- 张亚萍;李能秀;焦健;季春辉;王立霞;才学鹏;孟庆玲;乔军;
单核细胞增生李斯特菌(LM)是一种对外界环境具有广泛适应性的人兽共患革兰氏阳性菌，σ~B因子(sigma B)是LM最重要的应激调控因子。为探究σ~B激活因子样Lmo1642的生物学功能，本研究以国际标准菌株LM EGD-e基因组为模板，扩增lmo1642基因，并分析其分子特征；通过同源重组技术构建lmo1642基因缺失株LM-Δlmo1642及回补株LM-CΔlmo1642，比较其在不同胁迫环境下的生长情况及生物被膜(BF)形成能力的差异，并通过qPCR检测与环境应激和BF形成相关基因的转录水平。结果显示：Lmo1642蛋白含有STAS结构域，属于STAS蛋白家族；与LM EGD-e和LM-CΔlmo1642相比，LM-Δlmo1642在42℃、pH9.0、3.8%乙醇以及不同渗透压环境下的适应能力明显减弱(P<0.05)，但对LM生物被膜形成能力没有显著的影响(P>0.05)；qPCR显示与环境应激有关基因sigB、opuCC、betL、clpP的相对转录水平显著降低(P<0.05)，而BF相关基因actA没有显著的变化(P>0.05)，表明lmo1642基因对LM的环境应激适应能力发挥了重要的调控作用。本研究为进一步揭示lmo1642基因调控LM环境应激能力的分子机制提供了前期研究基础。
2025年01期 v.33;No.163 1-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 1469K] [阅读次数：31 ] |[下载次数：170 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 王娟;张玮;王星晨;朱利塞;王贵平;孙明华;贾爱卿;
为探索西藏小型猪作为猪链球菌2型、7型、9型感染模型的可行性，本研究用2型、7型、9型猪链球菌分别以2×10~8、7×10~9、2×10~9 CFU的剂量颈部肌肉接种60日龄的西藏小型猪，对照组猪同样方式接种等体积生理盐水，每组5头仔猪。接种后定期监测仔猪的临床症状和血液中带菌情况，30 d后安乐死全部组别仔猪，观察其组织病理学变化。结果显示：与对照组相比，攻毒组仔猪均表现出发热、食欲减退、精神沉郁等临床症状；攻毒后仔猪血液带菌的时间为3～6 d，组织病理学变化结果显示2型猪链球菌对西藏小型猪的致病力最强，其次为7型，病变主要集中在肺脏，脑、肝脏或关节等部位也有不同程度的病变。本研究初步确定西藏小型猪可作为猪链球菌2型、7型、9型人工感染模型，可为临床猪链球菌的致病机制研究和动物模型建立提供参考依据。
2025年01期 v.33;No.163 9-14页 [查看摘要][在线阅读][下载 1711K] [阅读次数：10 ] |[下载次数：347 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 袁冬琪;陈宋琴;李秀丽;周金林;
本研究旨在研究长角血蜱(H.longicornis)铁蛋白1(Ferritin1)与蜱唾液腺退化的关系，为唾液腺退化机制研究提供理论基础。利用PCR方法扩增长角血蜱Ⅰ型铁蛋白(HlFer1)基因，构建重组表达质粒，表达蛋白后制备多克隆抗体用于蛋白水平验证。收集不同吸血时期的长角血蜱唾液腺，经qPCR分析HlFer1分子的转录水平以及Western blot验证蛋白表达水平，发现HlFer1基因转录水平和蛋白表达水平均随唾液腺退化进程呈递增趋势。再利用RNAi技术干扰HlFer1基因，发现实验组蜱的线粒体出现膜密度增高，嵴减少、体积缩小等特征，唾液腺退化加快，表明HlFer1参与蜱唾液腺退化过程，可能与铁死亡相关。该研究结果可为蜱的生物防控奠定基础。
2025年01期 v.33;No.163 15-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 1404K] [阅读次数：7 ] |[下载次数：85 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 王书利;李梦含;高萌萌;王倩;郑好;张荷婷;李志强;李启峰;
本研究旨在分析布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统(T4SS)效应蛋白BPE043在布鲁氏菌感染过程和调控细胞凋亡基因表达中的作用。以流产布鲁氏菌2308(S2308)为亲本株，通过同源重组的方法构建布鲁氏菌BPE043基因缺失株(2308ΔBPE043)和回补株(2308ΔBPE043-C)。将亲本株、缺失株和回补株在相同起始浓度下培养，观察它们的生长变化。亲本株、缺失株和回补株感染小鼠，测定小鼠脾脏的荷菌量。亲本株、缺失株和回补株侵染小鼠巨噬细胞RAW 264.7，检测细菌的胞内存活能力。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot技术检测布鲁氏菌侵染后细胞凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Bax和Bcl-2的表达水平。结果显示，亲本株、缺失株和回补株在体外培养的生长趋势基本相同。2308ΔBPE043感染小鼠脾脏的荷菌量显著低于S2303感染组，且在感染2周后，缺失株感染组脾脏荷菌量的下降趋势较亲本株感染组明显。布鲁氏菌侵染宿主细胞8 h后，2308ΔBPE043的胞内存活能力显著低于S2308。布鲁氏菌侵染宿主细胞24 h后，2308ΔBPE043侵染组凋亡基因Caspase-3、Caspase-8和Bax表达水平显著高于S2308侵染组，Bcl-2表达水平显著低于S2308侵染组。2308ΔBPE043侵染组Caspase-3和Caspase-8的蛋白表达水平，以及Caspase-3和Caspase-8的活性显著高于S2308侵染组。本研究发现，T4SS效应蛋白BPE043在布鲁氏菌感染和胞内存活过程中发挥重要作用，是布鲁氏菌重要的毒力因子，为进一步探究BPE043在布鲁氏菌持续性感染中的作用奠定了基础。
2025年01期 v.33;No.163 21-28页 [查看摘要][在线阅读][下载 1404K] [阅读次数：19 ] |[下载次数：258 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 侯力丹;迟增娜;张亚文;薛麒;苏佳;吴华伟;赵鹏;杨汉春;
此前有报道曾从不同肝脏损伤病例中鉴定到禽戊型肝炎病毒(aHEV)与血清4型禽腺病毒(FAdV-4)的共感染，为进一步观察FAdV和aHEV在鸡体内共感染的致病情况，本研究分别将aHEV-YT和FAdV-4 GY单独或共同感染SPF鸡胚和雏鸡，观察不同感染情况对SPF鸡胚孵化率、雏鸡排毒等方面的差异。结果显示：FAdV-4单感染、aHEV单感染和先后共感染鸡胚后，鸡胚出壳率分别为0、73.30%和40.00%；雏鸡感染实验则显示aHEV-YT单感染1日龄SPF鸡不致死，100 TCID_(50) FAdV-4 GY单感染对28日龄SPF鸡的死亡率为100.00%，而1日龄先感染aHEV-YT后再感染同等剂量FAdV-4 GY死亡率仅为25.00%。结果表明，aHEV与FAdV-4的共感染相比FAdV-4 GY单独感染均降低了致死率，这为进一步了解两者共感染致病特点与机制提供了一定参考。
2025年01期 v.33;No.163 29-35页 [查看摘要][在线阅读][下载 1338K] [阅读次数：12 ] |[下载次数：339 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 徐欢;朱玲玲;殷世彬;汪威;江心月;徐静;汪招雄;
鸭坦布苏病毒病是由坦布苏病毒(DTMUV)感染引起的一种可以引起蛋鸭产蛋率严重下降、雏鸭出现神经症状甚至死亡的传染病。目前该病在免疫防控等方面取得了较大的研究进展，但是宿主与DTMUV感染之间的免疫机制还有待我们进一步研究。本研究应用DTMUV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)，利用荧光定量PCR(qPCR)检测抗病毒信号通路主要细胞因子(RIG-1、IRF-7、STAT1、IFN-α、IFN-β、IFN-γ)、主要组织相容性复合体(MHCⅠ、MHCⅡ)、白细胞介素(IL-1β、IL-6、IL-8)、趋化炎性因子(CCL-4、CCL-5)和凋亡相关因子(Fas、BCL2、BCL2A、APAF-1、CASP7、BiD、MCL、FADD)mRNA转录水平。结果显示DTMUV感染DEF 12 h后，有少数细胞因子呈现轻微下调，但在感染24 h后所测的21种细胞因子全部呈现上调，其中IRF7、IFN-β、MHCII、IL-1β、CCL4与对照组相比上调了4.81倍、14.58倍、3.24倍、4.68倍、11.73倍。对TMUV感染DEF后免疫相关因子mRNA转录水平的变化分析发现，病毒感染DEF细胞 24 h后，细胞产生明显的炎性反应，同时激活抗病毒信号通路、细胞凋亡通路，促进多种免疫相关因子的表达。该研究为DTMUV感染宿主致病机制与宿主抗病毒固有免疫反应的研究奠定了良好的基础。
2025年01期 v.33;No.163 36-43页 [查看摘要][在线阅读][下载 1313K] [阅读次数：10 ] |[下载次数：264 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 安子齐;赵亚楠;王淑雯;徐敏丽;崔宁;许传田;苏帅;
为了研究缺失RLORF6、Meq基因的鸡马立克病病毒(MDV)MDLV21株对SPF鸡的致病性与免疫保护效果。通过接种SPF鸡，比较MDLV21株对鸡的体重、免疫器官指数、灭活疫苗诱导抗体水平的影响并统计死亡率和肿瘤率；通过攻毒保护试验，统计分析MDLV21株与CVI988/Rispens株对MDV超强毒株Md5的免疫保护指数。结果显示：MDLV21株接种SPF鸡的体重、胸腺和法氏囊免疫器官指数均与对照组SPF鸡差异不显著；接种鸡与对照组鸡的禽流感、新城疫抗体滴度相似。MDLV21株接种鸡在整个周期没有死亡以及肿瘤发生，脾脏、肝脏组织切片显示细胞结构正常。MDLV21株、CVI988/Rispens株对感染Md5的SPF鸡分别提供90%、70%的免疫保护。综上，MDV MDLV21株对SPF鸡没有致病性，对MDV Md5株具有良好的免疫保护。本研究可为MD的防控提供1株新的生物安全性、免疫效果良好的疫苗候选株。
2025年01期 v.33;No.163 44-49页 [查看摘要][在线阅读][下载 1642K] [阅读次数：5 ] |[下载次数：177 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 张伟;李俊辉;潘晓梅;曹剑;唐慧芬;毛丽萍;贺笋;
选择不同细胞因子和培养基，比较4种培养基和细胞因子对猪骨髓细胞分化为单核巨噬细胞数量和增殖能力的影响，筛选出猪骨髓细胞诱导单核巨噬细胞的最佳培养条件。结果显示，在含10%胎牛血清的DME/F12培养基中添加粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(40 ng/mL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)(50 ng/mL)能够诱导骨髓细胞诱分化成大量单核巨噬细胞，细胞数量与对照组差异显著(P<0.05)，并且诱导细胞中有针对单核巨噬细胞的特异性抗原(CD64)表达，单核巨噬细胞纯度为77.57%左右。诱导后的细胞中检测到针对单核巨噬细胞的特异性Nramp1基因。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)能够在细胞中大量增殖，与未诱导的骨髓细胞差异显著(P<0.05)。以上结果表明，DME-F12培养基添加GM-CSF和L929细胞上清液能够显著增强猪骨髓细胞诱导分化成单核巨噬细胞的能力，并且能够获得高纯度、高密度、高活率的单核巨噬细胞。
2025年01期 v.33;No.163 50-59页 [查看摘要][在线阅读][下载 1599K] [阅读次数：4 ] |[下载次数：334 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 东笑;陶攀;李康健;李佳昕;朱杰;孙明华;贾爱卿;
本研究采集疑似患有牛支原体肺炎的病变肺脏进行牛支原体的分离鉴定。通过菌落形态观察、PCR鉴定、序列分析等方法进行鉴定，结果表明成功分离到1株牛支原体，命名为YJ-22株。生化特性研究发现：分离株不能利用葡萄糖、精氨酸、明胶、尿素、甘露醇等营养物质，但可以利用乳糖，与牛支原体生化特性相符。生长曲线测定结果显示，牛支原体YJ-22株在37℃培养9 h可达对数生长期，在18～45 h处于平台期。使用牛支原体YJ-22株对3月龄犊牛进行气管注射攻毒，可产生典型的牛支原体肺炎症状和病变，说明该分离株可以感染犊牛。使用牛支原体YJ-22株制备灭活疫苗免疫兔子后产生的IgG抗体效价可以达到1∶128，说明该分离株有较好的免疫原性。本研究分离得到1株牛支原体，该株牛支原体对犊牛具有较强的致病力，且具有良好的免疫原性，可以作为牛支原体疫苗候选株。
2025年01期 v.33;No.163 60-66页 [查看摘要][在线阅读][下载 1447K] [阅读次数：8 ] |[下载次数：373 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 刘丹;冯雅婷;陈宗超;朱敏;郭容;王桂军;于圣青;
本研究对广东省4个养殖场分离的疑似多杀性巴氏杆菌20株，通过细菌形态学观察、PCR鉴定、生化试验共鉴定出17株多杀性巴氏杆菌，并对其进行血清型分型、药敏检测、毒力基因检测以及致病性试验。结果显示：17株分离菌均为荚膜A型巴氏杆菌；14/17株分离菌对多粘菌素B敏感，敏感率高达82%，17株分离菌对新霉素、丁胺卡那、头孢噻肟和呋喃唑酮4种药物的耐药率达80%以上；对17株菌均检测到其中的13个毒力基因；PM-3毒力最强，4个菌可以引起半数试验动物死亡。本研究表明从广东省4个养鸭场分离的菌株致病性强，且表现多重的严重耐药性。研究结果为预防控制鸭源巴氏杆菌提供参考依据。
2025年01期 v.33;No.163 67-74页 [查看摘要][在线阅读][下载 1369K] [阅读次数：13 ] |[下载次数：386 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 王鹏;施宇博;方素芳;关琛;崔平;
为获得孔氏艾美耳球虫的地理分布及不同地理株的致病性和免疫原性。本研究应用单卵囊分离技术，根据形态学特征获得孔氏艾美耳球虫石家庄株(E.kongi-SJZ)，基于ITS-1构建系统发育树，进一步鉴定该虫株。同时，研究了孔氏艾美耳球虫石家庄株的致病性和免疫原性。结果显示，孔氏艾美耳球虫石家庄株(E.kongi-SJZ)与孔氏艾美耳球虫张家口株(E.kongi-ZJK)聚为一个小支，位于兔球虫的单系群内，且位于无外残体的姐妹谱系上，该株球虫属于孔氏艾美耳球虫的一个地理株，具有中等致病性及较强的免疫原性。该结果不仅丰富了兔球虫物种多样性，也为兔球虫病防控提供了依据。
2025年01期 v.33;No.163 75-81页 [查看摘要][在线阅读][下载 1474K] [阅读次数：3 ] |[下载次数：112 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 张芳源;杜文琪;杨大为;李桂梅;单虎;
为建立口蹄疫病毒(FMDV)快速、高效的血清学检测方法，根据GenBank收录的FMDV-O型国内流行株VP1基因(GenBank登录号：JN998085.1)，构建重组质粒pCold TF-VP1，通过原核表达系统获得VP1蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达和反应原性后，将纯化后的蛋白作为抗原，建立FMDV抗体间接ELISA方法。结果显示，重组质粒成功转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，并以可溶性蛋白形式表达。建立的FMDV抗体间接ELISA方法其抗原包被最佳浓度0.5 μg/mL，使用1%BSA溶液封闭效果最佳，血清最佳稀释度1∶600，酶标二抗最佳工作浓度1∶8000，且具有良好的特异性、灵敏性和重复性，与商品化试剂盒比较，符合率为90.2%。本试验在大肠杆菌中成功表达并纯化了FMDV的VP1蛋白，并建立了FMDV抗体间接ELISA方法，为口蹄疫的监测、诊断及试剂盒的开发提供了参考。
2025年01期 v.33;No.163 82-90页 [查看摘要][在线阅读][下载 1374K] [阅读次数：3 ] |[下载次数：565 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] - 郭伟伟;向银辉;刘大卫;刘岳;孙鹏;崔晓霞;杜元钊;
本研究将猫泛白细胞减少症病毒FPV-SD株VP2基因克隆后，构建重组Bacmid-VP2，转染昆虫细胞Sf9，获得了重组杆状病毒re-BacVP2，并对其进行一系列鉴定。结果显示：其病毒含量可达到10~(7.1) TCID_(50)/mL。SDS-PAGE、Western blot结果证明猫泛白细胞减少症病毒VP2基因在杆状病毒表达系统中成功表达，并与抗FPV的多克隆抗体发生特异性反应。该蛋白能凝集1%猪红细胞，凝集价达1∶16 384。电镜观察可见表达的VP2蛋白能形成病毒样颗粒(VLPs)，为20～22 nm。VP2蛋白制备的疫苗能产生较高的抗体滴度。VP2基因的成功表达为FPV疫苗的研制奠定基础。
2025年01期 v.33;No.163 91-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 1319K] [阅读次数：11 ] |[下载次数：369 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 陈思宇;张梦洁;田睿;陈益;刘镝钺;李文良;毛立;程子龙;杨蕾蕾;孙敏;张纹纹;杜改梅;储岳峰;王金泉;刘茂军;
绵羊肺炎支原体(Mo)是引起规模化羊场呼吸道病的主要病原，危害严重；快速特异诊断是防控该病的保障。本文旨在建立一种检测Mo血清抗体的间接ELISA方法，利用大肠杆菌的密码子偏好性优化Mo EF-Tu基因序列进行原核表达，纯化出高纯度重组rEF-Tu蛋白，以纯化的rEF-Tu为包被抗原，建立Mo间接ELISA抗体检测方法。结果显示，原核表达的EF-Tu蛋白分子质量约为45.4 kDa，与预期相符；Western blot证实具有良好的反应原性；建立的间接ELISA方法最佳优化条件显示，包被抗原浓度为1.25 mg/L，37℃孵育2 h；封闭条件为30 g/L BSA，37℃孵育1 h；待检血清1∶100稀释，37℃孵育45 min；酶标二抗1∶20 000稀释，37℃孵育30 min；底物TMB 37℃避光反应15 min；样品OD_(450)值≥0.296时判定为阳性，OD_(450)值≤0.265时判定为阴性，OD_(450)值0.265～0.296则判为可疑；组内和组间变异系数均低于10%；用该方法与实验室所建Mo全菌蛋白间接ELISA检测方法对233份血清进行检测，两者特异性为90.70%，敏感性为82.69%，符合率约为87.12%。上述结果表明，本研究建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、重复性及特异性，为Mo的临床诊断、抗体监测等提供简单快速的血清学诊断方法，也为Mo抗体检测试剂盒的开发奠定了基础。
2025年01期 v.33;No.163 97-105页 [查看摘要][在线阅读][下载 1525K] [阅读次数：5 ] |[下载次数：635 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] - 解佳;刘静宜;孙彤;郭伟强;俞赵荣;陈鸿军;陈立功;
猪腺病毒3型(PAdV-3)导致猪肠道性疾病。为能够快速特异检测该病毒，本研究根据PAdV-3 hexon基因序列保守区设计特异性引物和探针，成功建立了一种针对PAdV-3的TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法。结果显示：该方法特异性好，可鉴别PAdV-3与其他猪病病毒，最低检测限为10 copies/μL，敏感性高于常规PCR 100倍。该检测方法的建立为PAdV-3的快速诊断提供了重要的分子诊断工具。
2025年01期 v.33;No.163 106-111页 [查看摘要][在线阅读][下载 1406K] [阅读次数：8 ] |[下载次数：415 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 顾志刚;郭洁真;王子涵;孙彤;陈鸿军;孙竹筠;陈丹清;
盖塔病毒(GETV)是一种在我国广泛分布的虫媒病毒，可通过蚊虫传播感染人畜，导致猪、马等动物出现发热、出疹及淋巴结肿大等症状，可致妊娠母猪流产或死胎。目前尚无特效治疗方式。本研究根据GenBank公布的盖塔病毒nsP1基因序列，设计3组引物探针，筛选出最佳的引物探针，建立一种灵敏度高、特异性强的针对盖塔病毒的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法。对该方法进行敏感性、特异性、重复性试验和临床样品检测。标准曲线Ct值与相应质粒标准品浓度存在良好的线性关系，相关系数(R~2)为0.9989；对含GETV基因的重组质粒pCDNA3.1-nsP1体外转录RNA进行敏感性试验，最低检出限达10 copies，是普通 RT-PCR 方法的1000倍，敏感性高；与PRRSV、CSFV与PEDV的核酸不发生交叉反应，特异性好；变异系数小于2%，重复性好。本研究建立了一种敏感、特异的GETV检测方法，对GETV的快速诊断具有重要意义。
2025年01期 v.33;No.163 112-118页 [查看摘要][在线阅读][下载 1498K] [阅读次数：3 ] |[下载次数：479 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 张岳;孙彤;郭洁真;魏晓锋;熊炜;刘静宜;陈鸿军;陈丹清;
猪巨细胞病毒(PCMV)感染可导致猪食欲废绝，母猪流产，产木乃伊胎，仔猪发育不良等临床症状，且分布广泛，对异种器官移植也存在潜在威胁。本研究针对PCMV保守基因DPOL设计引物探针，建立TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果显示：检测限可达10拷贝，灵敏度高；变异系数<2%，标准曲线R~2=0.998，重复性好，具有高特异性；对上海市及江苏省常州市170份血清样本进行检测，5份样品为可疑结果。本研究建立的方法可用于养殖场猪感染PCMV的筛查，对该病防控具有重要意义。
2025年01期 v.33;No.163 119-124页 [查看摘要][在线阅读][下载 1447K] [阅读次数：4 ] |[下载次数：305 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 庄勇;向蒙;冯桂丹;杨显超;夏炉明;肖文轩;张蒙;王建;张鹭;
本研究通过前期已构建好一些优势抗原的表达载体库，以生物信息学工具分析候选抗原的理化性质、二级结构、B细胞抗原表位，选择优势抗原，以纯化后的融合抗原ECX作为包被抗原，将HRP标记的Protein G作为酶标的二抗，成功建立了一种用于多动物结核分枝杆菌复合群间接 ELISA 诊断的方法。该方法适用于实验室样品批量检测，其敏感性为0.912，特异性为0.949。应用本研究建立的动物结核分枝杆菌间接ELISA法和商品化动物结核分枝杆菌夹心ELISA抗体检测试剂盒共检测犬、猫、野生动物、SPF实验动物血清共552份。其中间接ELISA方法共检出6份血清抗体阳性，阳性检出率为1.09%(6/552)；商品化夹心法试剂盒共检出8份血清抗体阳性，阳性检出率为1.45%(8/552)；两者之间阳性重合数为6份，阳性重合率为85.72%(6/7)；阴性重合数为544份，阴性重合率为99.82%(544/545)。结果表明，两种诊断方法的检测结果具有较高的一致性。本方法的建立，与国外商品化试剂盒比较，不但有望实现这类检测产品的国产替代，同时实现了一种方法对不同物种来源血清的快速检测。
2025年01期 v.33;No.163 125-133页 [查看摘要][在线阅读][下载 1524K] [阅读次数：3 ] |[下载次数：136 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 向蕊;朱利塞;赵小刚;应碧云;王贵平;贾爱卿;
本研究利用原核系统表达了猪瘟病毒(CSFV)E~(rns)和E2串联蛋白，通过切胶纯化的方法得到高纯度的目的蛋白作为包被抗原，经过各反应条件的优化初步建立ELISA方法，并对方法的特异性、敏感性和重复性进行检验，与商品化试剂盒以及IFA试验进行平行比较，评估方法的准确性。结果表明建立了一种特异性强、敏感性好、准确率高且适用于临床猪瘟抗体检测的间接ELISA方法。
2025年01期 v.33;No.163 134-140页 [查看摘要][在线阅读][下载 1411K] [阅读次数：3 ] |[下载次数：321 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 刘梅芬;马震原;王淑娟;闫若潜;班付国;赵雪丽;谢彩华;王东方;柴茂;刘影;杨海波;王翠;
为建立猪伪狂犬病病毒gB抗体竞争酶联免疫检测方法，以大肠杆菌表达并纯化的gB 蛋白为包被抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗gB蛋白单克隆抗体为酶标抗体，经各反应条件的优化，成功建立了PRV gB抗体的竞争酶联免疫检测方法，并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了评估。PRV gB抗体竞争酶联免疫检测方法经优化后的最佳条件为：gB蛋白的最佳包被浓度为0.25 μg/mL、包被量100 μL/孔，酶标抗体的最佳稀释浓度为1∶1000，样品检测时间为30 min(抗原抗体反应)+ 15 min(底物显色)；敏感性结果显示，PRV gB标准阳性血清(Z89)经1∶512稀释后经检测仍为阳性；特异性结果显示，猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、大肠杆菌抗体阳性血清的检测结果均为阴性；批内、批间重复试验结果显示，批内、批间变异系数分别为0.24%～9.45%、0.58%～11.61%，均小于12%。通过对采集的184份临床血清检测结果进行比较，该方法与商品化试剂盒的阳性符合率为96.23%，阴性符合率为96.95%，总符合率96.74%。本研究在国内首次建立PRV gB竞争酶联免疫检测方法，为PRV gB抗体快速检测提供了可靠的技术手段。
2025年01期 v.33;No.163 141-147页 [查看摘要][在线阅读][下载 1305K] [阅读次数：4 ] |[下载次数：370 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 付兢锋;陈姗;马浩原;祝昆儒;牟碧莹;薛皓文;宋彦昊;李强;高旭;
本研究构建了一种牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)的高效临床检测方法。利用SYBR Green I荧光定量PCR扩增BVDV-1保守基因5'UTR的片段(124 bp)，并构建重组质粒作为阳性标准品，建立标准曲线，对该方法的敏感性、特异性和重复性进行验证，同时采集临床样品，评价其检测效率。结果显示：BVDV-1阳性标准品在1.169×10~8～1.169×10~1拷贝/μL范围内呈良好的线性关系，相关系数R~2=0.997，熔解曲线无非特异性峰产生；重复性试验组内和组间变异系数低于2%；敏感性试验最低检测拷贝数为1.169×10~1 拷贝/μL，为普通PCR的100倍；特异性良好，与BEV、BEFV、IBRV、BPIV3无交叉反应产生。采用建立的BVDV-1 SYBR GreenⅠ荧光定量方法检测62份牛腹泻粪便样品，阳性率为46.77%，高于普通PCR 20.97%。本研究成功建立了BVDV-1荧光定量方法，该方法特异性强，灵敏度高，重复性稳定，可用于养殖业BVDV-1临床的快速检测。
2025年01期 v.33;No.163 148-154页 [查看摘要][在线阅读][下载 1343K] [阅读次数：5 ] |[下载次数：495 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 劳梦琴;刘瑞琳;陈鹏飞;黄世静;于家荣;朱钧锐;孙祁;虞凌雪;高飞;姜一峰;童武;刘长龙;李丽薇;于海;童光志;周艳君;
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪流行性腹泻(PED)是当前对养猪业影响较大的两种重要传染病，为了开发可同时针对这两种疫病的疫苗，本研究以PRRSV HuN4-F112活疫苗株为载体，将PEDV S蛋白中可诱导产生中和抗体的抗原区域进行优化和组合，命名为SNE，利用反向遗传操作技术将其引入至HuN4-F112株基因组中，构建了含有SNE的PRRSV全长cDNA克隆pHuN4-F112-SNE，通过病毒拯救获得了重组病毒rHuN4-F112-SNE株，经过对重组病毒引入基因和表达蛋白的鉴定，证实获得的重组病毒rHuN4-F112-SNE能够正确表达PEDV S蛋白优势抗原区域，其生物学特性与亲本毒株相似。将该重组病毒连续传至30代，引入的SNE基因均能获得稳定表达，且不影响亲本毒复制和自身蛋白的表达，表明重组病毒rHuN4-F112-SNE中引入的SNE基因可稳定遗传，研究结果为后续评价rHuN4-F112-SNE作为二价基因工程活载体疫苗的有效性奠定了基础。
2025年01期 v.33;No.163 155-163页 [查看摘要][在线阅读][下载 1415K] [阅读次数：4 ] |[下载次数：522 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 叶晨倩;李智丽;叶曼青;秦文珍;杨心雨;翟雪滢;郑浩;童武;李国新;于海;童光志;单同领;娄华;孔宁;
猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新发的病原体，引起仔猪腹泻、脱水和呕吐等症状。本研究以PDCoV的RNA为模板，扩增PDCoV N基因，将其插入原核表达载体pColdⅠ中，构建PDCoV N-pColdⅠ质粒；通过BL21(DE3)原核表达和纯化获得高纯度的PDCoV N蛋白；免疫BALB/c小鼠，制备PDCoV N蛋白多克隆抗体。结果显示：原核表达的PDCoV N蛋白为可溶性蛋白，分子量约为40 kDa；通过ELISA、Western blot和IFA鉴定可知，本研究制备的PDCoV N多克隆抗体均具有良好的效价，可为深入开展PDCoV相关的基础和应用研究提供工具。
2025年01期 v.33;No.163 164-170页 [查看摘要][在线阅读][下载 1384K] [阅读次数：4 ] |[下载次数：553 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 肖璐;周泷;吴学婧;于吉锋;谢晶;李兴玉;叶勇刚;魏勇;林毅;曹冶;潘梦;叶健强;毛从剑;康润敏;
为了解四川省地区猪圆环病毒3型(PCV3)流行毒株的分子及遗传变异规律，试验采用生物学软件，设计3对特异性引物对从四川地区部分养殖场猪群中收集的15份PCV3阳性样品进行分段扩增、全基因序列遗传变异分析。结果表明：PCR分段扩增分别得到大小为623、803和753 bp的条带，阳性克隆菌测序结果与GenBank中PCV3的同源性均大于98.6%；15株样品毒株的全基因核苷酸序列的同源性为98.1%～99.8%，推导氨基酸序列的同源性为95.8%～99.2%，由Cap基因的遗传进化分析发现从四川地区获取的15株PCV3毒株属于3a和3b两个亚群。说明四川地区流行的PCV3毒株至少存在3a和3b 2个亚群，该亚群的变异程度低、较为保守。
2025年01期 v.33;No.163 171-180页 [查看摘要][在线阅读][下载 1664K] [阅读次数：7 ] |[下载次数：291 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 尹德玮;赵钟毅;吕荞;闭璟珊;汪伟;郑敏;罗廷荣;李晓宁;
本研究对2020年从广西地区采集的疑似鸽新城疫临床样品，进行了病毒分离、致病力鉴定，并进行全基因组测序和遗传进化分析。结果成功分离到1株鸽新城疫病毒，致病力试验证实为高毒力毒株；该毒株F蛋白裂解位点序列为~(112)RRQKRF~(117)。通过绘制F基因和全长基因组遗传进化树，确定该毒株属Ⅵ.2.1.1.2.2Ⅵk型，与流行毒株Pi/CH/TJ2017亲缘关系最近，与新城疫疫苗株La Sota遗传关系较远；蛋白序列分析结果显示，F蛋白的两个高度疏水区信号肽区(1-31)和融合肽区(117-141)共存在13个氨基酸位点变异；HN蛋白中和表位共有6个氨基酸位点的突变。上述突变可能造成该分离株的F蛋白和HN蛋白抗原性及疏水性有一定程度变化，影响La Sota疫苗株的保护效力，导致鸽新城疫在鸽群中暴发。
2025年01期 v.33;No.163 181-187页 [查看摘要][在线阅读][下载 1527K] [阅读次数：4 ] |[下载次数：439 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 张欣怡;高辉;崔进;房琳琳;郑辉;刘爽;魏荣;李晓成;肖啸;董雅琴;
为了解我国部分地区牛冠状病毒(BCoV)流行及变异情况，2020—2021年，收集我国9个省份53个临床发病牛群的拭子、粪便、组织等样品1432份，采用实时荧光RT-PCR方法进行BCoV检测，并选取部分核酸阳性样品进行S基因全长的扩增、测序与遗传变异分析。53个发病牛群中，BCoV阳性场占54.72%，冬季BCoV感染率(14.87%)最高，犊牛最易感(16.13%)。本研究共获得17条S基因全长序列与参考序列核苷酸同源性为96.7%～99.7%。系统进化分析表明，BCoV毒株分为欧洲(GⅠ型)和亚-美(GⅡ型)两大分支，所测毒株均属GⅡ型，且与大多中国参考毒株共同位于GⅡ中相对独立的分支。与中国参考毒株相比，所测毒株存在60个氨基酸变异位点，所测4个内蒙古毒株存在16个有别于其他测序株的相同突变，推测与中国参考株HLJ/HH-10/2020、BCoV-GX-NN190313有相同的祖先。该研究为揭示我国BCoV流行情况及流行毒株分子特征提供参考。
2025年01期 v.33;No.163 188-198页 [查看摘要][在线阅读][下载 1605K] [阅读次数：4 ] |[下载次数：511 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 周庆雨;张巍巍;买尔外提·波拉提;卢玮;沙黑拉·巴合提;罗林;包文武;张秀玉;
本调查对苏北鲁南地区30余个规模化养殖场送检的2894份样品进行RT-PCR检测，通过检测数据统计分析，确定了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在本地区的流行趋势。同时选用NSP2基因序列特异性引物探针试剂盒，对300份阳性样本进行毒株鉴别，发现PRRSV高致病性变异株阳性率逐年攀升。进一步对Ct值较低的50份阳性样本进行NSP2、ORF5基因测序分析，锁定了苏北鲁南地区主要的PRRSV流行毒株。
2025年01期 v.33;No.163 199-205页 [查看摘要][在线阅读][下载 1368K] [阅读次数：7 ] |[下载次数：271 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ]