- 郭晓旭;顾文源;赵云环;张帅;范京惠;左玉柱;
为了获得可溶性表达的牛冠状病毒病毒样颗粒疫苗，并对其进行免疫效果评价。本研究将5种分子伴侣pTf16、pG-Tf2、pG-KJE8、pGro7和pKJE7分别转入E.coli BL21(DE3)中制备伴侣感受态细胞，将携带乙肝病毒核心抗原的重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2转化至制备好的5种分子伴侣感受态细胞中，各种共表达菌株通过双抗板筛选、诱导剂诱导表达后，通过SDS-PAGE检测上清液是否表达来筛选有效的伴侣质粒。纯化共表达的重组蛋白，利用透射电镜观察是否形成病毒样颗粒(VLPs)。用制备好的VLPs乳化成疫苗免疫小鼠，采用ELISA方法检测免疫后小鼠血清中的IgG特异性抗体及细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平。结果显示：成功制备上清液表达的BCoV VLPs，将VLPs乳化成疫苗后免疫小鼠，小鼠产生的BCoV IgG抗体水平和细胞因子水平均显著高于对照组(P<0.05)。结果表明，分子伴侣pG-KJE8在16 ℃条件下可以更好地促进牛冠状病毒病毒样颗粒的可溶性表达，且与分子伴侣共表达的BCoV VLPs具有免疫活性，对制备效价高、成本低的牛冠状病毒样颗粒疫苗具有重要意义。
2025年02期 v.33;No.164 1-10页 [查看摘要][在线阅读][下载 1285K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：433 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 曾德平;陆颖;余科辰;卢峥朴;柏家果;秦秋英;隆美金;陈樱;韦祖樟;黄伟坚;欧阳康;
猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染仔猪可引起严重腹泻，导致肠道黏膜损伤、免疫功能低下。为探究PEDV感染仔猪空肠基因组转录水平的变化，筛选宿主免疫应答的差异表达基因，本研究收集PEDV感染仔猪的空肠组织，利用RNA-Seq技术进行转录组学测序分析。RNA-seq结果显示，与正常未感染仔猪相比，PEDV感染仔猪存在339个显著差异表达基因(DEGs)，其中182个上调基因，157个下调基因。GO分子功能结果显示，免疫相关差异表达基因主要与免疫球蛋白和受体结合、T细胞增殖等有关。KEGG通路富集结果显示，差异表达基因主要涉及TNF信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用、Toll样受体信号通路、Janus激酶/信号转导与转录激活子信号通路以及RIG-I受体信号通路等；最后再利用qRT-PCR对差异表达基因进行验证，其结果与转录组学结果基本一致。本研究为进一步研究PEDV感染导致宿主免疫应答变化机制提供了科学依据。
2025年02期 v.33;No.164 11-18页 [查看摘要][在线阅读][下载 1517K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：702 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 姜龙龙;周凯鹏;张雯;韩利方;闫文朝;
为探究多种球虫感染对兔的致病性，本研究选取从一只腹泻病兔的盲肠内容物中分离得到的6种兔球虫孢子化卵囊，对32日龄的无球虫兔进行感染，成功构建了兔球虫混合感染的动物模型。相对于不感染对照组，接种5.0×10~4或1.0×10~5个孢子化卵囊的兔出现明显的增重降低，采食量下降，腹泻和死亡等症状。空肠、回肠和结肠等部位寄生有大量球虫不同内生发育阶段虫体，并出现明显的出血、肠黏膜增厚和坏死等病变，肠道病变结果与接种球虫的种类基本一致。说明中型艾美耳球虫、黄艾美耳球虫等6种兔球虫混合感染，对兔表现较强致病性。本研究建立的兔球虫混合感染动物模型，还原和验证了临床生产中混合感染的球虫对兔的致病性，也为筛选有效抗球虫药物提供了更为便捷的方法。
2025年02期 v.33;No.164 19-25页 [查看摘要][在线阅读][下载 1193K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：359 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 李巨银;葛君;马超;张建辉;闫伟;孙娇娇;李建强;
柯萨奇病毒A组16型(CVA16)是引发手足口病流行与暴发的重要病原体之一，给公共卫生领域带来了严峻挑战。本研究通过体外构建柯萨奇病毒CVA16的eDNA感染性克隆，进而对其感染能力、连续传代稳定性以及体内免疫原性展开深入探究，旨在为CVA16疫苗的研发提供科学依据。本研究利用eGFP报告基因构建CVA16微基因组平台，并通过反向遗传技术拯救出CVA16感染性克隆，对其生物学特性进行全面评估。结果显示：构建的CVA16全长cDNA质粒经限制性内切酶双酶切，获得7500 bp目的条带和3500 bp载体条带，全基因测序验证cDNA序列与理论序列完全一致；细胞形态学鉴定显示，CVA16组可见典型肠道病毒致细胞病变效应，连续传代后仍保持稳定感染性及正常噬斑形态；小鼠免疫实验表明，该克隆可诱导机体产生高滴度特异性抗体和中和抗体，超离浓缩后中和抗体滴度为原液免疫组的2倍。结果表明，通过反向遗传技术获得的CVA16感染性克隆在体外可稳定传代，并具有较强的免疫原性，可为病毒基因功能、感染机制及疫苗研发提供基础。
2025年02期 v.33;No.164 26-34页 [查看摘要][在线阅读][下载 1259K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：208 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 陈荣琳;邢燕茹;王娟;李健楠;高硕磊;刘清艳;祝宇翔;周艳君;单同领;童武;郑浩;刘长龙;姜一峰;孔宁;童光志;于海;
本研究以Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞作为培养基质扩增猪流感病毒，并选择甲醛和β-丙内酯(BPL)两种化学灭活剂对病毒灭活。这两种灭活试剂最佳灭活条件为0.1%甲醛终浓度及37 ℃灭活24 h，以及0.02%BPL终浓度及4 ℃灭活18 h，灭活后抗原血凝效价比原始病毒低1个滴度左右。在不同灭活剂基础上分别配伍油佐剂ISA 201 VG和水佐剂HA 208乳化，在BALB/c小鼠上对灭活疫苗进行免疫评估及攻毒保护评价，攻毒使用剂量为1×10~6 TCID_(50)/只。甲醛灭活苗相比BPL灭活苗更能刺激小鼠产生高水平的HI抗体，佐剂选用油佐剂ISA 201 VG相比水佐剂HA 208所产生的HI抗体效价更高。攻毒后疫苗免疫组的存活率均达到100%，与对照组相比免疫组肺脏样品中病毒含量明显减少。据以上试验结果，初步认为甲醛+ISA 201 VG佐剂灭活苗对BALB/c小鼠所产生的免疫效果最佳并能较好地抵抗欧亚类禽猪流感病毒的攻击。以上研究结果为后续猪流感全病毒灭活疫苗的设计以及病毒灭活生产工艺提供了一定的研究基础。
2025年02期 v.33;No.164 35-42页 [查看摘要][在线阅读][下载 1354K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：400 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 李仕楷;刘佳琪;苏文楠;钟嘉诚;陈亦杏;张溢珊;朱婉君;张济培;陈济铛;
考诺尼亚菌是水禽呼吸道感染的重要病原菌之一，其临床症状与鸭疫里默氏杆菌感染引起的渗出性败血症相似。但国内对该菌研究报道较少，对其培养特性、耐药性和致病特性等相关特性了解不深。本研究通过病理剖检、16S rRNA测定和遗传进化分析，从广东某鹅场鹅眶下窦肿胀病例中分离鉴定得1株鹅源考诺尼亚菌，通过菌株生长曲线测定、生化试验、药物敏感性试验了解分离菌生长培养特性及耐药情况，以鹅胚感染试验初步判断该菌株致病性。结果显示：该菌株在TSA培养基上培养48 h后可观察到微黄、露滴样、圆形、边缘整齐、表面光滑小菌落；基因序列分析表明，该分离株的16S rRNA与考诺尼亚属的代表株同源性为98.7%，属同一分支；生长曲线测定结果表明，分离株在TSB肉汤培养基生长速度较其他常见菌慢；生化试验结果显示，分离株不发酵糖、醇，尿素、硫化氢反应阴性，氧化酶、过氧化氢酶反应为阳性；药敏试验结果表明，该菌对多种抗生素敏感，仅对氨苄西林、卡那霉素、利福平耐药；鹅胚致病对照试验结果显示，感染后1～5 d鹅胚出现死亡，死亡胚体充血，从死亡鹅胚卵黄液中可重新分离得菌株，表明该分离株可感染致死鹅胚。本研究首次在国内成功分离并鉴定出鹅源考诺尼亚菌，其研究成果可为完善鹅群考诺尼亚菌的防控策略与诊疗措施提供重要的参考依据。
2025年02期 v.33;No.164 43-51页 [查看摘要][在线阅读][下载 1378K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：186 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 张洪菊;程子龙;韦艳娜;毛立;刘茂军;牛家强;冯志新;李文良;
为查明江苏某奶牛场一起犊牛呼吸道疾病的病因，采集发病牛鼻拭子30份，采用RT-PCR/PCR方法对主要病原进行检测。对病毒检测阳性样品进行测序和遗传进化分析。对牛支原体(M.bovis)阳性样本进行分离培养，进而进行生化实验、生长曲线测定、药敏试验和遗传进化分析。结果显示：M.bovis(18份)、溶血性曼氏杆菌(1份)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)(2份)、牛冠状病毒(BCoV)(6份)为阳性，其他病原均为阴性；3株M.bovis生长曲线一致，不发酵葡萄糖、甘露醇，不水解明胶、七叶苷，不分解尿素；3株M.bovis均对泰妙菌素、林可霉素和泰万菌素敏感；序列分析表明，3株M.bovis oppF基因序列与各参考株的同源性为98.6%～100%，与国内菌株亲缘关系近，该牛场流行BVDV毒株为BVDV-1a亚型，BCoV毒株属于GIIb亚型。结果表明，该病例主要由M.bovis引起，伴发BCoV和BVDV，可优先选用泰妙菌素、林可霉素、泰万菌素进行防控，同时应加强病毒性病原的监测与防控。
2025年02期 v.33;No.164 52-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 1294K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：321 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 王翠;赵雪丽;王东方;王淑娟;马震原;杨海波;刘影;柴茂;谢彩华;闫若潜;
为建立口蹄疫病毒(FMDV)O型、A型和AsiaⅠ型三重实时荧光定量RT-PCR检测方法，本研究在比对多条FMDV基因的基础上，根据2B基因的最优保守区，设计O型、A型和Asia I型FMDV通用的反转录引物；再根据VP1基因的比对结果，以变异区为扩增靶区域，设计3对分别针对O型、A型和AsiaⅠ型FMDV的特异性引物和TaqMan MGB探针。经优化反应体系和扩增程序等反应条件，建立基于探针技术的FDMV三重实时荧光定量RT-PCR检测方法。验证该方法的特异性、敏感性和重复性，对15份临床疑似FMDV感染样品进行检测，并与基因测序方法及RT-PCR方法进行比较分析。结果显示：本研究成功建立了FMDV三重FQ-PCR方法，实现了一步法对FMDV O型、A型和AsiaⅠ型病原样品的鉴别检测。该方法可特异性扩增FMDV O型、A型和AsiaⅠ型标准株细胞培养物，但对猪水疱性口炎病毒(VSV)等7种病原及阴性对照未出现扩增，特异性较强；对FMDV O型、A型和AsiaⅠ型阳性重组质粒标准品的最低检出限均可达到10 拷贝/μL，敏感性较高；批内/批间试验变异系数为0.48%～1.55%，重复性较好；利用建立的三重FQ-PCR方法对15份临床疑似FMDV感染样品进行检测，检测结果与基因测序结果完全一致，优于RT-PCR方法。本研究建立的三重FQ-PCR方法具有敏感性高、特异性强，在同一反应体系中能同时鉴别检测出FMDV O型、A型和AsiaⅠ型等优点，能满足临床鉴别检测的需求。
2025年02期 v.33;No.164 61-69页 [查看摘要][在线阅读][下载 1234K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：449 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 邓可辉;陈志飞;俞婷;王志林;王修武;郭智轩;李松倍;魏文康;贺东生;
本研究成功建立了检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)3种猪冠状病毒的反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)，为现场快速诊断提供技术支持。根据GenBank公布的PEDV、TGEV、PDCoV的N基因保守序列作为靶序列设计了3套LAMP检测引物，并通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及临床样品检测，分别建立了3种快捷、敏感的猪冠状病毒RT-LAMP检测方法。结果显示：所建立的PEDV、TGEV、PDCoV 3种冠状病毒RT-LAMP检测方法的最佳反应温度分别为65 ℃、63 ℃、63 ℃，3种检测方法均可在45 min左右完成恒温扩增，扩增出特异性阶梯状条带，且不依赖于PCR仪等昂贵设备，仅需普通恒温装置即可反应。所建立的检测方法对PEDV、TGEV、PDCoV分别可以达到的检测下限为20、23、10拷贝/μL，敏感性较好；所建立的3种检测方法分别只检测出PEDV、TGEV、PDCoV，且与常见的猪源性病毒均无交叉反应，特异性好。用所建立的3种RT-LAMP检测方法对45份猪腹泻病料进行检测，PEDV、TGEV、PDCoV阳性率分别为33.33%(15/45)、22.22%(10/45)、13.33%(6/45)，均比常规RT-PCR检测阳性率高。与常规RT-PCR相比较，本研究建立的方法操作简便快速、经济，且检测设备门槛低，更适用于基层临床检测。
2025年02期 v.33;No.164 70-79页 [查看摘要][在线阅读][下载 1234K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：599 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 蒙琦;常亮;杨明;曹映辉;贺泂杰;
本研究旨在建立一种检测牛病毒性腹泻病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a方法。选取BVDV的E0蛋白基因序列为基础，设计CPA特异性引物。同时，依据CRISPR/Cas12a 的设计原则，设计了crRNA靶向RT-RAA扩增产物，并优化了RT-CPA-CRISPR/Cas12a反应体系，此外，借助建立的该方法，开展了临床样品的检测。结果显示：所建立的检测方法对BVDV的最低检出限为8.0 copies/μL，并具有高度特异性，对42份临床样品检测显示，该方法与传统PCR方法的一致性好，符合率能达到92.86%。该研究建立了牛病毒性腹泻病毒的RT-CPA-CRISPR/Cas12a检测方法，为该病的诊断提供了技术手段。
2025年02期 v.33;No.164 80-88页 [查看摘要][在线阅读][下载 1269K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 陈赫威;杨清;曹佳媛;韦珊珊;陆晨阳;林俊;覃绍敏;陈凤莲;吴健敏;陈樱;马玲;
阿卡斑病毒(AKAV)是一种主要感染牛羊的虫媒病毒，近年来在我国流行日趋复杂。为了建立一种更加灵敏、可以同时检测多种动物AKAV抗体的方法，本研究以重组AKAV N蛋白和HRP标记的重组AKAV N蛋白分别为捕获抗原和检测抗原，通过优化反应条件，首次成功建立检测AKAV抗体的双抗原夹心化学发光酶免疫分析法。该方法与蓝舌病毒、鹿流行性出血热病毒、牛肠道病毒和猪伪狂犬病毒阳性血清均无交叉反应；批内、批间重复性试验变异系数均小于8%，重复性好；与AKAV阻断ELISA试剂盒相比，敏感性高32倍，检测时间缩短42 min，检测结果κ系数为0.826，符合率极高；通过中和试验验证其准确性高。本研究建立的AKAV抗体检测化学发光酶免疫分析法特异性强、敏感性高、重复性好、简便、快速、准确，为AKAV大规模样品监测、血清学调查、疫病防控提供有效的技术手段。
2025年02期 v.33;No.164 89-96页 [查看摘要][在线阅读][下载 1189K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：191 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 俞赵荣;孙彤;金雪明;孙竹筠;苏苌;刘静宜;刘英楠;陈鸿军;
为了准确鉴别猪重要冠状病毒的感染，本研究设计特异性引物和TaqMan探针，建立了针对猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)、猪δ-冠状病毒(PDCoV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的四重荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法，并对其特异性、敏感性及重复性进行评估。结果显示：该方法具有良好的扩增特异性，可精准区分上述四种猪冠状病毒；对SADS-CoV、PDCoV和PHEV的最低检测限为10拷贝/μL，对PEDV为100拷贝/μL，敏感性较常规PCR提高了100倍；组内和组内变异系数均<2%，重复性良好。结果表明，该方法为猪冠状病毒感染的鉴别诊断提供了可靠分子检测工具，具有重要的临床应用价值。
2025年02期 v.33;No.164 97-105页 [查看摘要][在线阅读][下载 1284K] [阅读次数：1 ] |[下载次数：697 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 于新友;李天芝;苗立中;
为建立一种敏感、快速和特异的鸭瘟病毒(DPV)检测方法，本研究根据NCBI收录的DPV UL6基因序列，设计了1对特异性引物和1条Cycling探针，通过优化反应条件，建立了检测DPV的Cycleave荧光PCR检测方法。结果显示：该方法特异性高，不与其他常见鸭病病原体发生交叉反应，检测DPV灵敏度可达6.5 拷贝/μL，批内与批间的变异系数均小于2%。研究表明，建立的DPV Cycleave荧光定量 PCR 方法特异性高、敏感性高、重复性好，可用于临床样品检测，为鸭瘟的诊断和防控奠定了基础。
2025年02期 v.33;No.164 106-110页 [查看摘要][在线阅读][下载 1152K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：361 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 林瑞平;袁曾壮;李俊鸿;庄定能;沈莹;冯高乐;倪征;
为了筛选出适合的检测方法，提高基层实验室的检测诊断能力，从而在源头上做好动物布鲁氏菌病的诊断和净化工作。本研究分别通过敏感度、特异度、Youden指数、漏诊率以及误诊率等不同参数评价了4家公司的布鲁氏菌病抗体检测胶体金试剂盒的性能，同时以虎红平板凝集试验作为参照方法。结果显示：4家公司的胶体金试剂盒的特异度均为100%，其中B公司对标准阳性血清样品的最低检出浓度可达1∶512，且灵敏度和Youden指数均最高，可达86.67%，说明其证实疾病的能力越强。A公司和C公司的最低检出浓度为1∶256，而虎红平板凝集试验对标准阳性血清样品的最低检出浓度仅为1∶4，表明其对阳性样本初筛敏感度较低。本实验结果表明，胶体金层析法可以作为基层布病初筛的一种可靠的检测方法，也为诊断试剂盒选择提供参考数据，为布鲁氏菌病的防控提供一种可靠的检测技术。
2025年02期 v.33;No.164 111-116页 [查看摘要][在线阅读][下载 1145K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：427 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 张启龙;钱云开;刘利勤;傅彩霞;贾宏丽;刘海莹;栗云鹏;杨逸舟;田辉;董志军;朱家强;周德刚;
为比较不同区域大肠杆菌是否具有差异性，本研究针对自北京市怀柔区收集分离的11株大肠杆菌和延庆区收集分离的22株大肠杆菌进行了鉴定，分别采用常规生化法、16S rRNA测序和基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)的鉴定方法进行鉴定，比较了3种方法鉴定的准确率，并对获得的细菌肽质量指纹谱数据进行分析。结果显示：两地采集的大肠杆菌用3种方法鉴定，其准确性都在95%以上，其中MALDI-TOF MS鉴定采用多点点靶时准确率可达99%以上，多点点靶下MALDI-TOF MS鉴定重复性强、准确高、时间快；不同区域的大肠杆菌虽具有相似的肽质量指纹谱特征，但聚类分析和主成分分析显示所有数据可清晰地按地区聚成两簇，其中怀柔一簇、延庆一簇，两簇之间区分明显。表明自怀柔和延庆采集的大肠杆菌的肽质量指纹谱具有区域性差异，可为基于MALDI-TOF MS的大肠杆菌溯源性分析提供技术依据。
2025年02期 v.33;No.164 117-123页 [查看摘要][在线阅读][下载 828K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：189 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 柴茂;马震原;杨海波;王淑娟;刘影;王东方;赵雪丽;王翠;谢彩华;王华俊;闫若潜;
利用昆虫杆状病毒表达系统(BEVS)表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白，并制备单克隆抗体。构建PEDV N基因重组穿梭质粒pFastBac-N，转化至感受态细胞DH10Bac中获取重组杆粒Bacmid-N，将Bacmid-N转染至SF9昆虫细胞中制备重组蛋白。将重组蛋白免疫小鼠，经融合、筛选、纯化出单克隆抗体，并测定单克隆抗体相关特性。获得重组杆状病毒rBV-N，获得大小为59 kDa重组N蛋白(rN)，制备出抗N蛋白单克隆抗体3C8E3，该单克隆抗体为IgG1亚类，效价为1∶1.024×10~5，效价高、特异性强、稳定性好，更具实用性。本研究为PEDV抗原/抗体诊断试剂盒、PEDV亚单位疫苗研究奠定了基础。
2025年02期 v.33;No.164 124-131页 [查看摘要][在线阅读][下载 1228K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：610 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 叶曼青;叶晨倩;秦文珍;杨心雨;翟雪滢;郑浩;童武;李国新;于海;童光志;孔宁;李智丽;单同领;
自2014年猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)在美国暴发以来，严重危害生猪健康，给各国的经济带来重大压力。本试验拟将PDCoV S1蛋白截短，通过原核表达获得重组蛋白，并且制备对应的多克隆抗体。利用生物信息学软件对PDCoV S1蛋白的亲疏水性进行分析，将其截短为3个相互重叠的基因片段，并通过原核表达获得重组蛋白。以重组蛋白为抗原免疫6周龄雌性BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示：截短获得的3个重组蛋白均在包涵体中稳定表达，通过间接ELISA、Western blot和IFA检测方法，表明制备的多克隆抗体具有良好的抗体效价和特异性识别能力。本研究制备出特异性识别PDCoV S蛋白的多克隆抗体，为后续研究PDCoV S蛋白的结构和功能提供了工具，为建立PDCoV诊断方法奠定了基础。
2025年02期 v.33;No.164 132-138页 [查看摘要][在线阅读][下载 1159K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：783 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 刘禹含;叶雨濛;麦嘉迅;程松;孟春春;朱杰;刘光清;王勇;巴音查汗·盖力克;李传峰;
本研究利用原核表达系统表达犬副流感病毒(CPIV)F蛋白，并制备CPIV-F蛋白多克隆抗体。依据CPIV SH2021株F基因设计引物，扩增获得去除信号肽的F基因片段，并构建了重组表达质粒pET-42a-CPIV-F，经测序验证正确后转化至大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导表达重组蛋白，并优化了诱导剂浓度及诱导时间。采用包涵体粗提纯化法对重组CPIV-F蛋白进行纯化，并测定了重组蛋白浓度。用纯化的重组CPIV-F蛋白制备其兔源多克隆抗体，通过Western blot和ELISA鉴定了多克隆抗体特异性和效价。结果显示：试验成功构建pET-42a-CPIV-F原核表达质粒并表达出重组CPIV-F蛋白；SDS-PAGE法和Western blot结果表明，重组CPIV-F蛋白可在大肠杆菌中的表达，大小为89 kDa，优化后的IPTG终浓度为1 mmol/L，诱导4 h表达量最大，重组蛋白浓度为2.3 mg/mL，兔抗CPIV-F抗体可以与重组蛋白发生特异性反应；间接ELISA测得兔抗CPIV-F蛋白多克隆抗体效价为1∶102 400。本研究制备的兔源多克隆抗体特异和高效，表明F蛋白具有良好的免疫原性，为进一步研究CPIV F蛋白的生物学功能及建立相关的免疫学检测方法奠定了基础。
2025年02期 v.33;No.164 139-145页 [查看摘要][在线阅读][下载 1238K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：340 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 冯亦亦;代军;谭磊;孙英杰;宋翠萍;廖瑛;丁铲;仇旭升;刘秀梵;
鞘磷脂(SM)和神经酰胺(Cer)是新城疫病毒(NDV)囊膜的主要磷脂成分。鞘磷脂合成酶2(SGMS2)是SM合成调控酶。前期研究发现NDV感染的DF-1中鸡SGMS2基因显著上调，表明该变化与NDV感染有关。本研究通过克隆获得了鸡SGMS2基因，进行生物信息学分析发现：与人和鼠同源性分别为93.0%和92.4%；跨膜区在不同物种间高度保守，高达96.8%。通过qPCR检测细胞和组织中鸡SGMS2 mRNA表达情况，发现均处于恒定状态。NDV感染后，鸡SGMS2表达水平发生剧烈变动，病毒含量高的组织中，其表达量大幅下调。通过qPCR和Western blot检测转染pCMV6-FLAG-ch-SGMS2质粒的DF-1细胞，发现病毒NP的 mRNA和蛋白水平显著下降，说明过量表达SGMS2抑制NDV的增殖作用。本研究为揭示鸡SGMS2蛋白功能奠定理论基础，也为阐明鸡SGMS2对NDV增殖的作用提供理论依据。
2025年02期 v.33;No.164 146-155页 [查看摘要][在线阅读][下载 1454K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 李文忠;荣新利;刘野;吴庆东;张乐;孙英峰;于海;
为了解天津地区猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的流行和遗传变异情况，收集2021-2022年天津地区养殖场209份临床疑似发病猪的组织进行检测及ORF5遗传变异分析。结果显示：PRRSV阳性样品总检出率为37.3%(78/209)，并从阳性样本中选择15个不同地区来源具有代表性样品进行ORF5基因克隆序列。序列及遗传进化分析显示：该15株PRRSV毒株均属于美洲型，其中8条PRRSV毒株的ORF5基因与以HuN4为代表的类HP-PRRSV毒株同源性较高，核苷酸序列与推导氨基酸序列的同源性分别为89.4%～97.3%和80.6%～95.5%，而与NADC30、VR2332、NADC34等毒株的同源性较低，分别为77.1%～87.1%和77.1%～86.6%；6条PRRSV毒株的ORF5基因与以NADC30为代表的类NADC30毒株同源性最高，核苷酸序列与推导氨基酸序列的同源性分别为91.9%-92.7%和91.5%-93.0%，而与HuN4、VR2332、NADC34等毒株的同源性较低，分别为83.6%-87.8%和79.6%～86.6%；1条PRRSV毒株的ORF5基因与以NADC34为代表的类NADC34毒株同源性最高，核苷酸序列与推导氨基酸序列的同源性为96.4%和95.5%，而与NADC30、HuN4、VR2332等毒株的同源性为86.7%～89.9%和86.6%～92.0%。结果表明，2021-2022年天津地区以类HP-PRRSV、类NADC30 PRRSV为主要流行毒株，同时出现类NADC34毒株的流行，存在明显的遗传多样性。研究结果可为天津地区PRRS的防控提供理论依据。
2025年02期 v.33;No.164 156-164页 [查看摘要][在线阅读][下载 1421K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：1 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 范创创;王霄旸;张可煜;王春梅;周文;年四辉;
吡喹酮是一种广谱抗寄生虫药，本研究中自制的吡喹酮咀嚼片具有抗犬绦虫的作用。本研究建立了吡喹酮咀嚼片的溶出度高效液相色谱测定方法并进行了方法学验证，且运用非模型依赖法对自制片与市售片的溶出行为相似性进行了评价。结果显示：该溶出度测定方法在10～50 μg/mL时，展现出良好的线性关系；回收率为98.67%～101.8%，进样精密度的相对标准偏差(RSD)为0.38%；3批自制吡喹酮咀嚼片与市售产品的溶出度曲线具有相似性，表明二者体外溶出具有等效性。综上所述，自制吡喹酮咀嚼片与市售片在关键指标及溶出行为方面具有相似性，可为后续的等效性研究提供有力依据。
2025年02期 v.33;No.164 165-169页 [查看摘要][在线阅读][下载 1269K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：287 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 史永红;陈秋生;
超薄切片技术在兽医领域是极为重要的研究手段，但其通用制备程序在面对不同样品时，常难以取得高质量结果。本研究立足传统电镜技术，先优化羊皮肤超薄切片技术，再将优化方法应用于DTMUV感染鸭脑组织及BHK-21细胞、微孢子虫感染的三疣梭子蟹肌肉组织和PRV感染的Vero细胞样品中，进行应用验证。优化方案包括：在常规固定液中添入4%多聚甲醛改良固定液，全程以丙酮作脱水剂，增设30%脱水步骤，100%脱水按10、15、20、30 min时间梯度进行，浸透时长延长至常规双倍并增用一部纯包埋剂。结果显示：经优化，能稳定获取平整且厚度均一的切片；同时，采用20%乙醇配制醋酸双氧铀溶液并延长染色时间至20 min，使得切片干净平整、无污染，染色反差良好；以75目大孔径载网捞片，显著扩大切片可观察区域。这些优化手段能制作出大视野、高质量的超薄切片，并在上述样品中得到验证，表明优化后的超薄切片技术可满足兽医超微形态学研究需求。
2025年02期 v.33;No.164 170-177页 [查看摘要][在线阅读][下载 1312K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：262 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 罗丹丹;鲁志平;文永平;邬旭龙;吴翠蓉;俞宁;
沙门氏菌是肠杆菌科中具有重要公共卫生意义的人兽共患病原菌，受沙门氏菌污染的禽类制品是人感染沙门氏菌最主要的来源之一。在农业和医疗领域，随着抗菌药物长期使用甚至滥用、沙门氏菌耐药基因的传播以及环境和宿主因素的变化，导致沙门氏菌的耐药性每年都在发生变化。因此，本文就2012—2024年国内外发表的关于我国禽源沙门氏菌耐药性文献作一综述，以期了解沙门氏菌在不同地区不同年份耐药性变化情况，从而为指导临床合理用药和控制疾病流行提供科学依据。
2025年02期 v.33;No.164 178-193页 [查看摘要][在线阅读][下载 1330K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：569 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ]