。结果表明,巨型艾美耳球虫早熟株对8种药物敏感;柔嫩艾美耳球虫早熟株对盐霉素轻度敏感,对地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感。本研究结果可为对球虫早熟株疫苗的开发与应用提供实验依据。
2011年05期 v.19;No.83 57-61页 [查看摘要][在线阅读][下载 838K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：148 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] - 何鑫;黄复深;段柳春;刘伟;
为研究长沙市黑斑蛙蛔虫分离株的线粒体DNA pcox1序列的遗传变异情况,并分析黑斑蛙蛔虫cox1部分序列与其它蛔虫的种群遗传关系。利用PCR扩增黑斑蛙蛔虫mtDNA的pcox1片段,将PCR扩增出的片段纯化后测序,并对其序列进行分析。结果显示所获得的4株cox1序列长度存在一定差异,为400～410 bp。由于黑斑蛙蛔虫cox1序列种内相对保守,种间差异较大,故可作为种间遗传变异研究的分子标记。本研究报道的黑斑蛙蛔虫cox1序列,为黑斑蛙蛔虫的分类鉴定以及进一步的分子流行病学调查和群体遗传研究奠定了基础。
2011年05期 v.19;No.83 62-66页 [查看摘要][在线阅读][下载 1799K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：122 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ]