- 刘曼玉;朱顺海;赵其平;贾刘数;肖克;赵焕之;于钰;黄兵;韩红玉;董辉;
利用RT-PCR、间接免疫荧光实验、免疫印迹实验、抗体中和实验以及BiFC等方法对柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2同源分子—EtRON2_(L2)的特性和功能进行研究。结果发现EtRON2_(L2)氨基酸序列与常规的EtRON2仅有26.63%的同源性，mRNA水平在第二代裂殖子中最高，而蛋白水平在第二代裂殖子和子孢子阶段最高；EtRON2_(L2)在游离的第二代裂殖子和子孢子阶段主要分布于胞质，而在入侵后子孢子中主要分布于虫体表面；抗rEtRON2_(L2)多克隆血清处理组明显抑制子孢子入侵细胞；EtRON2_(L2)与EtAMA3之间存在互作关系。本研究为探究EtRON2_(L2)在球虫入侵过程中的作用机制奠定基础。
2024年04期 v.32;No.160 1-10页 [查看摘要][在线阅读][下载 1496K] [阅读次数：40 ] |[下载次数：230 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] - 陶双;董善武;
为探究白细胞介素12(interleukin 12,IL-12)在呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)感染小鼠气道重塑中的作用机制。体外培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)，经RSV感染后观测细胞中IL-12表达的释放规律。采用滴鼻法建立RSV感染模型，观察IL-12 P40基因敲除[IL-12 P40(-/-)]小鼠肺组织病理改变、BALF中Th1/Th2细胞因子、肺组织信号转导和转录激活因子4(signal transducer and activator of transcriptional,STAT4)及气道重塑标记物表达的变化。感染3、12、24 h，感染组IL-12水平均低于对照组(P<0.05)。IL-12 P40(-/-)小鼠淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞数、IL-5、IL-13、气道炎症病理评分、ColⅠ、FN-1和α-SMA表达水平高于野生型，巨噬细胞数、IL-12、IFN-γ和p-STAT4/STAT4水平低于野生型(P<0.05)。RSV感染诱导AECⅡ细胞和野生型小鼠IL-12水平下调，IL-12缺乏可加重RSV小鼠气道炎症和气道重塑，可能与抑制STAT4活化有关。
2024年04期 v.32;No.160 11-16页 [查看摘要][在线阅读][下载 1328K] [阅读次数：11 ] |[下载次数：211 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 朱媛媛;许榜丰;闫鸣昊;刘芹防;滕巧泱;苑纯秀;李雪松;李泽君;
本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，首先靶向犬全基因组设计合成转录sgRNA的DNA文库，并将DNA文库全部克隆于lentiCRISPR v2慢病毒转移载体上，高通量测序结果显示文库覆盖度高、均一性良好。将质粒文库和慢病毒包装系统质粒共转染293T细胞，收取含慢病毒样病毒的上清液感染MDCK细胞，在最适浓度嘌呤霉素筛选下，收集嘌呤霉素抗性细胞，冻存于-80℃，提取一部分细胞的基因组，通过PCR扩增转录sgRNA的DNA，将PCR产物插入到T载体后，挑取单克隆菌落，测序表明细胞文库中转录的sgRNA具有较好的覆盖度。本实验成功构建了犬全基因组范围转录sgRNA的质粒文库，并成功构建了MDCK细胞全基因组范围的基因编辑细胞库，该文库可作为后续筛选病毒复制关键宿主因子的细胞平台。
2024年04期 v.32;No.160 17-24页 [查看摘要][在线阅读][下载 1415K] [阅读次数：13 ] |[下载次数：699 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 左东;李子晨;尹伊;胡海;王少辉;祁晶晶;田明星;于圣青;
细菌的荧光标记是一种重要的常用实验标记技术，用于研究细菌生理生化特性、感染宿主体内示踪、感染细胞示踪等研究。细菌的荧光标记通常通过质粒表达荧光蛋白来实现，而不同类型的细菌，由于菌种特性不同，构建的质粒往往不能通用。本研究构建了一种可诱导表达增强型绿色荧光蛋白的穿梭质粒pBT-iEGFP，该质粒可通过添加无水四环素诱导表达绿色荧光蛋白。诱导表达和传代稳定性试验表明，pBT-iEGFP质粒可在禽致病性大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌和马耳他布鲁菌中成功诱导表达绿色荧光蛋白，在五代盲传中该质粒能在细菌中稳定遗传。胞内布鲁菌诱导表达试验证实，pBT-iEGFP质粒可成功示踪细胞感染过程中活的布鲁菌。总之，本研究构建的pBT-iEGFP质粒可作为细菌的荧光示踪研究工具，应用于多种实验研究。
2024年04期 v.32;No.160 25-31页 [查看摘要][在线阅读][下载 1527K] [阅读次数：9 ] |[下载次数：1015 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 权冉;葛丽娟;陈俊贞;袁圆圆;付强;史慧君;
为了探索宿主蛋白Rab11a在感染牛病毒性腹泻病毒(BVDV)后，对细胞增殖的影响。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Rab11a基因稳定敲除的MDBK细胞株，设计靶向Rab11a基因的向导RNA表达载体，采用Western blot检测Rab11a基因敲除后的蛋白表达情况；使用实时荧光定量qPCR、免疫荧光染色试验、Reed-Muench法等技术检测BVDV感染Rab11a KO细胞后病毒RNA水平、双链RNA(dsRNA)积累水平、病毒滴度及致细胞病变(CPE)情况等。Western blot检测结果显示，成功构建出Rab11a基因敲除的细胞Rab11a KO；Rab11a基因敲除显著抑制BVDV 5'UTR mRNA和dsRNA水平的积累，感染36 h后，Scramble细胞明显有大量细胞病变，出现皱缩、碎裂、形成空泡后脱落等现象，Rab11a KO细胞的CPE现象明显低于Scramble细胞；在BVDV感染细胞12 h后，与Scramble细胞相比，Rab11a KO细胞的病毒滴度显著性降低，结果证明了敲除MDBK细胞的Rab11a基因对BVDV在胞内复制起到抑制作用。本研究结果为了解宿主蛋白Rab11a与BVDV的相互作用，以及Rab11a对病毒的复制增殖的作用提供了新的科学依据。
2024年04期 v.32;No.160 32-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 1349K] [阅读次数：11 ] |[下载次数：254 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 乔淑媛;滕巧泱;李雪松;刘芹防;张志飞;王思琪;李泽君;杨健美;王彩云;
目前，H9N2亚型禽流感病毒是我国最主要的低致病性禽流感病毒，造成禽养殖业的严重经济损失。H9N2禽流感病毒灭活疫苗是防控该疫病的最有效方式，然而，H9N2病毒在免疫压力下容易产生抗原变异，导致疫苗免疫失败，其机制尚不清楚。在前期研究中，我们通过模拟H9N2禽流感免疫压力筛选出携带HA_(D201N)单点突变的逃逸株，但HA_(D201N)如何导致H9N2病毒逃逸株出现的原因尚不明确。为此，本研究利用8质粒反向遗传技术方法拯救出1株A/Chicken/Shanghai/1/2006(H9N2)(简称SH1)及其免疫逃逸株rSH1-HA_(D201N)。为了鉴定HA_(D201N)是否通过影响H9N2禽流感病毒复制能力而导致病毒发生免疫逃逸，用0.001 MOI的病毒接种MDCK并测定其生长曲线，结果表明HA_(D201N)点突变可显著降低rSH1病毒的复制能力，且病毒复制能力的变化不是rSH1病毒发生逃逸的主要原因。为了研究HA_(D201N)是否通过影响H9N2病毒抗原变异而产生病毒逃逸株，将原毒株与突变毒株加入佐剂后免疫鸡以制备多克隆抗体血清，利用交叉HI试验，计算R值并分析抗原变异，结果表明rSH1与rSH1-HA_(D201N)的R值为2，说明HA_(D201N)会导致rSH1发生显著的抗原变异，从而使病毒在免疫压力下逃逸。本研究为探索H9N2禽流感病毒抗原变异规律及其疫苗研发奠定了基础。
2024年04期 v.32;No.160 39-45页 [查看摘要][在线阅读][下载 1626K] [阅读次数：12 ] |[下载次数：334 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 李阳;马园;王国华;田普厚;李成龙;张七斤;
为了更好了解羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)基因组的数据库信息及功能分析，本试验通过Illumina TruSeq? Nano DNA Sample Prep Kit方法构建文库对分离株ORFV-Q进行全基因组测序，进行NR注释、GO注释、KEGG注释等进行生物信息学分析。试验结果显示，ORFV-Q株基因组大小为127 160 bp，GC含量分布未见异常，预测到123个基因。根据NR数据库注释对比结果，有116个基因得到注释；根据GO数据库注释，其中参与生物学途径基因有30个，细胞组分基因有33个，分子功能基因有8个；通过与KEGG代谢通路数据库进行比对，有5个基因可以对应；Swiss-Prot数据库注释共有75个基因的蛋白序列功能被注释。本研究通过对ORFV-Q株进行全基因组测序，并对其进行基因组组分分析和基因功能注释，不仅为ORFV基因组的研究提供数据支持，也为后续疫苗的开发研究提供了理论依据。
2024年04期 v.32;No.160 46-52页 [查看摘要][在线阅读][下载 1430K] [阅读次数：11 ] |[下载次数：424 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 张小玲;李日顺;樊擎莹;王海堃;王瑜欣;汪洋;
猪链球菌(S.suis)是一种重要的人畜共患病原菌，给养猪业造成重大的经济损失。为了评估猪链球菌磷酸ABC转运体ATP酶蛋白的免疫保护效果，本研究构建了猪链球菌磷酸ABC转运体ATP酶原核表达载体进行蛋白的重组表达，纯化并制备该重组蛋白的亚单位疫苗，加强免疫接种后两周，检测其血清抗体效价、免疫保护率、各脏器载菌量以及炎性因子表达情况。结果显示，该蛋白经大肠杆菌表达后主要以可溶形式存在。ELISA检测表明该蛋白可以诱发小鼠产生高水平IgG抗体，免疫组小鼠抗体水平显著高于对照组，该重组蛋白对小鼠感染2型猪链球菌(S.suis serotype 2,S.suis 2)的保护率达到60%，显著降低了小鼠大脑、心脏及肺脏的载菌量，免疫组小鼠细胞因子IL-1β、IFN-γ、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达显著上调。研究表明猪链球菌重组磷酸ABC转运体ATP酶蛋白具有较强的免疫原性，是猪链球菌病潜在的亚单位疫苗候选蛋白。
2024年04期 v.32;No.160 53-59页 [查看摘要][在线阅读][下载 1336K] [阅读次数：8 ] |[下载次数：305 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 王勤;欧云文;汪洋;潘琴;刘俐君;何博;
为了建立一种快速鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪圆环病毒3型(PCV-3)、猪圆环病毒4型(PCV-4)的方法，试验设计合成PCV-2、PCV-3、PCV-4特异性鉴别检测引物，经一步法三重RT-PCR反应条件的优化，建立了PCV-2、PCV-3、PCV-4三重PCR鉴别检测方法。该方法对PCV-2、PCV-3、PCV-4、PCV-2/PCV-3/PCV-4可分别扩增出216、415、678 bp、216 bp/415 bp/678 bp的特异性条带，检测PRV、PPV、PRRSV、CSFV、PEDV、TGEV均为阴性，对PCV-2、PCV-3、PCV-4的最低检测量分别为1.0×10~2、1.0×10~3、1.0×10~3拷贝/μL，与PCV-2、PCV-3、PCV-4单项PCR方法的符合率均为100%，应用该方法检测85份临床病料样品，PCV-2、PCV-3、PCV-4阳性感染率分别为21.17%、14.12%、4.71%。说明建立的PCV-2、PCV-3、PCV-4三重PCR鉴别检测方法具有良好的特异性、敏感性、准确性和临床适用性，为PCV-2、PCV-3、PCV-4的临床鉴别诊断提供一种简便、快速的分子生物学检测技术。
2024年04期 v.32;No.160 60-66页 [查看摘要][在线阅读][下载 1794K] [阅读次数：11 ] |[下载次数：305 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 乔思娜;李丽薇;赵款;高飞;周艳君;姜一峰;童武;赵冉;童光志;李国新;董世山;
为了快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swin fever virus,ASFV)，本文根据我国流行毒株ASFV SY18(GenBank ID：MH766894.1)已公布的K205R基因序列设计并合成特异性引物及探针，建立针对K205R基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法。经过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测试验分析显示，本文建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法Ct值与标准品在1×10~(11)～1×10~2 copies/μL范围内具有很好的线性关系，相关系数为0.998，斜率为-2.797，检测下限为10~2 copies/μL，与其他能引起相似临床症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示，组间与组内变异系数均小于1.53774%，重复性好。本方法适用于临床样品及本实验室构建的表达ASFV K205R基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴定及检测，对ASFV快速检测及ASF早期诊断有重要意义。
2024年04期 v.32;No.160 67-72页 [查看摘要][在线阅读][下载 1830K] [阅读次数：17 ] |[下载次数：808 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 庄宝灿;朱进进;余莉;
制备弓形虫肌动蛋白(TgActin)多肽表位抗体并探讨其应用价值。BepiPred 1.0 Server在线分析设计TgActin抗原表位，并与多种属Actin进行同源比对，选取并合成高特异性多肽片段序列免疫新西兰兔。末次免疫后收集兔血清并使用Protein G纯化抗体，SDS-PAGE检测抗体纯度，ELISA测定抗体效价，Western blot分析抗体的特异性及TgActin表位抗体作为内参抗体的可能性，免疫荧光观察胞内速殖子形态。结果显示，ELISA测定抗体效价为1∶128 000，Western blot结果显示抗体特异性识别弓形虫Actin，免疫荧光染色显示TgActin表位抗体可以标记纳虫泡内速殖子。结果表明，成功制备了TgActin多肽表位抗体，可用做弓形虫蛋白检测的内参抗体及其在细胞内的免疫荧光检测，为后续弓形虫研究提供了便利条件。
2024年04期 v.32;No.160 73-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 1310K] [阅读次数：9 ] |[下载次数：138 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 严杰聪;王帅勇;王曼茱;王娟;荣新利;邢燕茹;虞凌雪;周艳君;单同领;童武;郑浩;刘长龙;童光志;于海;
Cap蛋白作为猪圆环病毒2型(PCV2)的主要结构蛋白，构成病毒的核衣壳，是PCV2的主要免疫保护性抗原，在PCV2血清学诊断中具有重要意义。本研究根据PCV2的ORF2基因序列设计特异性引物，通过PCR方法扩增得到去核定位信号肽的ORF2基因，并通过同源重组将其克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中，经测序鉴定成功获得重组质粒 pCold-Ⅰ-Cap。将重组质粒转化至感受态细胞BL21中进行表达，通过考马斯亮蓝染色以及免疫印迹试验检测Cap蛋白的表达，同时将纯化后的重组蛋白通过优化反应条件建立检测PCV2血清抗体的间接ELISA方法。结果表明：重组去核定位信号肽Cap蛋白可溶性表达且可以与PCV2阳性血清特异性结合，通过探索不同蛋白包被浓度以及不同一抗孵育浓度初步建立了间接ELISA检测方法，进而为PCV2抗体的有效监测奠定基础。
2024年04期 v.32;No.160 79-84页 [查看摘要][在线阅读][下载 1390K] [阅读次数：13 ] |[下载次数：616 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 李梅;杨美;岳筠;王柏林;宋春;朱二鹏;单春兰;文明;程振涛;
为筛选鸡毒支原体(MG)膜蛋白，利用生物信息学软件对其进行序列分析后，选择不含跨膜区的714 bp基因片段作为靶标蛋白进行原核表达(因其分子量约31 kDa，故而命名为P31蛋白)，表达P31蛋白并进行纯化后制备兔多克隆抗体，运用ELISA方法检测抗体效价，提取MG液体培养物总蛋白、胞浆蛋白、膜蛋白，利用Western blot进行亚细胞定位。结果显示，P31蛋白具有跨膜结构和良好的B细胞抗原表位，原核表达后获取融合蛋白rP31，大小约为31 kDa，ELISA检测兔血清效价为1∶25 600，Western blot分析显示，rP31蛋白分布在MG膜表面。本研究证实了P31蛋白确为MG膜蛋白且抗原性良好，可做为研发MG新型诊断方法、基因工程疫苗及治疗药物的候选蛋白。
2024年04期 v.32;No.160 85-90页 [查看摘要][在线阅读][下载 1822K] [阅读次数：12 ] |[下载次数：235 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 宋若楠;刘春草;李航;王真真;贾楠楠;朱杰;李传峰;程松;梁留存;刘光清;王金泉;孟春春;
为获得治疗犬病毒性传染病的特效药物，本研究将铁蛋白与犬α干扰素进行融合表达。首先根据GenBank中公布的犬α干扰素序列(IFN2a)合成模板，通过融合PCR连入铁蛋白编码基因的上游，并将该重组基因克隆至原核表达载体pCold-TF中，获得重组质粒pCold-TF-CaIFN2a-Fe。转化BL21后用异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导，经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，蛋白免疫印迹(Western blot)鉴定，获得约89 kDa的可溶性重组目的蛋白。重组蛋白经镍柱纯化后，使用犬肾细胞/水疱疹性口炎病毒(MDCK/VSV)微量细胞病变抑制法检测抗病毒活性，效价确定为8×10~4 IU/mg，显示出良好的应用前景。
2024年04期 v.32;No.160 91-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 1468K] [阅读次数：9 ] |[下载次数：271 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 翟刚;刘莹;赵云环;刘濮毓;王传文;李妍;范京惠;左玉柱;
为了获得猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的地方分离株，并对其生物学特性和致病性进行初步了解。本研究在河北省开展PEDV的收集与分离鉴定，并进行遗传进化分析，同时评价分离毒株在仔猪上的致病性。将在该地区收集到的PEDV样品接种Vero细胞连续盲传，经RT-PCR检测以及基因测序鉴定，成功分离了CH/HB/CZ01毒株。利用GenBank中公布的PEDV毒株序列对该毒株进行S基因的遗传进化分析，结果显示，该毒株与我国近年来流行毒株序列的同源性为97.1%～98.3%，明显高于CV777、LZC和DR13等传统毒株的同源性，属于GⅡb亚群。将分离的PEDV病毒液按照2.0 mL/头接种健康仔猪，均出现腹泻等症状且接种2 d后直肠拭子经RT-PCR鉴定均为PEDV阳性。结果表明，分离株为变异毒株具有较强的致病性，为掌握河北省PEDV最新流行毒株的基因组特性以及生物学特性研究奠定了初步基础。
2024年04期 v.32;No.160 97-103页 [查看摘要][在线阅读][下载 1531K] [阅读次数：9 ] |[下载次数：653 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 刘可欣;谭斌;张傲;王倩颖;杨森;张淑琴;
自长春市某宠物医院临床症状为肠胃炎的幼犬腹泻粪便中分离到1株病毒，该分离毒株在CRFK细胞上出现明显的细胞病变，经RT-PCR、序列测定和直接免疫荧光鉴定可知该分离毒株为犬冠状病毒株(Canine coronavirus,CCV)，命名为CCV-CC01。利用PCR技术扩增CCV-CC01 S基因序列全长4273 bp，ORF-3序列1071 bp，N基因序列全长1202 bp。对分离毒株与其他冠状病毒毒株进行同源性比对并绘制系统进化树，结果显示该毒株与美国分离的CCV S378株亲缘关系最近，处于同一分支，与SARS-CoV-2亲缘关系较远，该毒株的出现可能与国际贸易相关。该毒株的分离鉴定为犬冠状病毒病的诊断、防治及后续疫苗研发奠定了基础。
2024年04期 v.32;No.160 104-110页 [查看摘要][在线阅读][下载 2137K] [阅读次数：12 ] |[下载次数：721 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 张召兴;韩平;李涵;张艳英;史秋梅;
为了解秦皇岛地区不同养殖场中银狐源沙门菌致病性、耐药情况及耐药基因的携带情况，本研究2019—2021年采集秦皇岛地区不同养殖场中患腹泻病银狐的肛拭子、粪便等病料组织194份，采用RT-PCR、PCR方法对采集的样品检测其犬瘟热病毒、轮状病毒及犬细小病毒；采用细菌常规分离鉴定、PCR方法进行沙门菌鉴定，采用人工感染小白鼠试验、K-B药敏纸片法和PCR法分别检测沙门菌的致病性、耐药性及耐药基因型。结果显示，犬瘟热病毒、冠状病毒及犬细小病毒检测为阴性；从194份病料组织中分离得到101株沙门菌，其中78株沙门菌分离菌株对小白鼠具有致病，死亡率为40%～100%；78株致病性沙门菌对氨苄西林、阿莫西林、土霉素等9种药物耐药率在50%以上，对其他药物耐药率为5.1%～32.1%，以耐12、11、10种药物为主；耐药基因Sul1、Sul2、Sul3、aac(3)-Ⅰv、aac(6')-Ⅰb、TetA、TetM、TetR检出率在48.7%以上，其他耐药基因检出率为7.7%～21.8%，除了多粘菌素类药物，耐药表型与耐药基因之间存在相关性。本研究对该地区银狐源沙门菌病防控提供参考依据。
2024年04期 v.32;No.160 111-117页 [查看摘要][在线阅读][下载 1420K] [阅读次数：9 ] |[下载次数：261 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 林泠;刘巧玲;禹光美;郑如雯;李芳芳;汤德元;黄涛;
为探讨犬感染乙型脑炎病毒(JEV)的免疫应答及临床症状。用乙型脑炎病毒强毒株贵州分离株(JEV GZ株)和乙型脑炎病毒弱毒株(SA14-14-2株)感染3月龄比格犬，感染一定时间后检测血液中免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)水平和T淋巴细胞亚群CD4~+/CD8~+T淋巴细胞变化；RT-PCR检测血液中的乙脑病毒；制作组织切片观察组织病变情况。乙型脑炎病毒强、弱毒株感染犬后，犬血清中IgM、IgG、TNF-α、IFN-γ水平升高，CD4~+/CD8~+比值升高；RT-PCR未检出病毒；组织切片无明显病变。犬感染乙型脑炎病毒强、弱毒株后，可产生免疫应答，无临床症状，且在组织中未检出病毒。因此，犬作为与人紧密接触的伴侣动物，非常适合作为评估人类JEV感染风险的哨兵动物。
2024年04期 v.32;No.160 118-124页 [查看摘要][在线阅读][下载 1559K] [阅读次数：8 ] |[下载次数：170 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 李曼郁;蓝海云;李克坚;周诚;
本研究旨在探究HEV感染状态下兔粪便菌群的变化差异。本研究收集粪便HEV RNA阳性与阴性兔粪便各4份，分为P组(n=4，P1～P4)和N组(n=4，N1～N4)，对粪便16S rDNA基因序列中的V3V4区域进行高通量测序，并对所得数据进行了生物信息学分析。α多样性及PCoA分析结果显示2组间的粪便菌群组成存在明显差异；与阴性对照组相比，HEV感染组的拟杆菌门、酸杆菌门、绿弯菌门等显著增多(P<0.05)，瘤胃球菌属、拟杆菌属等丰度显著减少(P<0.05)。HEV感染后兔粪便菌群的构成、丰度等均存在一定差异，粪便菌群有可能成为HEV感染的潜在生物标志物。
2024年04期 v.32;No.160 125-131页 [查看摘要][在线阅读][下载 1853K] [阅读次数：6 ] |[下载次数：101 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 张小波;陈广;温贵兰;张喜懿;胡璇;刘蔓蔓;孙芸;
为了解2019—2021年贵州地方品种鸡AL病毒(Avian leukosis virus,ALV)流行情况。采用DF-1细胞对贵州9个地方品种鸡331份血浆进行ALV的分离；利用ALV p27抗原ELISA检测法对贵州地方品种鸡708份血样、180份蛋清、61份泄殖腔棉拭子进行检测。结果表明：贵州地方品种鸡331份血浆样品分离出6株ALV，总阳性率1.81%(6/331)；2019—2021年采集贵州省不同品种鸡血样708份进行ALV p27抗原ELISA检测，共检测出289份阳性，总阳性率40.81%(289/708)；180份蛋清中检测出39份阳性，总阳性率21.7%(39/180)。61份泄殖腔棉拭子中检测出16份阳性，总阳性率26.20%(16/61)；说明贵州地方不同品种鸡存在不同程度的ALV感染，本研究为丰富贵州地区品种鸡感染ALV情况资料和贵州地方品种鸡AL的防控奠定基础。
2024年04期 v.32;No.160 132-138页 [查看摘要][在线阅读][下载 1283K] [阅读次数：7 ] |[下载次数：240 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] - 王新兴;李刚;李冬;刘有旺;
调查不同来源大肠杆菌mcr-1基因的携带率，大肠杆菌的耐药性和mcr-1基因阳性大肠杆菌的耐药谱，为控制mcr-1流行和多粘菌素的耐药性提供借鉴。采用PCR方法，对实验室前期分离的鸡源、兔源、猪源、屠宰场源、城市污水源、河流和野生鱼源大肠杆菌进行mcr-1基因筛查，并计算携带率，同时检测了8种耐药基因的携带率。对所分离的不同来源大肠杆菌进行氨苄西林、环丙沙星、氟苯尼考、萘啶酸、四环素、头孢他啶、卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星、链霉素、阿莫西林、氨曲南和多粘菌素13种常用药物的耐药性分析，计算耐药率、总体耐药率并分析mcr-1阳性大肠杆菌的耐药谱。共采集326份大肠杆菌样本，其中mcr-1阳性大肠杆菌45份，平均携带率为13.8%。鸡源大肠杆菌mcr-1基因携带率为16.3%(16/98)，兔源为14.5%(8/55)，猪源为8.9%(4/45)，屠宰场源为10%(4/40)，城市污水源为26%(13/50)，河流和野生鱼源均为0。大肠杆菌对抗生素普遍耐药，其中对阿莫西林和氨苄西林的耐药率普遍较高，而对阿米卡星和多粘菌素的耐药率较低。mcr-1携带与多粘菌素的耐药性基本相符，其余药物的总体耐药比例均高于耐药基因的携带率，这可能与同一抗生素的多种耐药机制有关。mcr-1阳性大肠杆菌具有比mcr-1阴性大肠杆菌更高的多药物耐药性。畜禽源大肠杆菌具有较高的mcr-1基因携带率和较广泛的耐药性，应该降低和限制抗生素的使用量，控制耐药基因和耐药性的蔓延。
2024年04期 v.32;No.160 139-144页 [查看摘要][在线阅读][下载 1320K] [阅读次数：9 ] |[下载次数：553 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 严文岚;张旻;赵立卓;李小瑾;刘海燕;姜龙龙;吕超超;王天奇;闫文朝;李进萍;
为了解动物园野生动物肠道寄生虫感染情况，本研究采用离心沉淀法、卢戈氏碘液染色法和饱和食盐水漂浮法，对来自河南省不同地区的41种圈养野生动物共计513份粪便样本进行检查。结果显示，野生动物肠道寄生虫的总感染率为33.5%(172/513)；共检查出8种肠道寄生虫虫卵、卵囊或包囊，球虫、内阿米巴原虫、蛔虫和圆线虫为主要感染种类，感染率分别为18.3%(94/513)、6.8%(35/513)、6.4%(33/513)和6.2%(32/513)；草食、杂食、肉食和鸟类动物肠道寄生虫的感染率分别为29.4%(103/350)、46.2%(12/26)、29.5%(18/61)和51.3%(39/76)。感染强度分析结果显示，蓝孔雀、梅花鹿和猕猴的粪便样本中虫卵、卵囊或包囊的感染强度较高。本次调查表明，河南省部分地区动物园的圈养野生动物肠道寄生虫感染情况普遍存在，应采取有效措施，进一步加强野生动物肠道寄生虫病的防控。
2024年04期 v.32;No.160 145-152页 [查看摘要][在线阅读][下载 1443K] [阅读次数：10 ] |[下载次数：469 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 宋亚萍;旷策嫣;曹杰;周勇志;张厚双;武军元;周金林;
NPC2蛋白是一种小分子的溶酶体蛋白，具有水溶性。在脊椎动物中，NPC2蛋白与胆固醇和脂质的结合和运输有关；在节肢动物中参与多种信息化学物质的结合和识别。为了进一步探究蜱体内NPC2蛋白的分子特性，本研究以长角血蜱为研究对象，对HL-NPC2基因进行了克隆和序列分析，构建了原核表达载体，表达后制备出鼠源多克隆抗体，同时利用实时荧光定量qPCR技术对NPC2在蜱的不同生长阶段及不同组织进行分析，后续做了嗅觉相关性试验。结果显示：HL-NPC2蛋白的ORF为468 bp，编码155个氨基酸；NPC2蛋白在长角血蜱体内以多聚体形式存在，在长角血蜱各个生长阶段和不同吸血阶段的各个组织中都有表达；嗅觉相关性试验表明NPC2蛋白可能与长角血蜱嗅觉相关。本次研究可为该蛋白的后续研究及新的基于嗅觉的蜱控制策略的设计提供理论基础。
2024年04期 v.32;No.160 153-160页 [查看摘要][在线阅读][下载 1493K] [阅读次数：7 ] |[下载次数：260 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 黄远玲;黄聪;韩靖宜;韩先干;陈鸿军;陈宗艳;舒刚;
传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)是由传染性法氏囊病毒(Infectious bursal bursal virus,IBDV)引起的一种高度传染性疾病，以雏鸡法氏囊萎缩、腿肌出血等为特征性病变，给世界家禽产业造成重大经济损失。目前，由新型变异株引起的IBD在我国呈现流行趋势。为建立基于IBDV VP2蛋白的免疫学诊断技术，本研究以新型变异毒株IBDV-LY21/2为模板，扩增其VP2基因，随后构建重组原核表达质粒pCold-Ⅰ-IBDV-VP2并转化BL21(DE3)大肠杆菌进行诱导表达，通过考马斯亮蓝染色和Western blot检测重组蛋白His-VP2的表达情况，并对其进行纯化和浓度测定。将His-VP2免疫BALB/c小鼠后，采用iELISA检测血清抗体效价，最后制备单克隆抗体并对其鉴定。结果显示，获得的重组蛋白His-VP2分子量约为50 kDa，浓度为8 mg/mL；通过两次亚克隆获得3株杂交瘤细胞株1G10F12、3E3E9、4D12G12，且重链均为IgG1型，轻链均为κ型；其中1G10F12、3E3E9可与重组蛋白Myc-VP2产生Western blot和IFA反应，而4D12G12只能与其产生IFA反应。本研究为IBD诊断方法的建立奠定了基础，同时为深入研究VP2蛋白的功能提供生物学工具。
2024年04期 v.32;No.160 161-166页 [查看摘要][在线阅读][下载 1391K] [阅读次数：13 ] |[下载次数：362 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 秦春雪;夏国建;何成强;
本研究旨在克隆牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的非结构蛋白NS5B截短基因，采用原核表达系统表达获得截短蛋白，并进一步制备其多克隆抗体。构建的原核表达质粒pET-28a-NS5B转化至BL21感受态细胞，经IPTG诱导后，发现NS5B蛋白以包涵体为主。纯化蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体具有良好的反应性，能够特异性识别真核表达的NS5B蛋白。本研究中NS5B蛋白的截短表达及其多克隆抗体的制备为进一步研究NS5B蛋白的生物学功能，以及建立BVDV鉴别诊断的血清学检测方法奠定了基础。
2024年04期 v.32;No.160 167-172页 [查看摘要][在线阅读][下载 1313K] [阅读次数：13 ] |[下载次数：417 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 刘佳晨;李丽薇;郭子强;陈金霞;曹云雷;乔思娜;刘长龙;赵冉;童光志;高飞;
本研究通过将非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的一种非结构蛋白编码基因F334L克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ，完成重组表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-F334L的构建。将pCold-Ⅰ-ASFV-F334L转化受体菌感受态细胞，经1 mmol/L的IPTG诱导原核表达。SDS-PAGE和Western blot试验检测结果表明，F334L基因得到了良好的表达，将所得的F334L基因编码蛋白纯化后免疫小鼠，获得含多克隆抗体的血清。利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV F334L基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒rPRRSV-F334L，试验结果显示该多克隆抗体具有良好的反应原性和特异性，证明了ASFV F334L基因可在PRRSV活载体中稳定表达，为ASFV活载体疫苗的研发提供了材料。
2024年04期 v.32;No.160 173-178页 [查看摘要][在线阅读][下载 1427K] [阅读次数：8 ] |[下载次数：629 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 刘清艳;王欢;丁铲;钱琨;廖瑛;方守国;
本研究以IBV Beaudette株基因组为模板获得N基因片段，构建重组原核表达质粒pET-32a-His-IBV-N，在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达，纯化后获得带有His标签的N重组蛋白。将其与等体积的弗氏完全佐剂混匀乳化后免疫BALB/c小鼠3次，收集血清，得到鼠源抗N蛋白多克隆抗体。利用间接免疫荧光试验和Western blot鉴定多克隆抗体的特异性。结果显示，N蛋白多克隆抗体能特异性识别转染表达的Flag-N蛋白和IBV感染表达的N蛋白，说明此抗体能识别N蛋白的线性表位和空间表位，可应用于Western blot和间接免疫荧光实验。本研究为进一步研究N蛋白的功能和IB的诊断提供了技术支撑。
2024年04期 v.32;No.160 179-187页 [查看摘要][在线阅读][下载 1631K] [阅读次数：6 ] |[下载次数：435 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ]