中国动物传染病学报

马志永

中国农科院上海兽医研究所所长、党委副书记,博士,研究员,博士生导师,团队首席科学家,上海市领军人才。现任中国畜牧兽医学会理事、上海市畜牧兽医学会副理事长兼秘书长。长期从事乙型脑炎等人畜共患病和猪呼吸道传染病研究,探究宿主先天性抗病毒反应机制及病毒逃逸机制,寻找抗病毒药物设计的靶标分子,研发新型诊断技术和疫苗。主持国家级和省部级项目课题20余项。在《PLoS Pathogens》《Journal of Virology》《Journal of Biological Chemistry》等国内外杂志上发表论文150余篇,其中SCI论文100余篇,获专利16余项。

E-mail:zhiyongma@shvri.ac.cn 


研究论文

  • 无乳链球菌nrdD基因缺失株的构建及其对小鼠的致病性检测

    陈怀君;袁橙;袁圣;陈智怡;张紫菡;朱善元;王晓晔;郭长明;

    为研究nrdD基因对无乳链球菌毒力的影响,本研究参照GenBank中无乳链球菌GD201008-001(登录号:NC_018646)的nrdD全基因序列设计引物,采用融合PCR的方法将nrdD基因上、下游同源臂连接到一起,构建nrdD基因上、下游同源臂融合片段,连接至温敏型自杀质粒pSET4s。PCR克隆含有启动子序列的nrdD基因,连接至链球菌-大肠杆菌穿梭质粒pSET2。分别构建nrdD基因的缺失株ΔnrdD及互补株CΔnrdD。经PCR和基因测序,证明nrdD基因的缺失株及互补株构建成功。通过对ΔnrdD和CΔnrdD的形态学变化的观察,生长速率、小鼠血清中增殖能力、小鼠组织载量的测定以及小鼠攻毒试验的分析,评价nrdD基因对无乳链球菌毒力的影响。结果表明:与野生株GD201008-001相比,ΔnrdD在细菌染色形态上链长明显增加,但不影响荚膜的形成;在相同培养条件下,ΔnrdD在与GD201008-001生长速率无明显差异;在小鼠血清中增殖试验中,ΔnrdD在血清中的增殖能力较野生株明显减缓;在小鼠感染14 h后,ΔnrdD在其血液、脾脏及脑部的载量明显低于野生株,而CΔnrdD在各组织中的载量与野生株相比差异不显著;小鼠的攻毒试验显示,ΔnrdD注射组小鼠存活时间较野生株与互补株延长,差异显著。研究证明,nrdD基因与无乳链球菌毒力密切相关,本试验结果也为深入研究无乳链球菌nrdD基因的功能奠定了基础。

    2024年03期 v.32;No.159 1-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 1541K]
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  • 伪狂犬病病毒gE/gI缺失株CY-6的构建及免疫效力初步研究

    曲信芹;魏波;徐丽丽;刁治君;韩成昊;蔡青秀;丛雁方;马爱琴;

    构建针对伪狂犬病病毒gE和gI基因缺失的重组转移质粒pBL-gI-gE,将PRV-CY-?gI/gE-GFP病毒、pBL-gI-gE转移载体和Lipofectamin 2000转染试剂共转染BHK-21细胞,蚀斑筛选纯化法得到重组病毒PRV-CY-?gI/gE,命名为CY-6株。将CY-6株C1代在BHK-21细胞增殖并传至10代,测定生长曲线、病毒含量、基因鉴定、特异性、纯净、毒力和免疫原性。结果CY-6株的生长曲线与亲本CY株无明显变化,C1~C10代毒的病毒含量为10~(8.17)~10~(8.68) TCID50/mL,基因鉴定显示gE基因无366 bp的目的条带,gD基因有1条217 bp的目的条带,gI基因无331 bp的目的条带,特异性检验显示均能被伪狂犬病病毒特异性阳性血清中和;纯净检验该毒种无菌、支原体及外源病毒污染;毒力试验试验猪均5/5健活,免疫原性试验免疫组5/5保护,CY株攻毒对照组5/5发病,其中3/5死亡。以上结果表明伪狂犬病病毒CY-6株符合生产用毒种的初步要求,为研制新型伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗奠定基础。

    2024年03期 v.32;No.159 9-18页 [查看摘要][在线阅读][下载 1729K]
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  • PRRSV非结构蛋白Nsp1α合成肽多克隆抗体的制备及应用

    解艺璇;张彦兵;李慧;朱琳;葛菲菲;刘珂;魏建超;李宗杰;邵东华;李蓓蓓;马志永;孙延鸣;邱亚峰;

    本研究尝试利用PRRSV Nsp1α合成肽进行多克隆抗体的制备,并对抗体的特性进行了分析。首先,利用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp1α的抗原肽序列;随后,按照此序列合成获得抗原肽,并将其与KLH载体蛋白进行偶联;接下来,将偶联好的抗原肽与弗氏佐剂混合,通过免疫大白兔制备针对Nsp1α合成肽的多克隆抗体;最后,利用ELISA、Western blot及间接免疫荧光法对多克隆抗体的特性进行了分析。结果显示:该多克隆抗体ELISA的效价超过10~5;利用Western blot可以检测到特异的Nsp1α表达条带,包括瞬时转染的样品和不同毒株病毒感染的样品;利用间接免疫荧光法分析,该多克隆抗体可有效地区分病毒感染和未感染的样品。结果表明,PRRSV Nsp1α合成肽多克隆抗体可以有效地应用于PRRSV Nsp1α表达检测,为进一步研究PRRSV Nsp1α的功能提供了一个有效的工具。

    2024年03期 v.32;No.159 19-26页 [查看摘要][在线阅读][下载 1469K]
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  • 猪附红细胞体感染家兔模型的建立

    于天;韩金成;梁喜植;王洋;李明宣;闫宗斌;李文学;薛书江;

    为了建立猪附红细胞体感染家兔模型。将摘除脾脏后的12只家兔随机平均分为3组。A组为模型组,接种2 mL纯化的猪附红细胞体;B组为阴性对照组,接种2 mL猪附红细胞体阴性血液分离物;C组为空白对照组,接种2 mL生理盐水。接种后通过测量体温、体质量、PCR检测、血常规、血液生化指标和病理组织学检验来鉴定猪附红细胞体感染情况。结果显示,A组家兔与B组、C组相比,体温、体质量变化差异显著(P<0.05)。A组家兔出现了消瘦、被毛杂乱、结膜黄染等临床症状。血常规检测结果显示,A组家兔红细胞总数、平均体积、血红蛋白含量均减少,差异显著(P<0.05);血红蛋白、血红蛋白浓度均减少,差异极显著(P<0.01),提示家兔贫血。血液生化指标检测结果显示,A组家兔尿素、白球比、尿酐比,丙氨酸氨基转移酶均升高,差异显著(P<0.05);球蛋白、肌酐、血糖均下降,差异显著(P<0.05),提示家兔免疫力下降,肝功能和肾功能受损。病理组织学观察结果显示,A组家兔肝脏充血、水肿、肺脏局部有炎性细胞、心肌细胞出血。试验结果表明本研究成功建立了猪附红细胞体感染家兔模型。

    2024年03期 v.32;No.159 27-33页 [查看摘要][在线阅读][下载 1476K]
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  • 弓形虫MIC1、MIC6和ROP18混合蛋白对小鼠的免疫保护作用

    李虎;朱进进;李婧旸;韩成建;余莉;

    为评估弓形虫微线体蛋白MIC1、MIC6和棒状体蛋白ROP18组成的重组疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用,我们将重组表达的MIC1、MIC6和ROP18三种蛋白进行不同的组合,并联合弗氏佐剂通过皮下注射的方式免疫小鼠。用ELISA技术检测免疫后小鼠血清特异性抗体,以及免疫蛋白刺激后脾细胞培养上清中各细胞因子的水平,通过脾淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞增殖情况。最后一次免疫后,用弓形虫WH3强毒株攻击,观察并记录小鼠的存活情况。结果表明,与对照PBS组相比,蛋白免疫组产生高滴度的IgG和IgG亚型(IgG1和IgG2a)抗体,滴度可高达1∶128 000。细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ表达水平不同程度地升高,并且重组蛋白能够诱导淋巴细胞特异性增殖。免疫组小鼠的生存时间较对照组有所延长,其中MIC6-ROP18组延长时间最长(P<0.01)。MIC1、MIC6和ROP18组成的重组疫苗能诱导小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答,其中MIC6-ROP18蛋白组合的免疫保护效果更为明显,但仍需进一步改进。本研究为弓形虫疫苗的研发提供了思路。

    2024年03期 v.32;No.159 34-41页 [查看摘要][在线阅读][下载 1592K]
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  • 海罗净现场发生次溴酸对家禽常见致病菌杀灭效果分析

    张贝贝;张耀东;朱红;姚澜;王瑶;易正飞;祁晶晶;田明星;李海花;张春锦;陈世建;于圣青;王少辉;

    海罗净溴树脂是一种新型杀菌滤材,由惰性多孔高分子与氧化性溴结合而成,当水流过时,可形成具有杀菌能力的次溴酸溶液。本研究旨在评估海罗净现场发生次溴酸对禽致病性大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、金黄色葡萄球菌等家禽常见致病菌的杀灭效果。通过多种组合建立次溴酸杀灭家禽典型致病菌的评价技术,分别以致病菌与次溴酸(根据试验等比例调整)混匀,然后评价不同浓度、不同作用时间、不同pH值次溴酸对不同致病菌的杀灭效果。结果显示:2 mg/L(均以Br_2计)海罗净现场发生次溴酸的杀菌效果非常好,与10~4~10~7 CFU/mL的禽致病性大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、金黄色葡萄球菌作用1 min即可将其全部杀灭,杀菌率为100%。0.5~1.5 mg/L海罗净现场发生次溴酸作用1 min也可全部杀灭10~4~10~7 CFU/mL的禽致病性大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、金黄色葡萄球菌。然而,0.2 mg/L次溴酸对不同致病菌的杀菌效果有所不同,完全杀灭10~7 CFU/mL禽致病性大肠杆菌、鸡白痢沙门菌、金黄色葡萄球菌的时间分别为1 min、10 min和5 min。将水pH值调整为8.5(pH8.5原水),基本不影响海罗净现场发生次溴酸的杀菌效果。本研究通过评价次溴酸对家禽常见致病菌的杀灭效果,为海罗净现场发生次溴酸净水消毒方法的临床应用提供参考依据。

    2024年03期 v.32;No.159 42-49页 [查看摘要][在线阅读][下载 1494K]
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  • 1株鸡毒支原体的分离鉴定及致病性研究

    张伯顺;卜德新;吕虹雨;黄冬;王睿智;于春梅;王进江;丛雁方;

    为了对1株从鸡场分离到的鸡毒支原体(MG)进行遗传进化分析及致病性研究。用MG的16S rRNA引物对山东省莱西市某鸡场疑似MG感染的气囊病料进行了PCR鉴定,结果可扩增到特异性条带。通过病原分离培养、16S rRNA基因测序比对获得MG分离株,命名为SDMg01株;低倍显微镜观察到,菌落呈典型的“荷包蛋”状;生化鉴定结果表明,该分离株能发酵葡萄糖,不水解精氨酸,不利用尿素。对分离株16S rRNA序列进行MEGA分析和构建系统进化树发现SDMg01分离株与其他MG菌株在同一进化分支上,其中与MG参考菌株(PG31)相似性为99.8%。对分离株SDMg01进行动物试验,感染8周龄的SPF鸡14 d后进行解剖,观察临床症状及气囊病理学变化;结果表明,SDMg01分离株致病性较强,可引起典型的气囊炎。本研究为MG诊断试剂的研制和疫苗候选毒株的筛选奠定了基础。

    2024年03期 v.32;No.159 50-56页 [查看摘要][在线阅读][下载 1601K]
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  • 1株鸡源鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

    李维升;王艳;高亚东;赵神鸿;孙景昱;张越;尹建华;

    为了解鸡源鸭疫里默氏杆菌(RA)的致病性,对1株2021年从病鸡肝脏中分离的RA疑似菌株进行染色镜检、生化鉴定、血清型鉴定、药敏试验、动物致病性试验及病理学观察并分析其16S rRNA序列。结果显示:菌株不发酵糖类,脲酶试验、触酶试验、氧化酶还原试验、明胶液化试验和枸橼酸盐试验均为阳性,硫化氢、VP、MR试验均为阴性;血清型鉴定为血清10型;分离菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻呋、环丙沙星、磺胺异噁唑、红霉素、多西环素、氟苯尼考高敏,对头孢曲松、恩诺沙星、大观霉素、庆大霉素耐药;动物试验表明,能引起鸭和鸡的“三炎”症状,对鸭具有高致死率且能导致鸡出现严重关节软组织病变;病理学变化显示人工感染鸡心外膜增厚,充满纤维蛋白,炎性细胞浸润,主要炎性细胞为淋巴细胞;肝脏局灶性炎性细胞浸润,主要为淋巴细胞,部分肝细胞出现胞浆和核深染的固缩现象;脾脏血管周围有少量淋巴细胞浸润;腿部组织中充满渗出液,大量炎性细胞浸润于血管周围。16S rRNA序列比对显示分离株与GenBank RA参考株同源性均在99%以上,确认其为RA。遗传进化分析显示分离株与当前毒力最强的RA Hxb2株高度同源。本试验证明鸡源RA QD01株对鸡和鸭都具有强致病性并能在鸡群中流行传播。

    2024年03期 v.32;No.159 57-63页 [查看摘要][在线阅读][下载 1760K]
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  • 猪流行性腹泻病毒流行毒株对4周龄仔猪的致病性研究

    孙艳永;张冲;王亚林;

    本试验旨在评估猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行毒株对4周龄仔猪的致病性。将60头4周龄PEDV抗原抗体阴性断奶仔猪分为4组,每组15头,第1、2、3组试验用猪逐头分别口服2.0 mL的PEDV毒株PEDV-FJ06、PEDV-0016和PEDV-TT;第4组作为阴性对照组(NC),逐头口服2.0 mL磷酸盐缓冲溶液(PBS)。攻毒后,PEDV-FJ06和PEDV-TT组试验用猪在1 d内即出现水样性腹泻,PEDV-0016组试验用猪在第2 d出现水样性腹泻,各组发病率分别为90%(PEDV-FJ06)、80%(PEDV-0016)、100%(PEDV-TT)和0%(NC)。试验用猪在攻毒后第1 d即可通过粪便排毒,排毒高峰期在感染后第2~7 d,至试验结束仍有部分猪持续排毒。攻毒后第3 d和第7 d攻毒各组平均日增重均显著低于阴性对照组(P<0.001),试验后期,随着临床症状减轻,被感染猪的健康状况逐步好转,平均日增重也略有恢复,但仍明显低于对照组。攻毒后第7、14和21 d,每组随机选取5头猪剖检,大体病理学检查可见肠腔扩张、肠壁变薄和肠系膜充血等;病变严重的试验用猪组织病理学检查,可见小肠绒毛严重萎缩、脱落,并伴有炎性细胞浸润。免疫组化结果显示,可在感染猪十二指肠、空肠和回肠绒毛上皮细胞胞质中检测到PEDV阳性信号,且攻毒后第7 d攻毒各组试验用猪的回肠组织PEDV免疫组化阳性率为100%。本试验研究表明PEDV-FJ06、PEDV-0016和PEDV-TT毒株对4周龄仔猪均具有较高的致病性,病毒感染后可迅速在小肠上皮细胞中增殖,造成小肠绒毛损伤,进而导致腹泻,并严重影响其平均日增重;PEDV感染后持续排毒,增加了PEDV传播风险。

    2024年03期 v.32;No.159 64-71页 [查看摘要][在线阅读][下载 1554K]
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  • 蜜蜂慢性麻痹病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

    张体银;王武军;林素洁;张志灯;李宋钰;于师宇;

    为建立慢性蜜蜂麻痹病毒(CBPV)快速诊断方法,本研究根据CBPV RNA依赖RNA聚合酶(RdRp)基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法,标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数达0.998;该方法最低检出限为10拷贝/μL,与蜜蜂急性麻痹病毒等常见蜜蜂病毒无交叉反应,具有良好的灵敏性和特异性;组内和组间变异系数分别低于0.5%和2%,具有较好的稳定性。本研究建立的CBPV荧光定量RT-PCR检测方法,可用于实验室检测、流行病学调查和疫情监测。

    2024年03期 v.32;No.159 72-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 1448K]
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  • 猪弓形虫病阻断ELISA方法的建立及初步应用

    潘珂;张静;莫心宇;申邦;方瑞;胡敏;赵俊龙;周艳琴;

    本研究利用制备的GRA7单克隆抗体为基础建立猪弓形虫病的阻断ELISA方法。以rGRA7重组蛋白免疫小鼠,取脾细胞进行细胞融合,筛选出4株能够稳定产生单克隆抗体的阳性单克隆细胞株。经对此单克隆抗体进行IFA和Western blot检测确认成功制备GRA7蛋白的单克隆抗体后,以重组蛋白为包被抗原对阻断ELISA方法进行优化后,经过重复性、交叉性、符合性实验验证本方法具有可重复性,与MAT符合性高。初步应用于288份临床样品检测,检出率为11.46%,与MAT检测结果重合率为84.8%。本研究成功制备弓形虫GRA7蛋白的单克隆抗体,并建立了一种猪弓形虫病的阻断ELISA方法,为弓形虫病的检测提出了新的方案。

    2024年03期 v.32;No.159 79-87页 [查看摘要][在线阅读][下载 1585K]
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  • 塞内卡病毒LAMP可视化快速检测方法的建立及初步应用

    田瑶;李琛;杨莹;李佳昕;王硕;时建立;彭喆;徐绍建;吴晓燕;刘畅;韩红;韩先杰;李俊;

    为建立塞内卡病毒(SVA)的快速检测方法,本研究在SVA高度保守区域,分别设计了5对特异性LAMP引物,并通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及临床样本检测,建立了一种经济、特异、敏感的SVA检测方法。在62℃水浴55 min扩增出大于220 bp的特异性阶梯状条带,以质粒为模板进行敏感性试验结果表明该方法在5.1 copies/μL时仍可以检测出SVA,比普通PCR敏感1000倍。特异性试验结果显示该方法与猪肺炎支原体(MPH)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合增病毒(PRRSV)均无交叉反应,应用该方法检测72例临床疑似病料,阳性率为33%(24例)。与普通PCR相比较,该方法操作简便、快速、特异、经济,本研究提供了一种更适于临床检测的SVA检测方法。

    2024年03期 v.32;No.159 88-94页 [查看摘要][在线阅读][下载 1586K]
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  • 鸽圆环病毒Cap基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的建立及应用

    韩晓语;杨俊杰;赵洪哲;郭昊;王亚新;温永俊;王凤雪;

    为建立一种针对鸽圆环病毒(PiCV)的快速诊断方法,试验根据PiCV的Cap保守基因序列,设计合成一对特异性引物,建立了PiCV荧光定量PCR检测方法,对其敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测。结果表明:在最佳反应条件下,所建立的PiCV荧光定量PCR方法在1×10~2~1×10~7 copies/μL标准品范围内具有良好的线性相关性,线性相关系数为0.9846;敏感性试验结果显示,该方法最低可检测到1×10~2 copies/μL标准品,是常规PCR检测方法的100倍;特异性试验结果显示,该方法与其他常见的鸽病病原不发生交叉反应;重复性评价结果显示,批内与批间的变异系数均小于2%;所建立PiCV荧光定量PCR方法对临床病死鸽肝脏样品检测结果显示,PiCV阳性率达75.7%,高于常规PCR方法的检测阳性率(54.1%),说明该方法具有良好的适用性。可应用于对PiCV的快速检测,为PiCV的及时防控提供有力技术支持。

    2024年03期 v.32;No.159 95-101页 [查看摘要][在线阅读][下载 1427K]
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  • 高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌对氧氟沙星耐药性研究

    杨彩虹;张萍;买买提艾力·艾合木提;黄巧玲;王震;曹旭东;

    评价高分辨率熔解曲线法在结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性检测的有效性。采用传统比例法、DNA测序法、高分辨率熔解曲线法对84株结核分枝杆菌临床分离株进行氧氟沙星耐药性检测,分别以药敏结果和DNA测序结果为参照,应用卡方检验分析各检测结果之间的差异性,Kappa检验分析检测结果一致性。药敏结果显示,12株菌对氧氟沙星耐药,72株敏感。DNA测序结果显示,10株菌存在gyrA基因耐药相关突变,74株菌不存在gyrA基因耐药相关突变。高分辨率熔解曲线检测结果显示,有14株耐药株,70株敏感株。以比例法药敏结果为参照,DNA测序检测菌株耐药性的敏感性为83.3%、特异性为100%、符合率为97.6%,检测结果具有高度一致性;高分辨率熔解曲线法检测菌株耐药性的敏感性为75%、特异性为93.1%、符合率为90.5%,检测结果具有中度一致性。以DNA测序结果为参照,高分辨率熔解曲线法检测gyrA基因耐药突变的敏感性为80%,特异性为91.9%,符合率为90.4%,检测结果具有中度一致性。本研究结果表明高分辨率熔解曲线法对结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性检测的效能良好,可用于氧氟沙星耐药结核分枝杆菌的快速辅助筛查,为早期治疗方案制定提供重要依据。

    2024年03期 v.32;No.159 102-109页 [查看摘要][在线阅读][下载 1636K]
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  • 和田地区鹅源致病性大肠杆菌的血清群、致病性与耐药性研究

    程雪梅;肖海侠;王芋丹;王一霖;白怡馨;苏战强;佟盼盼;

    为了查明新疆和田地区鹅场发生的以腹泻为主要症状,以肝周炎和心包炎为主要病理变化的疾病是否由大肠杆菌引发,本研究无菌采集23份病死鹅内脏样本,采用常规细菌分离鉴定、PCR方法进行大肠杆菌鉴定,对分离菌的O血清群、致病性及耐药情况进行分析。结果显示,共分离到23株大肠杆菌,血清群包括O18(21.74%)、O78(13.04%)、O2(8.70%)和O1(4.35%),12株(52.17%)血清群未明。主要携带的毒力基因包括irp2(95.65%)、iucD(73.91%)、fyuA(17.39%)和astA(8.70%),分离株对小鼠具有致病性。23株大肠杆菌对四环素的耐药率为100%,氯霉素、环丙沙星、氨苄西林、左氧氟沙星、哌拉西林、复方新诺明、链霉素和头孢噻肟的耐药率在60.87%~95.65%,对多黏菌素B均敏感。共检测出12种耐药基因,tetA、tetG、cml1、bla_(TEM)、sul1、aac、bla_(CTX-M-1)的检出率在43.48%以上,bla_(SHV)、bla_(CTX-M-9)、tetE、aadA1的检出率在4.35%~30.43%,未检到bla_(CTX-M-2)。本研究确定和田地区鹅场腹泻、肝周炎和心包炎为大肠杆菌感染所致,血清型较为复杂,耐药性严重。

    2024年03期 v.32;No.159 110-118页 [查看摘要][在线阅读][下载 1436K]
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  • 市售肉品产志贺毒素大肠杆菌污染情况与耐药性分析——以泰安市为例

    张天宁;李文阳;董鹏程;毛衍伟;杨啸吟;罗欣;朱立贤;

    产志贺毒素大肠杆菌(STEC)是一类产生一种或一种以上志贺毒素的具有强致病能力的食源性病原菌,现已是威胁人类健康的重要公共卫生问题之一。本文以山东省泰安市为调查点,对商超和农贸市场零售肉中产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的污染情况进行调研,170份零售肉样品中9份样品检出STEC阳性,检出率为5.3%;其中商超和农贸市场的检出率分别为3.1%和6.7%,无显著性差异(P>0.05)。通过聚合酶链式反应(PCR)研究24株STEC分离菌株的血清型、毒力基因的携带情况。24株STEC中12株确定O血清型,分别为O26(10株)和O45(2株)。主要携带的毒力基因为stx1,hlyA(62.5%,15/24)和stx2(37.5%,9/24)基因,eaeA基因未检出。通过纸片扩散法对24株产志贺毒素大肠杆菌菌株进行耐药性检测,分离株对麦迪霉素的耐药率最高91.7%,对阿莫西林、氨苄西林的耐药率均为37.5%,对头孢西丁和多粘菌素敏感。综上所述,泰安市零售畜禽肉品中存在STEC不同程度的污染,其中猪肉、牛肉引起食源性疾病风险较大。本研究为相关部门加强市售肉品中STEC的监控提供一定的指导。

    2024年03期 v.32;No.159 119-127页 [查看摘要][在线阅读][下载 1411K]
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  • 2017—2020年华东地区猪源多杀性巴氏杆菌耐药性和PFGE分析

    宋强强;轩慧勇;朱维;魏建超;刘珂;邵东华;邱亚峰;马志永;李蓓蓓;夏利宁;

    为了解华东地区猪源多杀性巴氏杆菌的耐药情况及流行特征,本研究收集了2017—2020年华东地区分离的31株猪源多杀性巴氏杆菌,通过琼脂稀释法检测其对12种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法进行分子分型探求菌株亲缘关系。结果显示:31株猪源多杀性巴氏杆菌,对复方新诺明的耐药率最高(61.29%),其次为泰妙菌素(32.26%)、氟苯尼考(25.81%)、多西环素(12.90%)和大观霉素(3.23%)。所有菌株对头孢噻呋、庆大霉素、阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、恩诺沙星完全敏感;耐药谱型呈现多样化特点,31株猪源多杀性巴氏杆菌共表现为8种耐药谱型,其中有2株3药耐药菌株,耐药谱型分别为DOX+TIA+SPT和FFC+TIA+SXT;依据85%相似性标准可将其分为14个PFGE分型,其中A、G、H、J簇共有19株菌,占61.29%,并且PFGE分型相同的菌株耐药表型也高度相似。研究结果表明,华东地区猪源多杀性巴氏杆菌呈现耐药模式和PFGE分子分型多样化的特性,PFGE分型与耐药表型之间存在一定的相关性,应加强猪源多杀性巴氏杆菌的耐药性监测和流行性防控。

    2024年03期 v.32;No.159 128-133页 [查看摘要][在线阅读][下载 1435K]
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  • 2020年江苏地区鸭圆环病毒分子流行病学调查及分离方法的初步研究

    李子晗;林梦舟;吴双;杨静静;谢军;吴植;王海燕;朱善元;

    为了解2020年江苏地区鸭圆环病毒(DuCV)的流行情况、分子特性及探索其分离方法,通过采集江苏部分地区疑似患鸭圆环病的病、死鸭脏器组织,研磨后提取DNA,运用PCR技术扩增该病毒全基因组并测序,分析其分子流行病学特征,确定遗传谱系。将PCR检测阳性的组织病料上清经绒毛尿囊膜接种9日龄SPF鸭胚,分别收集鸭胚绒毛尿囊膜和尿囊液,以相同的方法将PCR检测阳性的尿囊膜/尿囊液进行鸭胚传代,尝试探索分离DuCV的方法。采集的23份样品中共检测出阳性样本10份。病毒基因组序列分析结果表明10株分离株均属于DuCV 1型的分支,传代结果表明多数样本在第1代绒毛尿囊膜和尿囊液样品中可检出DuCV,仅有部分样本在第2、3代的绒毛尿囊膜PCR检测结果呈阳性,传至第4代次时就检测不到病毒核酸。检测的结果一定程度上也表明绒毛尿囊膜检出率高于尿囊液。该结果为江苏地区该病的防控提供了一定的参考价值。

    2024年03期 v.32;No.159 134-140页 [查看摘要][在线阅读][下载 1514K]
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  • 2020年国内部分地区奶牛乳腺炎源大肠杆菌的分子流行病学调查

    买尔哈巴·吾斯曼;左佳坤;吕朝阳;蒋蔚;陈兆国;张秀萍;苗晋锋;陈伟;韩先干;

    本研究对来自国内11个地区136份乳腺炎乳样开展了大肠杆菌的生物学特性研究。通过大肠杆菌phoA特异性鉴定引物对乳房炎乳样进行大肠杆菌分离与鉴定,采用K-B法对分离株进行药敏检测。建立3体系三重PCR检测方法,利用大肠杆菌9种毒力基因对分离株进行检测。通过PCR检测chuA、yjaA和TspE4.C2,对分离株进行进化分群鉴定。结果显示:136份乳腺炎乳样中共分离到61株大肠杆菌,阳性率为44.85%。分离株对头孢拉定、氨苄西林、四环素耐药率相对较高,分别为37.70%、32.78%和26.22%。分离株中毒力基因ompA和traT携带率较高(98.36%和75.40%),其次为CNF1(54.09%)、irp2(47.54%)和iucD(32.78%),sitD和chuA携带率较少(14.75%和13.11%),但ST2和hlyA基因均未检出。分群结果显示分离株以A群占(67.21%)和B1群(19.67%)为主,D群(8.19%)和B2群(4.91%)较少。本研究为奶牛乳腺炎源大肠杆菌的防控提供数据参考。

    2024年03期 v.32;No.159 141-148页 [查看摘要][在线阅读][下载 1506K]
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  • 2013—2020年广西重点种鸡场禽白血病净化效果分析

    胡杰;尹彦文;温丽霞;粟艳琼;谢守玉;杨蓉;屈素洁;施开创;

    按照检测-淘汰-分群-再检测-再淘汰的原则,建立“生物安全+病原监测+淘汰”模式对2013—2020年广西11家重点种鸡场的种公鸡、种母鸡、育成鸡和雏鸡采集精液、蛋清、泄殖腔拭子、胎粪等样品进行禽白血病病原检测;公鸡和母鸡同时采集血浆蛋白进行禽白血病病毒(ALV)分离。通过多方式联合净化禽白血病,ALV阳性率逐年下降,净化效果非常显著。其中公鸡精液中ALV阳性率由2013年的7.45%下降到2020年的0.14%,母鸡蛋清样本ALV阳性率由2013年12.32%下降到2020年0.23%,雏鸡胎粪ALV阳性率由2018年3.60%下降到2020年0.47%。公鸡血浆蛋白病毒检出率由2013年的3.46%下降到2020年的0.78%,母鸡血浆蛋白病毒检出率由2013年的2.22%下降到2020年的0.20%。可以看出ALV净化效果非常显著,说明所建立的禽白血病净化方法在广西行之有效。

    2024年03期 v.32;No.159 149-153页 [查看摘要][在线阅读][下载 1411K]
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  • 山羊NPC1基因核心启动子鉴定与转录调控分析

    李崇瑞;陈思;翟哲;王雪梅;吴艳茹;刘志勇;蒋俊明;满初日嘎;杜丽;王凤阳;

    NPC1基因编码的C型尼曼匹克蛋白1(NPC1)参与脂筏形成、病原微生物内吞以及内吞体的胞内转运等过程。本试验旨在阐明海南黑山羊NPC1基因的转录调控机制,为研究病原微生物与宿主细胞互作提供理论参考。首先,以山羊NPC1基因1466 bp启动子序列为模板,构建9个启动子5'端连续缺失的双荧光素酶报告载体,筛选NPC1基因核心启动子区;继而对核心启动子区的关键转录因子进行预测分析,构建转录因子结合位点缺失的双荧光素酶报告载体,筛选NPC1基因的关键转录因子结合位点。结果表明:山羊NPC1基因的核心启动子区位于转录起始位点上游-195 bp至-60 bp,并且该区域存在E2F3(-134/-120 bp)、SREBP-1(-107/-96 bp)、SP1(-68/-62 bp)等多个转录因子结合位点。双荧光素酶报告实验结果表明,缺失E2F3、SREBP-1、SP1三个转录因子结合位点均会使山羊NPC1基因启动子的转录活性显著下降(P<0.01),且缺失SREBP-1结合位点后NPC1基因转录活性下降最显著。提示,SREBP-1转录因子对海南黑山羊NPC1基因转录活性具有重要的调控作用。本试验成功鉴定山羊NPC1基因的核心启动子区(-195/-60 bp)及该区域的关键转录因子结合位点SREBP-1,为进一步研究山羊NPC1基因介导病原微生物与宿主互作分子机制提供理论基础。

    2024年03期 v.32;No.159 154-163页 [查看摘要][在线阅读][下载 1702K]
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简报

  • 甘肃某牛场隐孢子虫引起犊牛腹泻的虫种鉴定及亚型分析

    马忠;马燕玲;张继维;马玉珍;王树青;徐万祥;王春梅;王铭;

    新生犊牛腹泻(NCD)严重影响犊牛的健康,给养殖业造成巨大的经济损失。隐孢子虫病是引起NCD的重要原因之一,但是由隐孢子虫引起的NCD疾病暴发的报道还非常少。2022年9月,甘肃省武威市某奶牛场1月龄以内犊牛发生严重腹泻,并伴有部分犊牛死亡。为弄清犊牛腹泻是否由隐孢子虫引起,本研究对该牛场1月龄以内腹泻和非腹泻犊牛分别采集10份样品,应用显微镜检和套氏PCR方法对犊牛粪便样品进行了检测。结果显示,应用显微镜检方法检出10份隐孢子虫阳性样品;应用PCR方法检出14份阳性样品,包括8份腹泻样品和6份非腹泻样品。PCR方法隐孢子虫总的感染率为70.0%,其中腹泻犊牛的感染率为80.0%,非腹泻犊牛的感染率为60.0%。对所有PCR阳性样品进行测序分析,均为微小隐孢子虫。进一步对14份C.parvum阳性样品进行gp60基因扩增和亚型鉴定,13份样品测序成功,均为IIdA19G1亚型。本研究首次在甘肃省发现隐孢子虫引起犊牛腹泻的暴发,研究结果对深入了解该地区犊牛腹泻的病因,做好腹泻疾病的精准防控具有重要意义。

    2024年03期 v.32;No.159 164-172页 [查看摘要][在线阅读][下载 1994K]
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  • 赛鸽圆环病毒天津株全基因组的扩增和序列分析

    王志悦;李欣蕊;孙嘉咛;王许刚;王瑞;李春红;徐明举;张瑞华;徐彤;

    本研究利用PCR从有腹泻症状的鸽中检测到圆环病毒,进一步进行了全基因组扩增。基因组序列分析表明该基因组长度为2032 bp,编码5个开放阅读框(ORFs),5'端和3'端各存在一个基因间隔区。该基因组序列与已登录的中国、澳大利亚、日本、波兰、比利时和巴西的PiCV基因序列同源性为81.5%~97.7%。全基因组系统发育分析显示,54个序列(53个参考PiCV基因组序列和1个本研究PiCV基因组序列)可分为6个分支(A、B、C、D、E和F),本研究分离毒株位于B支,与来自比利时(DQ915957和DQ915958)、中国(KX108826、KX108805、KX108825、KJ704802 和 KJ704806)的分离株亲缘关系密切。Simplot重组分析结果显示Rep ORFs包含多个重组热点,表明我国鸽圆环病毒存在遗传多样性。

    2024年03期 v.32;No.159 173-177页 [查看摘要][在线阅读][下载 1521K]
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  • 猪肠病毒G型部分VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

    边金妮;黄诗婷;许佳乐;米雪;王奕斐;杜琛;陈樱;韦祖樟;黄伟坚;欧阳康;

    本研究扩增猪肠病毒G型(EV-G)的部分VP1基因,将其克隆至原核表达载体,并对其进行诱导表达,获得重组蛋白并制备多克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验,免疫印迹试验和间接免疫荧光试验对其进行验证。结果表明,本研究制备的兔抗EV-G-VP1多克隆抗体具有良好的免疫原性和反应性,可以特异性识别EV-G感染Marc-145细胞表达的VP1蛋白,为猪肠病毒G型免疫学检测方法的建立提供良好的生物学材料。

    2024年03期 v.32;No.159 178-182页 [查看摘要][在线阅读][下载 1482K]
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综述

  • 四种杯状病毒调控宿主免疫类细胞因子表达的研究进展

    杨洪早;朱杰;缪秋红;汤傲星;陈少宇;袁莉刚;刘光清;

    杯状病毒科(Caliciviridae)为无囊膜的单股正链RNA病毒,包含许多对人类和动物健康带来严重威胁的病毒成员。由于该病毒科的大部分成员均不能在体外进行有效增殖,导致杯状病毒的研究相对滞后,虽然已取得了一些重要的进展,但还存在诸多问题亟待解决。基于此,本文综述了目前已证实的人诺如病毒(HuNoV)、鼠诺如病毒(MNV)、猫杯状病毒(FCV)和兔出血症病毒(RHDV)四种常见杯状病毒感染机体后干扰素、白介素、肿瘤坏死因子等免疫类细胞因子的表达水平及其作用机制,以了解免疫类细胞因子与杯状病毒感染的关系。为探讨病毒与宿主免疫系统之间的相互作用机制提供新思路。

    2024年03期 v.32;No.159 183-192页 [查看摘要][在线阅读][下载 1899K]
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  • miRNA在寄生虫与宿主协同进化中的作用

    魏秀秀;吴志豪;黄强;

    miRNA为非编码小RNA,通过RNA干扰的方式对基因表达进行调控。宿主和寄生虫之间的互作是一个复杂有趣,并且有特异性的协同进化过程。对于寄生虫来讲,寄生虫释放的一些miRNA为其在宿主体内繁殖起到重要作用,而一些宿主也可以通过miRNA靶向寄生虫基因,从而抵御寄生虫的入侵。miRNA参与到宿主和寄生虫体内的免疫调节、基因调控等过程,甚至可能在寄生致病机理、寄生特异性及共适应过程中发挥重要作用。研究寄生虫与宿主之间miRNA的互作,对于解析宿主抗性、寄生虫的毒性及传染性,以及协同进化过程中的平衡状态具有重要的研究意义。

    2024年03期 v.32;No.159 193-199页 [查看摘要][在线阅读][下载 1406K]
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  • 猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白的研究进展

    苏朗驹;黄宗洋;黄俊;张琬玓;孙敬帅;叶曼青;李智丽;

    猪流行性腹泻病毒(PEDV)是猪流行性腹泻(PED)的病原,PEDV可导致猪的急性腹泻、脱水甚至死亡。PEDV最早在1971年被报道,如今,它已成为引起仔猪腹泻的最常见病原体之一,对我国养猪行业造成极大的经济损失。核衣壳(N)蛋白是PEDV主要的结构蛋白质之一。本文对PEDV N蛋白的核定位信号、生理功能、与宿主细胞互作和检测方法四个方面的研究进展综述,以期能对N蛋白的了解更够更加深入,并为PED防控提供参考作用。

    2024年03期 v.32;No.159 200-208页 [查看摘要][在线阅读][下载 1340K]
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  • 阿卡斑病研究进展

    李运娜;黄海碧;徐大伟;戴晓光;马立峰;包和平;王建龙;徐晓静;

    阿卡斑病是一种重要的牛、羊虫媒性传染病,由阿卡斑病毒感染所致,该病可引起怀孕母畜的流产、早产,胎儿的脑脊髓炎、先天性关节弯曲-积水性无脑综合征。在许多国家都有该病暴发的相关报道,该病引起的流产风暴给养殖业带来巨大经济损失,影响了养殖业的健康发展。由于其分布范围广、危害性大、是国际动物贸易中重要检疫疫病之一。本文对阿卡斑病的病原学、流行病学、临床症状、诊断方法进行论述,以期为预防控制阿卡斑病提供参考。

    2024年03期 v.32;No.159 209-215页 [查看摘要][在线阅读][下载 1382K]
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  • 猪圆环病毒3型研究进展

    王国超;吴奇强;刘慧;裴党帅;白鸽;罗建勋;

    猪圆环病毒是引起猪群圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,其中猪圆环病毒3型是近年来新发现危害生猪产业又一重要血清型,已在世界范围内广泛流行传播。流行病学调查发现,在我国多个省区也是存在该病的流行,并且有较高的感染率,给生猪产业以及相关领域带来潜在的经济损失,引起各方关注。本文主要从猪圆环病毒3型的病原学、流行病学、检测技术及防控进行了综述,以期为该病毒的后续研究提供参考。

    2024年03期 v.32;No.159 216-220页 [查看摘要][在线阅读][下载 1373K]
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  • 羊巴贝斯虫病流行病学的研究进展

    顾月月;薄震宇;刘欣超;郑克雷;李惠虹;周金星;靳二辉;李文超;胡忠泽;顾有方;

    羊巴贝斯虫病是一种由硬蜱传播的血液原虫病,呈全球性分布,主要临床症状为发热、四肢无力、贫血、腹泻、反刍减弱、厌食、精神不振、虚弱等,严重可导致死亡。本文阐述了巴贝斯虫病病原的种类,并对感染羊的莫氏巴贝斯虫、绵羊巴贝斯虫、粗糙巴贝斯虫、泰氏巴贝斯虫和叶状巴贝斯虫的流行病学情况进行了总结,为羊巴贝斯虫病的防控提供一定的依据。

    2024年03期 v.32;No.159 221-226页 [查看摘要][在线阅读][下载 1381K]
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  • 城市宠物源细菌耐药性研究进展

    吴雨珊;孙冰清;姜芹;张妤;顾欣;张文刚;

    随着宠物抗菌药物使用量的逐年增多,宠物源细菌耐药水平不断攀升。本文就国内外宠物源细菌耐药性危害、宠物源大肠埃希菌、肠球菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌等的耐药性进行综述,并针对我国宠物源耐药性现状,提出应建立宠物源细菌耐药性监测体系,分析宠物源细菌耐药性变化及趋势,加强宠物用抗菌药物的使用管理与统计,加强科学养宠与科学用药的宣传教育等应对措施,为遏制动物源细菌耐药性问题提供参考。

    2024年03期 v.32;No.159 227-236页 [查看摘要][在线阅读][下载 1396K]
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