马志永
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SAMHD1作为宿主的天然免疫限制性因子,参与机体的天然免疫调控,在机体抗病毒感染过程中发挥重要的作用。为了建立稳定表达猪SAMHD1的细胞系,本研究将猪SAMHD1全长编码基因克隆至慢病毒载体pWPXL,构建重组质粒pWPXLpSAMHD1。将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,获得重组慢病毒。将该慢病毒感染MARC-145细胞,经嘌呤霉素筛选后,获得表达猪SAMHD1基因的MARC-pSAMHD1细胞系。经检测发现,该细胞系传至10代,仍能稳定表达猪SAMHD1蛋白。该细胞系的建立为猪SAMHD1抗病毒特性和猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机理等研究奠定了坚实的基础。
本研究使用CRISPR/Cas9基因编辑技术结合同源重组,以伪狂犬病毒经典疫苗株Bartha-K61为骨架,将其gB基因替换为伪狂犬病毒变异株JS-2012的gB基因,经噬斑纯化、PCR筛选鉴定,获得重组病毒r PRV-BJB。体外生物学特性分析结果显示,重组病毒株r PRV-BJB与疫苗株Bartha-K61具有相似的生长特性和噬斑形态,可作为新型重组伪狂犬病病毒疫苗候选株。
为了调查广东地区猪戊型肝炎感染和流行情况,本研究对2014~2016年广东地区猪场抽取的血样进行抗体检测,以及对猪肝和粪便样品进行病毒核酸检测,PCR结果阳性的样品进行序列分析,确定所感染戊型肝炎病毒的基因型。结果显示,戊型肝炎病毒抗体平均阳性率为69.2%,PCR阳性率为46.7%,对PCR结果阳性的30株样品基因序列分析显示,29株为基因型Ⅳ型,1株为基因型Ⅲ型。
为了分析内化素InlK对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)生物学特性及致病性的影响,利用自杀性质粒进行同源重组构建LM标准菌株10403s的inlK基因缺失株,然后比较分析野生株、inlK基因缺失株的生长特性、生物被膜形成能力、细胞侵袭能力、动物致病力等差异。结果显示,inlK基因缺失不影响LM的生长速度,但可导致LM的生物被膜形成能力下降。细胞感染试验表明基因缺失株ΔinlK对RAW264.7细胞的侵袭及胞内存活能力分别下降了18%和31%。动物感染试验显示野生株和基因缺失株ΔinlK对小鼠的致死率分别为80%(4/5)和40%(2/5),且基因缺失株ΔinlK的体内定殖能力显著低于野生株。本研究表明内化素InlK在LM感染过程中发挥着重要作用,为了解LM的致病作用提供参考。
为了了解引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌分离株的耐药性及其分子流行病学特征,本研究采用纸片扩散法检测临床分离的71株金黄色葡萄球菌的耐药特性,并对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)进行判定;应用多重PCR方法对MRSA进行SCCmec分型。结果显示:在新疆地区71株金黄色葡萄球菌临床分离株中共检出13株MRSA,检出率为18.3%;金黄色葡萄球菌对呋喃妥因、利福平100%敏感,MRSA对头孢类、氟喹诺酮类和大环内酯类抗菌药物的耐药率明显高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(methicillin sensitive staphylococcus aureus,MSSA);MRSA的SCCmec基因型共以SCCmecⅠ和SCCmecⅣa型为主,均占76.9%,另外,1株MRSA仅有1种SCCmecⅢ型,1株MRSA有SCCmecⅠ、SCCmecⅢ和SCCmecⅣa型。本研究结果表明,MRSA耐药性多样,新疆地区MRSA主要流行株为SCCmecⅠ和SCCmecⅣa型。
由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)引起的慢性肺炎是最难净化的疫病之一,它流行广、感染率高,对养猪业危害巨大。为了加强口岸现场查验动物源性产品中猪肺炎支原体的力度,本研究建立了猪肺炎支原体环介导等温核酸扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。本研究通过在LAMP反应产物中加入显色液,提高了检测结果肉眼判定的准确性,实现了结果判定可视化的目标,有助于出入境口岸货物查验现场及猪场中猪肺炎支原体的检测。
通过荧光素酶实验验证宿主CD276为日本血吸虫mir-125b的靶基因,并分析感染血吸虫后宿主CD276基因在不同组织中的表达情况。利用PCR扩增mir-125b与CD276互作的核酸序列,并将目的片段克隆至表达荧光素酶报告基因质粒的下游。将重组质粒转染到HEK293T细胞内,检测荧光素酶报告基因表达。进一步利用荧光定量PCR技术检测小鼠巨噬细胞在转染血吸虫mir-125b mimic后,靶基因CD276的表达情况,同时检测感染血吸虫不同时间段、小鼠不同组织中CD276的表达情况。荧光素酶实验表明转染mir-125b mimic和重组质粒后细胞的荧光素酶报告基因的表达极显著降低(P<0.01),提示mir-125b可与CD276相关区域互作,抑制报告基因的表达;血吸虫mir-125b mimic转染小鼠巨噬细胞后导致其宿主CD276基因的表达降低,进一步提示宿主CD276可能为血吸虫mir-125b靶基因;荧光定量PCR分析表明感染日本血吸虫后的不同感染时期,小鼠淋巴细胞、肝脏及脾脏中的CD276的表达水平显著低于对照组(P<0.01),进一步表明虫源性mir-125b在体内影响宿主CD276基因的表达。日本血吸虫mir-125b可能靶向调控宿主CD276基因的表达,在虫体与宿主互作中发挥重要调控功能。
沙咪珠利(Ethanamizuril,EZL)是中国农业科学院上海兽医研究所自主研发的一种新型三嗪类抗球虫药。沙咪珠利给鸡灌服后在其体内被代谢为多种代谢产物,其中代谢物M3为主要代谢产物之一。在研究沙咪珠利在鸡各组织中残留消除规律的过程中发现,一定量的沙咪珠利添加到相同重量的肾脏、肝脏以及肌肉组织匀浆中,样品前处理后,通过UPLC方法检测,在肾脏组织几乎未检测到原药沙咪珠利,却意外检测到了代谢物M3,而在其他组织中未见此种现象发生。为了进一步研究此种情况,我们称取等量的肾脏匀浆组织,添加沙咪珠利后于不同时间处理,结果发现孵育20 min后肾脏中几乎检测不到原药;另外,将鸡体肾脏组织高温处理后,再添加沙咪珠利处理,则可以检测到沙咪珠利,研究结果表明原药沙咪珠利主要在肾脏组织中被代谢为M3。该研究结果为进一步研究沙咪珠利在鸡体的代谢途径提供了重要研究基础。
研究三七皂苷S-6的溶血性及体外免疫活性。常规方法提取PNS,大孔树脂柱层析分离纯化得S-6。溶血试验测定红细胞溶血率。脾淋巴细胞毒性试验确定S-6的安全剂量范围,体外脾淋巴细胞增殖反应和IL-2的诱生及含量测定检测S-6的体外免疫活性。S-6溶血性较小,2 mg/mL浓度以下无溶血性;S-6(0.1μg/mL、1μg/mL)显著促进了ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应,且与PNS和APS组相比,差异不显著;S-6(1μg/mL)极显著地促进了LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应,且与PNS相比,S-6(1μg/mL)差异显著,其余各个剂量与PNS和APS组相比,差异不显著;S-6(12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL)显著或极显著地提高了IL-2的含量,且与PNS和APS组相比,差异不显著。S-6安全性好,体外具有较好的细胞免疫活性和诱生细胞因子的能力。
自2011年底以来,我国多个省份暴发了猪伪狂犬病,一些研究院所证实当前猪伪狂犬病毒流行株发生了一定程度的变异,疫苗不能提供完全的保护。为了在分子生物学水平上比较不同厂家猪伪狂犬病毒Bartha-K61疫苗株,以及与当前流行的猪伪狂犬病病毒变异株,在主要免疫原性蛋白之间的差异,选取了4个厂家的活疫苗Bartha-K61株,通过二代测序方法进行测序,对Bartha-K61株gB、gC和gD这3种主要免疫原性基因以及推导出的氨基酸序列与变异株之间进行同源性分析。结果显示,Bartha-K61疫苗株与变异株gB蛋白序列中有23处特征性的差异,同源性为96.3%~96.9%;gC蛋白序列中有25处特征性的差异,同源性为92.7%~93.1%;gD蛋白序列中有10处特征性的差异,同源性为96.8%~97.3%;以gB、gC和gD氨基酸序列建立的进化分析结果显示,Bartha-K61疫苗株与变异株分属两个不同进化分支。
本研究旨在调查甘肃省玛曲地区牦牛双芽巴贝斯虫病的流行情况并对可能影响其感染的因素进行深入分析。本试验采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法对该地区的600份牦牛血清样品进行检测,随后运用流行病学、统计学方法对可能影响牦牛双芽巴贝斯虫感染的因素进行全面分析。调查结果表明,该地区牦牛双芽巴贝斯虫抗体阳性率为22.33%,其中性别和采样季节两个因素对牦牛双芽巴贝斯虫感染的影响均不具备显著统计学意义(P>0.05),而年龄因素对牦牛双芽巴贝斯虫感染的影响具有显著统计学意义(P<0.05)。综上所述,甘肃省玛曲地区牦牛双芽巴贝斯虫普遍流行并具有较高的感染率,存在向牧区其他放养牦牛及野生动物传播该病的风险隐患。因此相关部门应针对该地区牦牛双芽巴贝斯虫感染情况采取有效的预防、控制措施,严防该病扩散蔓延,保证当地及周边藏民牦牛养殖的经济效益。
为探索治疗奶牛线虫病疗效好、方便、对奶牛应激反应小的药物和剂型,将乙酰氨基阿维菌素研制成2种配方的浇泼剂,即配方Ⅰ和配方Ⅱ。在同一个奶牛小区将37头自然感染线虫病的奶牛分为8个组:配方Ⅰ低剂量组(0.05 mL/kg)、配方Ⅰ中剂量组(0.10 mL/kg)、配方Ⅰ高剂量组(0.20 mL/kg);配方Ⅱ低剂量组(0.05 mL/kg)、配方Ⅱ中剂量组(0.10 mL/kg)、配方Ⅱ高剂量组(0.20 mL/kg);进口伊维菌素浇泼剂对照组;空白对照组。除药物对照组2头奶牛外,其余每组5头奶牛。在投药前和投药后d7、d14、d21、d28、d35、d42、d49、d56、d63采集试验奶牛粪便检测线虫和前后盘吸虫虫卵数量。结果显示,投药后d7,6个试验组和1个药物对照组的奶牛粪便中线虫虫卵全部转阴,这表明研制的乙酰氨基阿维菌素配方Ⅰ和配方Ⅱ的低剂量组、中剂量组、高剂量组对奶牛的线虫病治疗具有很好效果。
为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(Bovine infectious rhinotracheitis virus,IBRV)gB基因的荧光定量PCR检测方法,本研究根据gB基因序列,设计1对引物和相应的TaqMan探针。建立和优化反应体系后,以10倍稀释的病毒来检测该方法的灵敏度。同时,对伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)和鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)进行特异性检测。结果表明,基于gB基因的荧光PCR检测方法可用于鉴定IBRV,该方法具有较好的灵敏度和特异性,其灵敏度为10 copies/μL,即0.02 TCID_(50),且与其他病毒无交叉反应。
严重性急性呼吸系统综合症(severe acute respiratory syndrome,SARS),又名非典型性肺炎,虽爆发已经10年过去了,恐惧依旧笼罩在人们心中,近日,中东呼吸系统综合症(middle east respiratory syndrome,MERS)又强势来袭,再次引发了人们对冠状病毒的强烈关注。近年来研究证明,蝙蝠在冠状病毒的传播中具有重要作用。本文对冠状病毒的多样性和蝙蝠在冠状病毒传播中作用进行了比较系统综述。
呼肠孤病毒广泛的宿主性以及自身基因组的结构特征使其在进化过程中呈现遗传多样性,新型禽源呼肠孤病毒在此过程中不断出现,引起家禽和水禽养殖业的严重经济损失。其中,关于S1基因节段的科学研究对于理解病毒致病性改变以及疫苗开发有关键作用。因此,本文拟就禽源呼肠孤病毒的发生、S1基因的结构及其编码的非结构蛋白P10、P17和结构蛋白σC的生物学功能最新研究进展作一概述。
病毒样颗粒是由病毒的结构蛋白组成,不含感染所必需的核酸成分,没有感染性和复制能力,但是可以同时引起细胞免疫和体液免疫。由于具有与亲本病毒相似的形态和结构的特点,病毒样颗粒受到研究者的极大关注。与其他病毒亚单位疫苗相比,病毒样颗粒具有安全高效的特点。本综述论述了病毒样颗粒的常用表达系统以及在生物制品方面的应用。
<正>◇中文核心期刊◇中国科技核心期刊◇中国农业核心期刊◇RCCSE中国核心学术期刊◇《中国学术期刊(光盘版)检索与评价数据规范》执行优秀奖◇全国畜牧兽医优秀期刊一等奖《中国动物传染病学报》是中华人民共和国农业部主管、中国农业科学院上海兽医研究所主办的动物传染病专业期刊,是我所科研成果发布的重要平台、学术交流的重要渠道和对外形象展示的重要窗口。为进一步提高本刊学术水平,现面向所内外广泛征集各类具有较高学术价值的优秀论文,热烈欢迎大家踊跃投稿。