- 蔡鸿明;张敏;吕丽蕾;姜一峰;高飞;虞凌雪;童武;李丽薇;李国新;周艳君;刘长龙;童光志;
猪流行性腹泻病毒（PEDV）是一种主要感染仔猪小肠的肠道冠状病毒。本研究旨在建立一种用于PEDV体外研究的仔猪小肠类器官模型。首先从PEDV发病猪场的临床仔猪腹泻样品中分离PEDV并进行全基因组测序，结果显示成功分离1株PEDV，命名为PEDV SD株。另外采用肠道类器官的培养技术，从10日龄健康仔猪小肠中分离小肠隐窝组织，经过体外培养7 d左右分化成具有肠道隐窝结构的猪小肠类器官，并能进行连续传代。然后将分离的PEDV SD株感染传代培养的猪小肠道类器官，通过间接免疫荧光试验显示PEDV可以很好地感染猪小肠道类器官，表明成功建立了PEDV感染肠道类器官的模型。猪小肠类器官感染模型可以在体外很好地重现PEDV感染肠道细胞的复杂结构的过程，为深入研究PEDV的致病机制提供一种新的可再生的体外研究模型。
2024年01期 v.32;No.157 1-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 1670K] [阅读次数：4 ] |[下载次数：687 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 蔡鸿明;张敏;吕丽蕾;姜一峰;高飞;虞凌雪;童武;李丽薇;李国新;周艳君;刘长龙;童光志;
猪流行性腹泻病毒（PEDV）是一种主要感染仔猪小肠的肠道冠状病毒。本研究旨在建立一种用于PEDV体外研究的仔猪小肠类器官模型。首先从PEDV发病猪场的临床仔猪腹泻样品中分离PEDV并进行全基因组测序，结果显示成功分离1株PEDV，命名为PEDV SD株。另外采用肠道类器官的培养技术，从10日龄健康仔猪小肠中分离小肠隐窝组织，经过体外培养7 d左右分化成具有肠道隐窝结构的猪小肠类器官，并能进行连续传代。然后将分离的PEDV SD株感染传代培养的猪小肠道类器官，通过间接免疫荧光试验显示PEDV可以很好地感染猪小肠道类器官，表明成功建立了PEDV感染肠道类器官的模型。猪小肠类器官感染模型可以在体外很好地重现PEDV感染肠道细胞的复杂结构的过程，为深入研究PEDV的致病机制提供一种新的可再生的体外研究模型。
2024年01期 v.32;No.157 1-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 1670K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：687 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 徐晶晶;高飞;武吉强;程雪飞;刘宇婷;傅欣玲;郑浩;童武;童光志;李国新;
凋亡诱导因子1(AIFM1)是一个结构复杂的线粒体蛋白，能优化线粒体呼吸链的功能、参与氧化还原代谢，是第一个被发现的caspase非依赖性的凋亡蛋白。本研究发现AIFM1能与猪伪狂犬病病毒（PRV）pUL16相互作用，过表达以及RNA干扰试验结果表明，AIFM1能抑制PRV的增殖，且pUL16能减弱这种抑制作用。激光共聚焦和流式试验表明，PRV感染细胞时，AIFM1从线粒体易位至细胞核，且AIFM1增强了PRV引起的细胞凋亡。本研究通过对PRV pUL16和宿主蛋白相互作用机制研究，部分地解析了这两种蛋白在PRV复制、包装以及与宿主互作中发挥的作用，为进一步阐明PRV感染机制奠定了基础。
2024年01期 v.32;No.157 9-17页 [查看摘要][在线阅读][下载 1535K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：353 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 徐晶晶;高飞;武吉强;程雪飞;刘宇婷;傅欣玲;郑浩;童武;童光志;李国新;
凋亡诱导因子1(AIFM1)是一个结构复杂的线粒体蛋白，能优化线粒体呼吸链的功能、参与氧化还原代谢，是第一个被发现的caspase非依赖性的凋亡蛋白。本研究发现AIFM1能与猪伪狂犬病病毒（PRV）pUL16相互作用，过表达以及RNA干扰试验结果表明，AIFM1能抑制PRV的增殖，且pUL16能减弱这种抑制作用。激光共聚焦和流式试验表明，PRV感染细胞时，AIFM1从线粒体易位至细胞核，且AIFM1增强了PRV引起的细胞凋亡。本研究通过对PRV pUL16和宿主蛋白相互作用机制研究，部分地解析了这两种蛋白在PRV复制、包装以及与宿主互作中发挥的作用，为进一步阐明PRV感染机制奠定了基础。
2024年01期 v.32;No.157 9-17页 [查看摘要][在线阅读][下载 1535K] [阅读次数：2 ] |[下载次数：353 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 柴文娴;骆欢;金松;王姣;罗坚强;洪雅琴;耿拓宇;崔恒宓;胡序明;
研究表明，源自内源性反转录病毒的长非编码RNA可能是巨噬细胞抗病毒免疫反应的重要组成部分。鸡内源性反转录病毒衍生的长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1与宿主遗传抗性有关，能够激活非免疫细胞抗病毒天然免疫反应。为进一步探讨lnc-ALVE1-AS1在鸡巨噬细胞中的抗病毒作用及其机制，本研究通过荧光定量PCR发现lnc-ALVE1-AS1在ALV-J感染鸡巨噬细胞系HD11后24 h显著下调。进一步通过lnc-ALVE1-AS1过表达实验证实，lnc-ALVE1-AS1可以显著抑制ALV-J在HD11细胞中增殖。机制上，lnc-ALVE1-AS1显著上调HD11细胞dsRNA识别受体（TLR3）、Ⅰ型干扰素（IFN-α和IFN-β）和其他抗病毒天然免疫基因（IRF7、MX1、OASL和IFITM3）表达。然而，干扰TLR3或者抑制TLR3信号后lnc-ALVE1-AS1诱导Ⅰ型干扰素（IFN-α和IFN-β）的能力显著减弱。共聚焦定位分析显示在HD11细胞中lnc-ALVE1-AS1可以与TLR3蛋白直接结合。这说明激活TLR3信号可能是lnc-ALVE1-AS1抑制ALV-J在巨噬细胞中增殖的一个重要机制。本研究揭示了lnc-ALVE1-AS1在巨噬细胞中抗病毒功能及其作用机制，为抗病育种研究提供了新的遗传基础。
2024年01期 v.32;No.157 18-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 1387K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：232 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 柴文娴;骆欢;金松;王姣;罗坚强;洪雅琴;耿拓宇;崔恒宓;胡序明;
研究表明，源自内源性反转录病毒的长非编码RNA可能是巨噬细胞抗病毒免疫反应的重要组成部分。鸡内源性反转录病毒衍生的长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1与宿主遗传抗性有关，能够激活非免疫细胞抗病毒天然免疫反应。为进一步探讨lnc-ALVE1-AS1在鸡巨噬细胞中的抗病毒作用及其机制，本研究通过荧光定量PCR发现lnc-ALVE1-AS1在ALV-J感染鸡巨噬细胞系HD11后24 h显著下调。进一步通过lnc-ALVE1-AS1过表达实验证实，lnc-ALVE1-AS1可以显著抑制ALV-J在HD11细胞中增殖。机制上，lnc-ALVE1-AS1显著上调HD11细胞dsRNA识别受体（TLR3）、Ⅰ型干扰素（IFN-α和IFN-β）和其他抗病毒天然免疫基因（IRF7、MX1、OASL和IFITM3）表达。然而，干扰TLR3或者抑制TLR3信号后lnc-ALVE1-AS1诱导Ⅰ型干扰素（IFN-α和IFN-β）的能力显著减弱。共聚焦定位分析显示在HD11细胞中lnc-ALVE1-AS1可以与TLR3蛋白直接结合。这说明激活TLR3信号可能是lnc-ALVE1-AS1抑制ALV-J在巨噬细胞中增殖的一个重要机制。本研究揭示了lnc-ALVE1-AS1在巨噬细胞中抗病毒功能及其作用机制，为抗病育种研究提供了新的遗传基础。
2024年01期 v.32;No.157 18-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 1387K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：232 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 李梅;杨源;王军;陈静;杨鹏;成虹松;岳筠;张双翔;程振涛;
羊肺炎支原体（Mo）可引起山羊、绵羊发生支原体肺炎。本研究旨在分析Mo感染对贵州不同品种羊Toll样受体（TLRs）MyD88通路因子基因转录水平的影响，进而分析不同品种羊对Mo感染的差异性。本研究以Mo人工感染贵州5个主要品种羊，应用TaqMan RT-qPCR方法对不同品种试验羊肺脏和血液样本TLRs MyD88通路因子基因转录水平进行定量检测与分析。结果显示，不同品种羊感染Mo后，MyD88、TRAF6、NF-κB、FOS、JUN基因mRNA相对表达量均显著上调（P<0.01）。同时发现，感染死亡的贵州黑山羊、贵州白山羊血液和肺脏样本中MyD88、FOS基因转录水平上调倍数均显著高于感染未死亡的波尔山羊、湖羊（P<0.05）；感染未死亡的波尔山羊血液中NF-κB基因转录水平上调倍数均极显著高于其余四种羊（P<0.01），这种差异表达出现的原因可能是Mo对不同品种羊的致病机理不同。以上研究结果表明，贵州不同品种羊对Mo的易感程度与TLRs MyD88通路因子转录水平有关，为研究Mo对于不同品种羊的致病机制提供基础研究资料。
2024年01期 v.32;No.157 26-35页 [查看摘要][在线阅读][下载 1485K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：203 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 李梅;杨源;王军;陈静;杨鹏;成虹松;岳筠;张双翔;程振涛;
羊肺炎支原体（Mo）可引起山羊、绵羊发生支原体肺炎。本研究旨在分析Mo感染对贵州不同品种羊Toll样受体（TLRs）MyD88通路因子基因转录水平的影响，进而分析不同品种羊对Mo感染的差异性。本研究以Mo人工感染贵州5个主要品种羊，应用TaqMan RT-qPCR方法对不同品种试验羊肺脏和血液样本TLRs MyD88通路因子基因转录水平进行定量检测与分析。结果显示，不同品种羊感染Mo后，MyD88、TRAF6、NF-κB、FOS、JUN基因mRNA相对表达量均显著上调（P<0.01）。同时发现，感染死亡的贵州黑山羊、贵州白山羊血液和肺脏样本中MyD88、FOS基因转录水平上调倍数均显著高于感染未死亡的波尔山羊、湖羊（P<0.05）；感染未死亡的波尔山羊血液中NF-κB基因转录水平上调倍数均极显著高于其余四种羊（P<0.01），这种差异表达出现的原因可能是Mo对不同品种羊的致病机理不同。以上研究结果表明，贵州不同品种羊对Mo的易感程度与TLRs MyD88通路因子转录水平有关，为研究Mo对于不同品种羊的致病机制提供基础研究资料。
2024年01期 v.32;No.157 26-35页 [查看摘要][在线阅读][下载 1485K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：203 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 余焱霞;张远;王艳玲;蔡亦红;
肿瘤相关巨噬细胞（TAM）与肿瘤的转归密切相关，探索刚地弓形虫致密颗粒蛋白分子（GRA15_Ⅱ）在肿瘤微环境中通过诱导巨噬细胞（Mφ）极化抑制肿瘤生长的作用机制。通过构建肝细胞癌小鼠，注射LV-gra15_Ⅱ重组慢病毒后，采用实时荧光定量PCR、酶联免疫法、免疫组化、流式细胞术和共聚焦显微镜分析肿瘤微环境中的免疫应答情况。结果显示，GRA15_Ⅱ可在体外诱导M2样Mφ向M1表型偏移。而且，在荷瘤小鼠注射LV-gra15_Ⅱ后，肿瘤体积明显减小，进一步分析发现，在肿瘤微环境中GRA15_Ⅱ主要通过TRAF6途径激活NF-κB，诱导TAM从M2向M1偏移，且NO、IL-12、TNF-α的表达上调，发挥Th1免疫应答。GRA15_Ⅱ能够抑制肿瘤生长，此研究为肿瘤免疫治疗提供新的思路和策略，为开发新的药物提供实验室基础。
2024年01期 v.32;No.157 36-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 1940K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：508 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 余焱霞;张远;王艳玲;蔡亦红;
肿瘤相关巨噬细胞（TAM）与肿瘤的转归密切相关，探索刚地弓形虫致密颗粒蛋白分子（GRA15_Ⅱ）在肿瘤微环境中通过诱导巨噬细胞（Mφ）极化抑制肿瘤生长的作用机制。通过构建肝细胞癌小鼠，注射LV-gra15_Ⅱ重组慢病毒后，采用实时荧光定量PCR、酶联免疫法、免疫组化、流式细胞术和共聚焦显微镜分析肿瘤微环境中的免疫应答情况。结果显示，GRA15_Ⅱ可在体外诱导M2样Mφ向M1表型偏移。而且，在荷瘤小鼠注射LV-gra15_Ⅱ后，肿瘤体积明显减小，进一步分析发现，在肿瘤微环境中GRA15_Ⅱ主要通过TRAF6途径激活NF-κB，诱导TAM从M2向M1偏移，且NO、IL-12、TNF-α的表达上调，发挥Th1免疫应答。GRA15_Ⅱ能够抑制肿瘤生长，此研究为肿瘤免疫治疗提供新的思路和策略，为开发新的药物提供实验室基础。
2024年01期 v.32;No.157 36-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 1940K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：508 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 王同燕;仝晓丹;苏晓蕊;宋欢欢;李伟国;刘武杰;谭菲菲;田克恭;
为解决杆状病毒表达系统存在的表达量低和毒种种子批代次窄问题，加快杆状病毒表达系统产业化进程。本研究首次通过Red和Cas9两种重组技术，先后对影响蛋白表达的V-cath、ChiA、P10和重组杆状病毒基因组稳定性的FP25K和DA26基因进行缺失。同时基于对CSFV-E2蛋白的结构和糖基化预测分析，突变影响同源二聚体二硫键形成的糖基化位点。最后通过悬浮转染的方式提高拯救病毒的滴度。结果表明对E2基因突变后，表达的E2蛋白95%以同源二聚体形式存在。通过供体质粒优化和病毒载体基因缺失，E2蛋白的表达水平提高约4倍，可稳定表达蛋白的重组杆状病毒毒株代次从P7代延长至P20代。悬浮转染获得的重组杆状病毒滴度提高约70倍，同时获得足量低代次的毒种，有效缩短从毒种构建到蛋白表达时间，有效解决杆状病毒表达系统表达量低和毒种种子批代次窄的问题，为猪瘟亚单位疫苗研发奠定基础。
2024年01期 v.32;No.157 48-55页 [查看摘要][在线阅读][下载 1431K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：357 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 王同燕;仝晓丹;苏晓蕊;宋欢欢;李伟国;刘武杰;谭菲菲;田克恭;
为解决杆状病毒表达系统存在的表达量低和毒种种子批代次窄问题，加快杆状病毒表达系统产业化进程。本研究首次通过Red和Cas9两种重组技术，先后对影响蛋白表达的V-cath、ChiA、P10和重组杆状病毒基因组稳定性的FP25K和DA26基因进行缺失。同时基于对CSFV-E2蛋白的结构和糖基化预测分析，突变影响同源二聚体二硫键形成的糖基化位点。最后通过悬浮转染的方式提高拯救病毒的滴度。结果表明对E2基因突变后，表达的E2蛋白95%以同源二聚体形式存在。通过供体质粒优化和病毒载体基因缺失，E2蛋白的表达水平提高约4倍，可稳定表达蛋白的重组杆状病毒毒株代次从P7代延长至P20代。悬浮转染获得的重组杆状病毒滴度提高约70倍，同时获得足量低代次的毒种，有效缩短从毒种构建到蛋白表达时间，有效解决杆状病毒表达系统表达量低和毒种种子批代次窄的问题，为猪瘟亚单位疫苗研发奠定基础。
2024年01期 v.32;No.157 48-55页 [查看摘要][在线阅读][下载 1431K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：357 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 钱炳旭;薄宗义;白雪雁;张成成;郭梦娇;李梦娇;廖凯;薛峰;吴艳涛;张小荣;
为获得稳定表达猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）核衣壳（N）蛋白的非洲绿猴肾（Vero）细胞系，本研究将PDCoV-N基因克隆入慢病毒载体中，获得重组质粒pLVX-PDCoV-N，利用慢病毒包装系统转染293T细胞，包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒，慢病毒感染Vero细胞，嘌呤霉素加压筛选目的细胞。RT-PCR扩增N基因和测序表明细胞系基因组中存在N蛋白编码序列，Western blot和IFA试验表明N蛋白可在细胞系中稳定表达。应用制备的细胞系对临床PDCoV阳性血清样品进行检测，与ELISA检测结果符合率达到100%。本研究成功建立了稳定表达PDCoV N蛋白的Vero细胞系，为PDCoV N蛋白生物学特性研究和PDCoV的临床检测、流行病学调查奠定了基础。
2024年01期 v.32;No.157 56-61页 [查看摘要][在线阅读][下载 1440K] [阅读次数：3 ] |[下载次数：667 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 钱炳旭;薄宗义;白雪雁;张成成;郭梦娇;李梦娇;廖凯;薛峰;吴艳涛;张小荣;
为获得稳定表达猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）核衣壳（N）蛋白的非洲绿猴肾（Vero）细胞系，本研究将PDCoV-N基因克隆入慢病毒载体中，获得重组质粒pLVX-PDCoV-N，利用慢病毒包装系统转染293T细胞，包装成表达N蛋白的慢病毒颗粒，慢病毒感染Vero细胞，嘌呤霉素加压筛选目的细胞。RT-PCR扩增N基因和测序表明细胞系基因组中存在N蛋白编码序列，Western blot和IFA试验表明N蛋白可在细胞系中稳定表达。应用制备的细胞系对临床PDCoV阳性血清样品进行检测，与ELISA检测结果符合率达到100%。本研究成功建立了稳定表达PDCoV N蛋白的Vero细胞系，为PDCoV N蛋白生物学特性研究和PDCoV的临床检测、流行病学调查奠定了基础。
2024年01期 v.32;No.157 56-61页 [查看摘要][在线阅读][下载 1440K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：667 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 程文杰;李红霞;晏云涛;项勋;董路;杨建发;邹丰才;
为探究紫茎泽兰对钉螺活性的影响，采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术（UPLC-Q-TOF/MS），分别检测紫茎泽兰处理钉螺组、氯硝柳胺处理钉螺对照组和空白对照组的钉螺情况，用主成分分析（PCA）、偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）及正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）进行联合统计分析，筛选差异代谢物。结果表明紫茎泽兰活性成分可以干预钉螺的生长代谢，共筛选出79种差异显著代谢物，甘氨酸等31个代谢物显著上调，L-苏氨酸等48个代谢物显著下调，并得到18条代谢通路阐明了紫茎泽兰干预钉螺活性的代谢机制，为将紫茎泽兰研发为灭螺剂及灭螺药物靶标筛选奠定了理论基础。
2024年01期 v.32;No.157 62-72页 [查看摘要][在线阅读][下载 1518K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：235 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 程文杰;李红霞;晏云涛;项勋;董路;杨建发;邹丰才;
为探究紫茎泽兰对钉螺活性的影响，采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用技术（UPLC-Q-TOF/MS），分别检测紫茎泽兰处理钉螺组、氯硝柳胺处理钉螺对照组和空白对照组的钉螺情况，用主成分分析（PCA）、偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）及正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）进行联合统计分析，筛选差异代谢物。结果表明紫茎泽兰活性成分可以干预钉螺的生长代谢，共筛选出79种差异显著代谢物，甘氨酸等31个代谢物显著上调，L-苏氨酸等48个代谢物显著下调，并得到18条代谢通路阐明了紫茎泽兰干预钉螺活性的代谢机制，为将紫茎泽兰研发为灭螺剂及灭螺药物靶标筛选奠定了理论基础。
2024年01期 v.32;No.157 62-72页 [查看摘要][在线阅读][下载 1518K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：235 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 张秀梅;宋翠萍;谭磊;孙英杰;刘炜玮;廖瑛;丁铲;仇旭升;罗廷荣;
利用同源重组技术将禽网状内皮组织增生症病毒（REV）的长末端重复序列（LTR）整合进CVI988/Rispens疫苗株基因组中所构建成的重组马立克氏病病毒株（r MDV-LTR株），具有较高的增殖效率。为比较r MDV-LTR株与亲本CVI988/Rispens株的免疫效力差异，开展了对这两种疫苗的比较试验。试验将这两种疫苗分别按照三个不同剂量经颈背部皮下接种1日龄SPF鸡。接种后第7 d，攻毒马立克氏病强毒株rMd5，连续观察60 d后进行剖检。临床病理观察结果发现，以不低于250 PFU/羽剂量的rMDV-LTR株或CVI988/Rispens株免疫SPF雏鸡都可以提供大于80%的免疫保护效率；以125 PFU/羽剂量的两种疫苗虽均不能提供大于80%的免疫保护效力，但rMDV-LTR株免疫组试验鸡未出现死亡，仅有2只鸡出现消瘦，剖解脏器无肿瘤，而CVI988/Rispens株免疫组鸡出现2只死亡，其中1只剖解后检出肿瘤。rMDV-LTR株和CVI988/Rispens株免疫组的免疫保护指数分别为77.78%和66.67%。由实验结果可见，在较小免疫剂量下，rMDV-LTR株免疫保护率高于亲本CVI988/Rispens疫苗株。说明重组毒rMDV-LTR疫苗株可以作为一种安全的、有效的新型MDV疫苗。
2024年01期 v.32;No.157 73-81页 [查看摘要][在线阅读][下载 1847K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：192 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 张秀梅;宋翠萍;谭磊;孙英杰;刘炜玮;廖瑛;丁铲;仇旭升;罗廷荣;
利用同源重组技术将禽网状内皮组织增生症病毒（REV）的长末端重复序列（LTR）整合进CVI988/Rispens疫苗株基因组中所构建成的重组马立克氏病病毒株（r MDV-LTR株），具有较高的增殖效率。为比较r MDV-LTR株与亲本CVI988/Rispens株的免疫效力差异，开展了对这两种疫苗的比较试验。试验将这两种疫苗分别按照三个不同剂量经颈背部皮下接种1日龄SPF鸡。接种后第7 d，攻毒马立克氏病强毒株rMd5，连续观察60 d后进行剖检。临床病理观察结果发现，以不低于250 PFU/羽剂量的rMDV-LTR株或CVI988/Rispens株免疫SPF雏鸡都可以提供大于80%的免疫保护效率；以125 PFU/羽剂量的两种疫苗虽均不能提供大于80%的免疫保护效力，但rMDV-LTR株免疫组试验鸡未出现死亡，仅有2只鸡出现消瘦，剖解脏器无肿瘤，而CVI988/Rispens株免疫组鸡出现2只死亡，其中1只剖解后检出肿瘤。rMDV-LTR株和CVI988/Rispens株免疫组的免疫保护指数分别为77.78%和66.67%。由实验结果可见，在较小免疫剂量下，rMDV-LTR株免疫保护率高于亲本CVI988/Rispens疫苗株。说明重组毒rMDV-LTR疫苗株可以作为一种安全的、有效的新型MDV疫苗。
2024年01期 v.32;No.157 73-81页 [查看摘要][在线阅读][下载 1847K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：192 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 孙艳永;田赵勇;徐瑞;陈宁;文世富;
本研究通过对怀孕母牛免疫牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗和牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗后检测胎牛组织中是否存在疫苗病毒，以评价该疫苗的垂直传播能力。试验将16头牛病毒性腹泻病毒（BVDV）抗原和抗体阴性，怀孕60～90 d的母牛随机分成2组，第1组6母牛肌肉注射2.0 mL牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗；另外2头牛不做任何接种作为哨兵牛同群饲养。第2组6母牛肌肉注射2.0 mL牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗；另外2头牛不做任何接种作为哨兵牛同群饲养。母牛免疫后血清抗体转阳，BVDV抗体明显升高。免疫后第56 d剖取免疫牛的胎牛，采集胎牛脑、胸腺、肠系膜淋巴结和脾脏组织用病毒分离方法检测牛病毒性腹泻病毒。结果显示，所有怀孕母牛在整个试验期内无任何临床症状，也无流产现象。试验结束时胎牛发育良好，且未在胎牛的脑、胸腺、肠系膜淋巴结和脾脏组织中分离到牛病毒性腹泻病毒。综上所述，牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗和牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗对怀孕母牛和胎牛都是安全的，无垂直传播。
2024年01期 v.32;No.157 82-87页 [查看摘要][在线阅读][下载 1253K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：293 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 孙艳永;田赵勇;徐瑞;陈宁;文世富;
本研究通过对怀孕母牛免疫牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗和牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗后检测胎牛组织中是否存在疫苗病毒，以评价该疫苗的垂直传播能力。试验将16头牛病毒性腹泻病毒（BVDV）抗原和抗体阴性，怀孕60～90 d的母牛随机分成2组，第1组6母牛肌肉注射2.0 mL牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗；另外2头牛不做任何接种作为哨兵牛同群饲养。第2组6母牛肌肉注射2.0 mL牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗；另外2头牛不做任何接种作为哨兵牛同群饲养。母牛免疫后血清抗体转阳，BVDV抗体明显升高。免疫后第56 d剖取免疫牛的胎牛，采集胎牛脑、胸腺、肠系膜淋巴结和脾脏组织用病毒分离方法检测牛病毒性腹泻病毒。结果显示，所有怀孕母牛在整个试验期内无任何临床症状，也无流产现象。试验结束时胎牛发育良好，且未在胎牛的脑、胸腺、肠系膜淋巴结和脾脏组织中分离到牛病毒性腹泻病毒。综上所述，牛病毒性腹泻病毒1型KE-9基因缺失弱毒疫苗和牛病毒性腹泻病毒2型NY-93基因缺失弱毒疫苗对怀孕母牛和胎牛都是安全的，无垂直传播。
2024年01期 v.32;No.157 82-87页 [查看摘要][在线阅读][下载 1253K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：293 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 李鑫;徐文涛;吉雅图;段丽萍;赵贝;杨丹;董科学;狄栋栋;范伟兴;
为了比较不同布鲁菌病疫苗对乌拉特草原以放牧为主的山羊与绵羊的免疫效果，我们在乌拉特草原6个苏木/镇，随机选取80～100日龄并经过布鲁菌病检测阴性的乌拉特土种绵羊羔385只、二狼山绒山羊羔275只，用6种布鲁菌病疫苗进行免疫效果比对试验。采用琥红平板凝集试验（RBPT）和试管凝集试验（SAT）分别对试验组羊接种疫苗后7、14、21、35、60、120、150、180、210、240、270 d进行转阳率和抗体效价检测；免疫后270 d进行攻毒试验。RBPT和SAT结果显示，M5-90Δ26和S2接种绵羊与山羊后抗体产生快，持续时间长；免疫后攻毒试验结果显示，A19点眼绵羊和A19-ΔVirB12株皮下注射绵羊保护比例均为4/6;M5-90Δ26绵羊皮下注射和ReV.1山羊点眼的保护比例均为4/5；本试验为乌拉特草原建立牛羊免疫无布鲁菌病区筛选理想疫苗，以及为创建全国首个牛羊免疫无布鲁菌病区制定合理的免疫程序提供了科学依据，同时对布鲁菌病疫苗的研制及国内其他地区布鲁菌病防治具有参考价值和指导作用。
2024年01期 v.32;No.157 88-95页 [查看摘要][在线阅读][下载 1376K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：167 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 李鑫;徐文涛;吉雅图;段丽萍;赵贝;杨丹;董科学;狄栋栋;范伟兴;
为了比较不同布鲁菌病疫苗对乌拉特草原以放牧为主的山羊与绵羊的免疫效果，我们在乌拉特草原6个苏木/镇，随机选取80～100日龄并经过布鲁菌病检测阴性的乌拉特土种绵羊羔385只、二狼山绒山羊羔275只，用6种布鲁菌病疫苗进行免疫效果比对试验。采用琥红平板凝集试验（RBPT）和试管凝集试验（SAT）分别对试验组羊接种疫苗后7、14、21、35、60、120、150、180、210、240、270 d进行转阳率和抗体效价检测；免疫后270 d进行攻毒试验。RBPT和SAT结果显示，M5-90Δ26和S2接种绵羊与山羊后抗体产生快，持续时间长；免疫后攻毒试验结果显示，A19点眼绵羊和A19-ΔVirB12株皮下注射绵羊保护比例均为4/6;M5-90Δ26绵羊皮下注射和ReV.1山羊点眼的保护比例均为4/5；本试验为乌拉特草原建立牛羊免疫无布鲁菌病区筛选理想疫苗，以及为创建全国首个牛羊免疫无布鲁菌病区制定合理的免疫程序提供了科学依据，同时对布鲁菌病疫苗的研制及国内其他地区布鲁菌病防治具有参考价值和指导作用。
2024年01期 v.32;No.157 88-95页 [查看摘要][在线阅读][下载 1376K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：167 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 沈欣悦;刘梅;李建梅;俞燕;范建华;戴亚斌;
为了明确不同血清新城疫病毒（NDV）抗体水平对鸡的保护效果，本研究采用重组NDV灭活疫苗（A-Ⅶ株）对鸡进行免疫，通过交叉血凝抑制（HI）试验比较A-Ⅶ株与La Sota株间的血清学差异，并采用NDV标准强毒株F_(48)E_8和基因Ⅶ型强毒株JSC0804对不同抗体水平免疫鸡进行了攻毒保护试验。结果显示：抗A-Ⅶ株血清用A-Ⅶ株抗原测得的平均HI抗体效价显著高于La Sota株抗原（P<0.01），约高1.5log2，而抗La Sota株血清用La Sota株抗原测得的平均HI抗体效价稍高于A-Ⅶ株抗原，但无显著差异（P>0.05），表明2种疫苗株存在一定的血清学差异。在试验条件下，所有免疫鸡经点眼滴鼻攻毒后均未表现明显临床症状，但存在不同程度的排毒现象，排毒率总体上随抗体效价升高呈逐渐下降趋势。A-Ⅶ株疫苗免疫鸡血清HI抗体效价分别达≥13log_2和≥14log_2时可完全阻止F_(48)E_8株和JSC0804株排毒。免疫鸡排毒一般仅限于攻毒后5 d内。本研究阐明了免疫鸡的抗体水平和免疫保护效果的相关性，为新城疫免疫控制提供了依据。
2024年01期 v.32;No.157 96-103页 [查看摘要][在线阅读][下载 1396K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：368 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 沈欣悦;刘梅;李建梅;俞燕;范建华;戴亚斌;
为了明确不同血清新城疫病毒（NDV）抗体水平对鸡的保护效果，本研究采用重组NDV灭活疫苗（A-Ⅶ株）对鸡进行免疫，通过交叉血凝抑制（HI）试验比较A-Ⅶ株与La Sota株间的血清学差异，并采用NDV标准强毒株F_(48)E_8和基因Ⅶ型强毒株JSC0804对不同抗体水平免疫鸡进行了攻毒保护试验。结果显示：抗A-Ⅶ株血清用A-Ⅶ株抗原测得的平均HI抗体效价显著高于La Sota株抗原（P<0.01），约高1.5log2，而抗La Sota株血清用La Sota株抗原测得的平均HI抗体效价稍高于A-Ⅶ株抗原，但无显著差异（P>0.05），表明2种疫苗株存在一定的血清学差异。在试验条件下，所有免疫鸡经点眼滴鼻攻毒后均未表现明显临床症状，但存在不同程度的排毒现象，排毒率总体上随抗体效价升高呈逐渐下降趋势。A-Ⅶ株疫苗免疫鸡血清HI抗体效价分别达≥13log_2和≥14log_2时可完全阻止F_(48)E_8株和JSC0804株排毒。免疫鸡排毒一般仅限于攻毒后5 d内。本研究阐明了免疫鸡的抗体水平和免疫保护效果的相关性，为新城疫免疫控制提供了依据。
2024年01期 v.32;No.157 96-103页 [查看摘要][在线阅读][下载 1396K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：368 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 杨挺懿;杨婧;黄欣梅;韩凯凯;赵冬敏;章丽娇;刘宇卓;李银;张小飞;刘青涛;
为建立一种快速且准确检测鸭源鹅细小病毒（D-GPV）的实时荧光定量PCR方法，本研究通过分析D-GPV基因序列的保守区设计并合成一对特异性引物，构建携带NS1基因的重组质粒作为标准品，绘制实时荧光定量PCR标准曲线，并进行敏感性、特异性、重复性试验和临床样品的检测。结果显示，该方法标准曲线的的线性关系良好，相关系数为0.999；灵敏度高，检测底限为10拷贝；特异性与重复性好，与其他病毒无交叉反应，批间和批内变异系数均低于1%。该方法对人工感染D-GPV鸭泄殖腔拭子和咽拭子样品的检测结果显示，鸭在攻毒后第1 d即可以通过口腔和泄殖腔向外排毒，排毒量在第3 d达到高峰，排毒持续期可达到42 d。本研究所建立的实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性和稳定性好，可用于临床样品中的D-GPV检测。
2024年01期 v.32;No.157 104-109页 [查看摘要][在线阅读][下载 1488K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：611 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] - 杨挺懿;杨婧;黄欣梅;韩凯凯;赵冬敏;章丽娇;刘宇卓;李银;张小飞;刘青涛;
为建立一种快速且准确检测鸭源鹅细小病毒（D-GPV）的实时荧光定量PCR方法，本研究通过分析D-GPV基因序列的保守区设计并合成一对特异性引物，构建携带NS1基因的重组质粒作为标准品，绘制实时荧光定量PCR标准曲线，并进行敏感性、特异性、重复性试验和临床样品的检测。结果显示，该方法标准曲线的的线性关系良好，相关系数为0.999；灵敏度高，检测底限为10拷贝；特异性与重复性好，与其他病毒无交叉反应，批间和批内变异系数均低于1%。该方法对人工感染D-GPV鸭泄殖腔拭子和咽拭子样品的检测结果显示，鸭在攻毒后第1 d即可以通过口腔和泄殖腔向外排毒，排毒量在第3 d达到高峰，排毒持续期可达到42 d。本研究所建立的实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性和稳定性好，可用于临床样品中的D-GPV检测。
2024年01期 v.32;No.157 104-109页 [查看摘要][在线阅读][下载 1488K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：611 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] - 宁宇春;王圆赫;郭祥杰;朱宏阳;田万年;
为建立一种能快速对羊泰勒虫（ovine and caprine theileria）和嗜吞噬细胞无浆体（A. phagocytoph-ilum）同时进行检测的双重PCR方法。根据GenBank已报道的羊泰勒虫MPSP基因和羊嗜吞噬细胞无浆体16S rRNA基因设计合成了2对特异性引物，通过条件优化，建立了双重PCR检测方法。双重PCR可特异扩增出羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体目的条带，片段大小分别为875bp和394bp。该方法具有较好的特异性，对羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体的最低检出浓度为16fg/μL和1fg/μL。对采集的60份血液样本进行双重PCR检测，羊泰勒虫阳性率为46.67%(28/60)，嗜吞噬细胞无浆体阳性率为13.33%(8/60)，混合感染率为10%(6/60)。结果表明，双重PCR方法可用于羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体的快速诊断和流行病学调查。
2024年01期 v.32;No.157 110-114页 [查看摘要][在线阅读][下载 1372K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：321 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 宁宇春;王圆赫;郭祥杰;朱宏阳;田万年;
为建立一种能快速对羊泰勒虫（ovine and caprine theileria）和嗜吞噬细胞无浆体（A. phagocytoph-ilum）同时进行检测的双重PCR方法。根据GenBank已报道的羊泰勒虫MPSP基因和羊嗜吞噬细胞无浆体16S rRNA基因设计合成了2对特异性引物，通过条件优化，建立了双重PCR检测方法。双重PCR可特异扩增出羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体目的条带，片段大小分别为875bp和394bp。该方法具有较好的特异性，对羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体的最低检出浓度为16fg/μL和1fg/μL。对采集的60份血液样本进行双重PCR检测，羊泰勒虫阳性率为46.67%(28/60)，嗜吞噬细胞无浆体阳性率为13.33%(8/60)，混合感染率为10%(6/60)。结果表明，双重PCR方法可用于羊泰勒虫和嗜吞噬细胞无浆体的快速诊断和流行病学调查。
2024年01期 v.32;No.157 110-114页 [查看摘要][在线阅读][下载 1372K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：321 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 徐鹏;吉卫龙;伊立超;张爽;郝嘉翼;高子函;任世斌;时小双;任林柱;李昌;
为建立可应用于猪圆环病毒4型（PCV4）候选疫苗特异性抗体检测与评价方法，本研究应用PCV4 Cap蛋白作为抗原，以PCV4多克隆兔源抗体作为一抗，优化各反应的最佳条件并建立了针对PCV4 Cap蛋白抗体的间接ELISA方法。最佳条件为2μg/m L PCV4 Cap纯化蛋白，4℃包被过夜，5%脱脂乳封闭60 min，待检血清稀释比例为1∶800，反应条件为37℃、45 min，酶标抗体稀释比例为1∶5000，反应条件为37℃、60 min，底物显色时间为10 min,Cut of f值为0.157，灵敏度可达102 400倍。成功建立的抗PCV4Cap蛋白抗体间接ELISA检测方法具有良好的敏感性、重复性和特异性。可为检测PCV4候选疫苗的特异性抗体水平提供一种精准、高效的方法。
2024年01期 v.32;No.157 115-121页 [查看摘要][在线阅读][下载 1383K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：480 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 徐鹏;吉卫龙;伊立超;张爽;郝嘉翼;高子函;任世斌;时小双;任林柱;李昌;
为建立可应用于猪圆环病毒4型（PCV4）候选疫苗特异性抗体检测与评价方法，本研究应用PCV4 Cap蛋白作为抗原，以PCV4多克隆兔源抗体作为一抗，优化各反应的最佳条件并建立了针对PCV4 Cap蛋白抗体的间接ELISA方法。最佳条件为2μg/m L PCV4 Cap纯化蛋白，4℃包被过夜，5%脱脂乳封闭60 min，待检血清稀释比例为1∶800，反应条件为37℃、45 min，酶标抗体稀释比例为1∶5000，反应条件为37℃、60 min，底物显色时间为10 min,Cut of f值为0.157，灵敏度可达102 400倍。成功建立的抗PCV4Cap蛋白抗体间接ELISA检测方法具有良好的敏感性、重复性和特异性。可为检测PCV4候选疫苗的特异性抗体水平提供一种精准、高效的方法。
2024年01期 v.32;No.157 115-121页 [查看摘要][在线阅读][下载 1383K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：480 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 孙彤;孙竹筠;刘静宜;王培培;苏苌;陈鸿军;
尼帕病毒病是一种人畜共患烈性传染病，为能够快速特异检测该病毒，本研究根据尼帕病毒（NiV）N基因序列保守区设计特异性引物和探针，建立一种针对NiV的TaqMan探针荧光定量PCR(qPCR)检测方法，该方法特异性好、敏感性高、稳定性强，可鉴别NiV与其他猪病病毒，扩增效率为102%，最低检测限14.8 copies/μL，敏感性高于常规PCR 10倍，该检测方法的建立可为NiV的快速检测提供技术手段，对促进猪类养殖业的健康发展具有重要意义。
2024年01期 v.32;No.157 122-128页 [查看摘要][在线阅读][下载 1423K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：636 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 孙彤;孙竹筠;刘静宜;王培培;苏苌;陈鸿军;
尼帕病毒病是一种人畜共患烈性传染病，为能够快速特异检测该病毒，本研究根据尼帕病毒（NiV）N基因序列保守区设计特异性引物和探针，建立一种针对NiV的TaqMan探针荧光定量PCR(qPCR)检测方法，该方法特异性好、敏感性高、稳定性强，可鉴别NiV与其他猪病病毒，扩增效率为102%，最低检测限14.8 copies/μL，敏感性高于常规PCR 10倍，该检测方法的建立可为NiV的快速检测提供技术手段，对促进猪类养殖业的健康发展具有重要意义。
2024年01期 v.32;No.157 122-128页 [查看摘要][在线阅读][下载 1423K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：636 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 柳方远;李双星;印春生;吉婧;朱明哲;刘业兵;
弓形虫病是一种重要的人兽共患病，犬是弓形虫重要的中间宿主，有必要建立一种快速、灵敏的犬弓形虫病检测方法。根据GenBank中弓形虫529 bp基因重复序列设计巢式PCR引物，通过优化反应条件建立巢式PCR检测方法。特异性试验结果显示，该方法对牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、犬新孢子虫的基因扩增无条带；灵敏度试验结果显示，该方法最低可以检出0.134 pg的弓形虫基因，比目前国标PCR方法高100倍。对感染弓形虫犬的组织样品检测发现，巢式PCR能在感染犬的不同组织中检测出弓形虫基因。建立的犬弓形虫巢式PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好，为该病的检测奠定了基础。
2024年01期 v.32;No.157 129-134页 [查看摘要][在线阅读][下载 1409K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：615 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] - 柳方远;李双星;印春生;吉婧;朱明哲;刘业兵;
弓形虫病是一种重要的人兽共患病，犬是弓形虫重要的中间宿主，有必要建立一种快速、灵敏的犬弓形虫病检测方法。根据GenBank中弓形虫529 bp基因重复序列设计巢式PCR引物，通过优化反应条件建立巢式PCR检测方法。特异性试验结果显示，该方法对牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、犬新孢子虫的基因扩增无条带；灵敏度试验结果显示，该方法最低可以检出0.134 pg的弓形虫基因，比目前国标PCR方法高100倍。对感染弓形虫犬的组织样品检测发现，巢式PCR能在感染犬的不同组织中检测出弓形虫基因。建立的犬弓形虫巢式PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好，为该病的检测奠定了基础。
2024年01期 v.32;No.157 129-134页 [查看摘要][在线阅读][下载 1409K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：615 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] - 徐毅;余良政;林霜;任同伟;王豪;曾昊;郭嘉宁;郭金凡;黄崇强;欧阳康;黄伟坚;韦祖樟;陈樱;
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染肺泡巨噬细胞，严重损害免疫系统，导致与其他病毒共感染现象，其中猪流感病毒（SIV）也是病原之一。为了快速检测和区分PRRSV基因型与SIV亚型，本研究针对H1、H3亚型SIV的HA基因和美洲型、欧洲型PRRSV的N、M基因的保守序列，分别设计了4对特异性扩增引物，在引物浓度、退火温度等反应条件的系统优化下，分别对其特异性和敏感性进行验证，建立了能够快速检测以上4种病原的多重PCR方法，并对155份临床样品进行了检测。结果显示，该检测方法特异性好、灵敏度高，对H1-SIV、H3-SIV、NA-PRRSV和EU-PRRSV的最低检出量均低至9.86×10~0 copies/μL。以单一PCR方法对所有临床样品进行检测后发现，检测结果与多重PCR检测结果一致，证明这种多重PCR方法可以用于这4种病毒的快速检测与分型鉴定。
2024年01期 v.32;No.157 135-141页 [查看摘要][在线阅读][下载 1396K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：384 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 徐毅;余良政;林霜;任同伟;王豪;曾昊;郭嘉宁;郭金凡;黄崇强;欧阳康;黄伟坚;韦祖樟;陈樱;
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染肺泡巨噬细胞，严重损害免疫系统，导致与其他病毒共感染现象，其中猪流感病毒（SIV）也是病原之一。为了快速检测和区分PRRSV基因型与SIV亚型，本研究针对H1、H3亚型SIV的HA基因和美洲型、欧洲型PRRSV的N、M基因的保守序列，分别设计了4对特异性扩增引物，在引物浓度、退火温度等反应条件的系统优化下，分别对其特异性和敏感性进行验证，建立了能够快速检测以上4种病原的多重PCR方法，并对155份临床样品进行了检测。结果显示，该检测方法特异性好、灵敏度高，对H1-SIV、H3-SIV、NA-PRRSV和EU-PRRSV的最低检出量均低至9.86×10~0 copies/μL。以单一PCR方法对所有临床样品进行检测后发现，检测结果与多重PCR检测结果一致，证明这种多重PCR方法可以用于这4种病毒的快速检测与分型鉴定。
2024年01期 v.32;No.157 135-141页 [查看摘要][在线阅读][下载 1396K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：384 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 张燕;董洪燕;于圣青;杨静静;吴植;吴双;洪双鹏;朱善元;邢华;
为更好的指导养殖场鸭疫里默氏杆菌病临床用药以及探究该菌多重耐药机制，本研究对安徽地区患病鸭采样、细菌分离鉴定后，进行生化鉴定、药敏试验，再根据药敏结果进行氨基糖苷类耐药基因以及Ⅰ类整合子鉴定。药敏试验结果表明该地区34株鸭疫里默氏杆菌分离株对头孢拉定、头孢曲松、氟苯尼考、大观霉素、磺胺异恶唑等抗生素较敏感，对卡那霉素、庆大霉素、丁胺卡那、链霉素、阿奇霉素等抗生素均有较强的耐药性；其中有97%的菌株存在多重耐药现象，最高可耐19种抗生素。15种氨基糖苷类耐药基因鉴定结果表明aac(6')Ⅰb基因、aac(6')Ⅱ基因、rmtC基因、aph(3')Ⅱa基因检出率分别为94.1%(32/34)、82.4%(28/34)、73.5%(25/34)、70.6%(24/34)，其余基因均未检测到；同时34株分离株均携带Ⅰ类整合子，大小为1 kb，其基因盒种类为aadA1（链霉素耐药基因）；其氨基糖苷类耐药表型和耐药基因符合率大于69%。因此，安徽地区鸭疫里默氏杆菌分离株多重耐药性严重，需加强对抗生素的用药规范性，特别要注意氨基糖苷类药物使用。
2024年01期 v.32;No.157 142-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 1487K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：708 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] - 张燕;董洪燕;于圣青;杨静静;吴植;吴双;洪双鹏;朱善元;邢华;
为更好的指导养殖场鸭疫里默氏杆菌病临床用药以及探究该菌多重耐药机制，本研究对安徽地区患病鸭采样、细菌分离鉴定后，进行生化鉴定、药敏试验，再根据药敏结果进行氨基糖苷类耐药基因以及Ⅰ类整合子鉴定。药敏试验结果表明该地区34株鸭疫里默氏杆菌分离株对头孢拉定、头孢曲松、氟苯尼考、大观霉素、磺胺异恶唑等抗生素较敏感，对卡那霉素、庆大霉素、丁胺卡那、链霉素、阿奇霉素等抗生素均有较强的耐药性；其中有97%的菌株存在多重耐药现象，最高可耐19种抗生素。15种氨基糖苷类耐药基因鉴定结果表明aac(6')Ⅰb基因、aac(6')Ⅱ基因、rmtC基因、aph(3')Ⅱa基因检出率分别为94.1%(32/34)、82.4%(28/34)、73.5%(25/34)、70.6%(24/34)，其余基因均未检测到；同时34株分离株均携带Ⅰ类整合子，大小为1 kb，其基因盒种类为aadA1（链霉素耐药基因）；其氨基糖苷类耐药表型和耐药基因符合率大于69%。因此，安徽地区鸭疫里默氏杆菌分离株多重耐药性严重，需加强对抗生素的用药规范性，特别要注意氨基糖苷类药物使用。
2024年01期 v.32;No.157 142-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 1487K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：708 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] - 郭昊;乌东高娃;赵洪哲;刘春羽;侯丽娜;王凤雪;温永俊;
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）给养猪业带来巨大经济损失，尽快建立该病毒的快速诊断方法尤为重要。PRRSV ORF4基因编码的结构蛋白GP4为病毒感染所必须。本研究为制备GP4单克隆抗体，选取ORF4优势序列优化合成，连入pET-32a原核表达载体，构建重组质粒pET-32a-ORF4；经双酶切验证后，转化至BL21(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达并纯化；经SDS-PAGE及Westernblot鉴定成功后免疫小鼠，制备筛选单克隆抗体，对制备的单克隆抗体进行验证。结果表明，GP4蛋白以可溶形式表达，大小为30 kDa；纯化蛋白免疫小鼠后，共筛选4株IgG亚型阳性杂交瘤细胞株；所制备单克隆抗体可与抗原特异性结合。本研究为PRRSV诊断方法的建立及后续研究奠定了基础。
2024年01期 v.32;No.157 150-156页 [查看摘要][在线阅读][下载 1338K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：703 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] - 郭昊;乌东高娃;赵洪哲;刘春羽;侯丽娜;王凤雪;温永俊;
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）给养猪业带来巨大经济损失，尽快建立该病毒的快速诊断方法尤为重要。PRRSV ORF4基因编码的结构蛋白GP4为病毒感染所必须。本研究为制备GP4单克隆抗体，选取ORF4优势序列优化合成，连入pET-32a原核表达载体，构建重组质粒pET-32a-ORF4；经双酶切验证后，转化至BL21(DE3)感受态细胞，IPTG诱导表达并纯化；经SDS-PAGE及Westernblot鉴定成功后免疫小鼠，制备筛选单克隆抗体，对制备的单克隆抗体进行验证。结果表明，GP4蛋白以可溶形式表达，大小为30 kDa；纯化蛋白免疫小鼠后，共筛选4株IgG亚型阳性杂交瘤细胞株；所制备单克隆抗体可与抗原特异性结合。本研究为PRRSV诊断方法的建立及后续研究奠定了基础。
2024年01期 v.32;No.157 150-156页 [查看摘要][在线阅读][下载 1338K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：703 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] - 杨彩虹;张萍;买买提艾力·艾合木提;黄巧玲;王震;曹旭东;
探讨高分辨率熔解曲线（HRM）技术检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的可行性。用传统药物敏感性试验进行结核分枝杆菌链霉素耐药性检测；以Rpsl和rrs的耐药决定区为靶点设计引物进行HRM分析，判断菌株是否对链霉素耐药；以药敏结果为标准，应用SPSS17.0分析两种检测结果之间的符合率；Kappa检验分析两种结果的一致性。药敏结果显示，84株菌株中有20株对链霉素耐药，64株为敏感株；HRM检测结果显示，24株菌株对链霉素耐药，60株为敏感株；以药敏结果为参照，HRM检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的敏感性为75%，特异性为85.9%，经Kappa检验显示，两种方法检测结果具有中度一致性。本研究结果表明HRM可快速检测结核分枝杆菌对链霉素的耐药性，具有较好的灵敏度，在耐药结核病的早期辅助诊断方面具有一定的应用价值。
2024年01期 v.32;No.157 157-163页 [查看摘要][在线阅读][下载 1595K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：355 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 杨彩虹;张萍;买买提艾力·艾合木提;黄巧玲;王震;曹旭东;
探讨高分辨率熔解曲线（HRM）技术检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的可行性。用传统药物敏感性试验进行结核分枝杆菌链霉素耐药性检测；以Rpsl和rrs的耐药决定区为靶点设计引物进行HRM分析，判断菌株是否对链霉素耐药；以药敏结果为标准，应用SPSS17.0分析两种检测结果之间的符合率；Kappa检验分析两种结果的一致性。药敏结果显示，84株菌株中有20株对链霉素耐药，64株为敏感株；HRM检测结果显示，24株菌株对链霉素耐药，60株为敏感株；以药敏结果为参照，HRM检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的敏感性为75%，特异性为85.9%，经Kappa检验显示，两种方法检测结果具有中度一致性。本研究结果表明HRM可快速检测结核分枝杆菌对链霉素的耐药性，具有较好的灵敏度，在耐药结核病的早期辅助诊断方面具有一定的应用价值。
2024年01期 v.32;No.157 157-163页 [查看摘要][在线阅读][下载 1595K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：355 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 韩瑞;杨行;张文波;陈佳玲;周晓丽;
为了解猪链球菌临床分离株的生物学特性、耐药基因与毒力基因的携带情况。采集疑似链球菌感染病死的猪肺脏和关节液，用常规方法分离细菌，通过镜检、16S rRNA序列测定分析、分子分型、动物实验鉴定分离菌的生物学特性，用药敏试验进行药物敏感度测定，并利用PCR检测耐药基因及毒力基因。结果可知，从8个养猪场的10份肺脏和关节液中共分离到10株菌，经16S rRNA序列比对和血清分型，10株分离株均为猪链球菌，其中9型7株，1型1株，其余2株为猪豕链球菌和猪生殖道链球菌；小鼠致病性试验结果显示，分离株JXNC1906、JXJJ1904和JXNC1904的毒力较强；毒力基因检测显示，JXNC2103可检出6种毒力基因，JXNC2011株只检出mrp毒力基因，毒力型mrp~+ef~-gdh~+sly~+mmum~+Orf2~+2株、mrp~-ef~+gdh~+sly~-mmum~+Orf2~-4株、mrpef~-gdh~+sly~-mmum~+Orf2~+1株、mrp~+ef~+gdh~+sly~-mmum~+Orf2~+1株；药敏试验结果，10株分离菌的耐药性均不强，对大观霉素、恩诺沙星、丁胺卡纳、氨苄西林和头孢曲松均在中度以上敏感；耐药基因检测结果，10株链球菌分离株均能检测出氟喹诺酮类耐药基因，除JXNC1906外，其他9株还能检测出四环素类、大环内酯类以及磺胺类耐药基因，分离菌JXNC1906检测出β-内酰胺类blaTEM和氨基糖苷类Aph3’耐药基因，其他分离菌株可检测出vanA、vanD、strA、strB、floR以及多重耐药基因optrA和Lsa(E)等。结果表明，从临床病死猪中分离的链球菌致病性高低不一，对临床常见药物仍较为敏感，不同分离株的耐药基因表型和毒力基因表型相差较大。本实验结果为进一步研究猪链球菌的致病机理和临床有效防控措施提供基础。
2024年01期 v.32;No.157 164-174页 [查看摘要][在线阅读][下载 1350K] [阅读次数：8 ] |[下载次数：1231 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] - 韩瑞;杨行;张文波;陈佳玲;周晓丽;
为了解猪链球菌临床分离株的生物学特性、耐药基因与毒力基因的携带情况。采集疑似链球菌感染病死的猪肺脏和关节液，用常规方法分离细菌，通过镜检、16S rRNA序列测定分析、分子分型、动物实验鉴定分离菌的生物学特性，用药敏试验进行药物敏感度测定，并利用PCR检测耐药基因及毒力基因。结果可知，从8个养猪场的10份肺脏和关节液中共分离到10株菌，经16S rRNA序列比对和血清分型，10株分离株均为猪链球菌，其中9型7株，1型1株，其余2株为猪豕链球菌和猪生殖道链球菌；小鼠致病性试验结果显示，分离株JXNC1906、JXJJ1904和JXNC1904的毒力较强；毒力基因检测显示，JXNC2103可检出6种毒力基因，JXNC2011株只检出mrp毒力基因，毒力型mrp~+ef~-gdh~+sly~+mmum~+Orf2~+2株、mrp~-ef~+gdh~+sly~-mmum~+Orf2~-4株、mrpef~-gdh~+sly~-mmum~+Orf2~+1株、mrp~+ef~+gdh~+sly~-mmum~+Orf2~+1株；药敏试验结果，10株分离菌的耐药性均不强，对大观霉素、恩诺沙星、丁胺卡纳、氨苄西林和头孢曲松均在中度以上敏感；耐药基因检测结果，10株链球菌分离株均能检测出氟喹诺酮类耐药基因，除JXNC1906外，其他9株还能检测出四环素类、大环内酯类以及磺胺类耐药基因，分离菌JXNC1906检测出β-内酰胺类blaTEM和氨基糖苷类Aph3’耐药基因，其他分离菌株可检测出vanA、vanD、strA、strB、floR以及多重耐药基因optrA和Lsa(E)等。结果表明，从临床病死猪中分离的链球菌致病性高低不一，对临床常见药物仍较为敏感，不同分离株的耐药基因表型和毒力基因表型相差较大。本实验结果为进一步研究猪链球菌的致病机理和临床有效防控措施提供基础。
2024年01期 v.32;No.157 164-174页 [查看摘要][在线阅读][下载 1350K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：1231 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] - 康龙山;于慧茹;杨德全;李鑫;沈海潇;杨显超;王建;徐丽娜;葛菲菲;
猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染引起的仔猪严重腹泻性疾病，传播快，发病急，死亡率高，给我国养猪业造成巨大损失。2021年10月上海某猪场产房仔猪发生腹泻，发病率为30%～50%，死亡率为20%～30%，猪群之前进行过疫苗免疫。粪便样本经猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（RV）荧光RT-PCR检测，结果显示：PEDV检测为阳性，TGEV和RV检测均为阴性。经全基因测序后进行系统进化分析，结果显示：全基因序列属于GⅡ-c亚群，S基因序列属于GⅡ-b亚群，与目前的经典疫苗株CV777和变异株AJ1102相比，CV777的全基因和S基因都属于GⅠ-b群，AJ1102的全基因和S基因都属于GⅡ-b亚群，研究结果表明新基因型的PEDV已在上海地区流行，而传统疫苗株无法提供好的免疫效果，提示新的防控策略的制定和有针对性的疫苗的生产和使用，对于预防PEDV感染和流行有重要意义。
2024年01期 v.32;No.157 175-181页 [查看摘要][在线阅读][下载 1493K] [阅读次数：2 ] |[下载次数：434 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 康龙山;于慧茹;杨德全;李鑫;沈海潇;杨显超;王建;徐丽娜;葛菲菲;
猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染引起的仔猪严重腹泻性疾病，传播快，发病急，死亡率高，给我国养猪业造成巨大损失。2021年10月上海某猪场产房仔猪发生腹泻，发病率为30%～50%，死亡率为20%～30%，猪群之前进行过疫苗免疫。粪便样本经猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（RV）荧光RT-PCR检测，结果显示：PEDV检测为阳性，TGEV和RV检测均为阴性。经全基因测序后进行系统进化分析，结果显示：全基因序列属于GⅡ-c亚群，S基因序列属于GⅡ-b亚群，与目前的经典疫苗株CV777和变异株AJ1102相比，CV777的全基因和S基因都属于GⅠ-b群，AJ1102的全基因和S基因都属于GⅡ-b亚群，研究结果表明新基因型的PEDV已在上海地区流行，而传统疫苗株无法提供好的免疫效果，提示新的防控策略的制定和有针对性的疫苗的生产和使用，对于预防PEDV感染和流行有重要意义。
2024年01期 v.32;No.157 175-181页 [查看摘要][在线阅读][下载 1493K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：434 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ]