- 魏无缺;黄惠兰;陆泳锟;刘梦凡;陈作鑫;赵梓桥;许芬芬;梅堃;黄淑坚;
广东肇庆某养殖场22日龄樱桃谷鸭表现短嘴、腹泻和生长停滞，为进一步明确病因，将病鸭的肝脏和脾脏组织经无菌处理后，接种9日龄樱桃谷鸭胚连续传代培养，分离获得1株病毒，命名为GDZQ297，第5代次病毒滴度达10~2 ELD_(50)/0.2mL。经PCR鉴定和基因遗传演化分析，发现GDZQ297株与HN1P株(MK737642)同属一个分支，为新型鹅细小病毒(NGPV)。为探究新型鹅细小病毒对雏番鸭的易感性和致病力，本研究以GDZQ297分离株(2.7 lgELD_(50)/只)人工感染1日龄雏番鸭(MDPV、GPV抗体检测为阴性)，攻毒后观察20天，重点关注雏鸭感染后发病情况、排毒动态以及多个组织脏器病毒载量变化。结果显示，20天攻毒期内感染GDZQ297株雏番鸭，临床症状主要表现为发育迟缓、腹泻、喙萎缩、舌外伸和腿骨变短，耐过鸭的体重约为正常鸭的74%，攻毒期间内未出现死亡(30/30)。病理解剖主要呈现出感染鸭的口腔、泄殖腔以及多个组织脏器可检测出的病毒载量均为10~3拷贝/μL以上，心脏和脾脏在感染后14 d达到10~7拷贝/μL以上。本研究为新型鹅细小病毒诊断和检测提供参考。
2025年05期 v.33;No.167 1-10页 [查看摘要][在线阅读][下载 1965K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：385 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 赖虹桥;朱恒志;李娜;宋京泽;李子轩;向增豪;解建平;温立斌;何孔旺;牛家强;肖琦;
为明确从猪场流行疫情多血清型猪链球菌(SS)混合感染的病死猪中分离到的猪链球菌3型(SS3)、4型(SS4)、7型(SS7)和9型(SS9)菌株的生物学特性及致病性，本研究以江苏某规模猪场某次急性流行疫情中13头病死仔猪的肺组织和血液样品为材料，通过细菌分离纯化、SS-PCR和血清分型PCR鉴定、革兰氏染色、生化试验、MLST型鉴定、药敏试验、耐药及毒力基因检测及小鼠致病性试验等开展系统研究。结果显示，在13头病死猪的SS-PCR检测中，有12头肺组织为阳性，8头全血为阳性；SS血清型分型PCR共检出SS3、SS4、SS7、SS9、SS31共5种血清型及1种未知血清型；并且6头病死猪存在SS多血清型混合感染，其中2头为4种血清型混合感染(5号猪肺组织检出SS3、SS7、SS9和SS31，7号猪全血检出SS3、SS4、SS7及SS9)；成功分离获得6株纯菌，选取4株有代表性的不同血清型菌株(均分离自4血清型混合感染猪)进行后续分析。4株分离菌均为革兰氏阳性链状球菌，生化特性符合SS典型特征；ST型分别属于ST117(SS3 ZJ)、ST17(SS4 ZJ)、ST373(SS7 ZJ)和ST243(SS9 ZJ)。药敏试验结果显示，4株分离菌均对β-内酰胺类(氨苄西林等)、糖肽类(万古霉素)敏感，但均呈现多重耐药，SS3 ZJ、SS7 ZJ和SS9 ZJ为四重耐药，SS4 ZJ为五重耐药，耐药谱涵盖大环内酯类、四环素类、林可酰胺类等；所有菌株均携带耐药基因erm(B)，SS3 ZJ、SS7 ZJ和SS9 ZJ还携带tet(O)，SS4携带tet(M)和aac(6')-aph(2'')，耐药基因与耐药表型完全匹配。毒力基因检测结果显示，4株分离菌均携带gapdh、ccp A、srt A、orf 2毒力基因，SS4 ZJ、SS7 ZJ额外携带sly，SS9 ZJ携带fbps。4株分离菌腹腔接种均能致BALB/c小鼠死亡，半数致死量(LD_(50))为1.18×10~7 CFU/mL～2.46×10~8 CFU/mL，且均能从感染死亡小鼠脑等组织中成功回收到攻毒菌株。病理切片显示，感染小鼠存在肝脏充血、脾脏淋巴细胞减少、肺脏出血等病变，部分菌株还引发心肌溶解或脑炎。本研究明确了多血清型混合感染场景下猪链球菌3型、4型、7型、9型的主要生物学特征和致病特性，为临床防控及合理用药提供科学依据。
2025年05期 v.33;No.167 11-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 1583K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：143 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 邱存义;杨业民;张静雅;李颖;吕妮;王兴龙;周业飞;马永华;王玉龙;
为了解宁夏地区PED疫情的流行情况及为研发适配流行毒株的PEDV疫苗奠定基础，本研究对宁夏中卫某规模化猪场送测的疑似PEDV阳性样本进行RT-PCR检测，利用Vero细胞对确诊阳性的仔猪肠道组织病料进行PEDV的分离鉴定，对成功分离的PEDV毒株进行S基因系统进化分析和动物回归试验。结果显示：病料处理液在Vero细胞上盲传5代后成功分离出具有典型合胞体病变的病毒；RT-PCR、Western blot、IFA均证实分离毒株为PEDV，将其命名为PEDV-NX-2022；基于全长S基因的系统进化分析结果表明，PEDV-NX-2022株为GⅡb型流行毒株；同源性分析结果表明，在所有参与对比的35株毒株中，与2014年分离的GⅡb型毒株YC-2014(KU252649.1)同源性最高，为98.22%，与GⅠa型的毒株SM98(GU937797.1)同源性最低，为92.03%，此外，与经典毒株CV777(LT906620.1)的同源性为93.06%；仔猪感染试验结果显示，PEDV-NX-2022株为高致病性毒株，口服攻毒18 h内即可引起4日龄仔猪出现严重的水样腹泻和呕吐等症状。上述结果表明，PEDV-NX-2022株为GⅡb型高致病性流行毒株，可用于适配当前中国流行毒株的PEDV疫苗的研发。
2025年05期 v.33;No.167 21-31页 [查看摘要][在线阅读][下载 1954K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：896 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 刘瑞琳;黄世静;于家荣;蒋霁捷;朱钧锐;孙祁;姜一峰;高飞;童武;童光志;温永俊;周艳君;
2022年末上海某猪场保育猪群出现持续发热等临床症状，为了确定该猪群的发病原因，本研究采集了发病猪临床样品进行了病原检测，结果显示，12份样品中有11份呈PRRSV阳性，并利用Marc-145细胞分离获得了1株病毒，经过RT-PCR和IFA等鉴定，证实该毒株为PRRSV，将其命名为SH1/2022。对分离株SH1/2022进行全基因组测序和分析，结果显示，该毒株基因组全长为15 317 bp(不含poly A)，与HP-PRRSV-like亲缘关系较近。重组分析结果表明，分离株SH1/2022是以谱系8的HP-PRRSV-like作为亲本毒株和谱系5的RespPRRS MLV疫苗毒株作为次要亲本毒株，发生谱系间重组而产生的毒株，基因组中含有两个重组断点nt9460和nt11398，分别位于Nsp9和Nsp11基因区域。我们推测造成该养猪场发病的原因可能是由谱系间毒株发生重组所致，提示该重组毒株仍然具有一定的致病性，有必要持续监测养猪场中PRRSV的流行动态。
2025年05期 v.33;No.167 32-40页 [查看摘要][在线阅读][下载 1650K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：434 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 马莉莉;王琼娴;王晓丽;马孙婷;吕立新;徐彬;冯志新;欧阳伟;
噬菌体MS2 VLP(噬菌体病毒样颗粒)是不含病毒遗传物质的纳米颗粒，可以自组装成一个二十面体衣壳，适合靶向传递RNA。本研究利用Bac-to-Bac系统(杆状病毒表达系统)生产MS2 VLP包裹的eGFP mRNA。分别设计、合成MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框，将MS2 VLP的表达框和eGFP mRNA的表达框同时插入pFastBac Dual载体中，获得重组供体质粒pFastBacDual-MS2-eGFP mRNA。转化DH10Bac感受态，通过三抗和蓝白斑(卡拉霉素/庆大霉素/四环素/IPTG/X-Gal)筛选以及PCR鉴定，获得重组的rBacmid-MS2-eGFP mRNA。将rBacmid-MS2-eGFP mRNA转染sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒vBacmid-MS2-eGFP mRNA。通过倒置荧光显微镜观察及Western blot检测表明eGFP获得表达。用vBacmid-MS2-eGFP mRNA感染High 5悬浮细胞进行MS2-eGFP mRNA的大量表达，经超速离心纯化，电镜观察可见大量的直径约30 nm的病毒样颗粒(VLP)。提取纯化的MS2 VLP中包裹的mRNA，通过RT-PCR及测序鉴定，结果表明MS2 VLP中包裹的mRNA为eGFP mRNA。将MS2-eGFP mRNA免疫BALB/c小鼠，进行免疫原性研究，通过ELISA测得的抗体效价为1:819 200，表明MS2-eGFP mRNA可以刺激小鼠产生较强的抗原特异性抗体应答。以上结果表明，利用杆状病毒Bac-to-Bac表达系统生产的MS2 VLP可以包裹外源mRNA，并可将外源mRNA递送到小鼠体内产生特异性体液免疫反应。本研究建立了基于杆状病毒Bac-to-Bac表达系统的VLP递送mRNA疫苗研究平台，为今后动物传染病的mRNA疫苗研发提供新的参考。
2025年05期 v.33;No.167 41-50页 [查看摘要][在线阅读][下载 1503K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：430 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 王致远;蒲德粉;陈盛峰;陈果;王威威;韦平;何秀苗;
探究聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)作为IBDV-VP2核酸疫苗递送载体的潜力。通过复乳溶剂挥发法制备阳离子PLGA微球，用扫描电镜观察其形态。检测阳离子PLGA微球的细胞毒性、对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力及淋巴细胞增殖能力的影响，以及阳离子PLGA微球吸附IBDV DNA疫苗的能力、吸附后在体外的完整性和释放情况。通过动物实验检测微球疫苗的免疫效果。本研究制备的阳离子PLGA微球平均粒径为1～5 μm，对正常生长的Vero细胞无毒性作用，且能够促进巨噬细胞的吞噬作用和B、T淋巴细胞的增殖；该微球吸附IBDV DNA疫苗后8 h达到平衡，且DNA保持完整的结构和功能；使用IBDV阳离子PLGA微球DNA疫苗免疫14日龄三黄鸡，试验鸡35日龄时的IBDV抗体水平达到峰值，并且高于裸DNA疫苗组。阳离子PLGA微球作为IBDV-DNA疫苗的载体可以激发雏鸡产生较高水平的IBDV抗体，且抗体持续时间较长，本研究的结果将为IBDV微球核酸疫苗的研发提供依据。
2025年05期 v.33;No.167 51-59页 [查看摘要][在线阅读][下载 1488K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：1 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 季桂梅;周勇志;曹杰;王亚楠;张厚双;夏宣保;周金林;
蜱是一种常见的吸血寄生虫和病原传播媒介，主要依赖化学杀虫剂进行防治，但易造成环境污染、抗药性等问题，急需开发新型绿色防控产品。植物精油是天然的植物次生代谢物，具有良好的抗病虫害作用，但有易挥发、低水溶性等缺点。为了研制植物源绿色蜱的驱避产品，本研究报道了通过纳米级乳化体系制备了中国肉桂油纳米乳液，可以明显改善精油的水溶性、稳定性，并比较了肉桂油和它的纳米乳液对长角血蜱的驱避作用，发现肉桂油纳米乳液有更显著驱避效果，表明纳米乳液是一种有效的植物精油制剂方式。
2025年05期 v.33;No.167 60-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 1656K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：792 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 刘兵;
为了建立一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体检测方法，本研究对IBRV gD蛋白进行原核表达，以表达蛋白为包被抗原建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。结果显示：gD基因PCR扩增产物约945 bp，构建原核表达载体pET30a-gD，经IPTG诱导表达，Western blot检测显示重组蛋白具有良好的反应活性，以纯化蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)阳性血清均为阴性，检测IBRV阳性血清的最低抗体检出效价为1∶12 800，与病毒中和试验方法的符合率为96.15%，批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和8%，检测825份免疫疫苗牛血清样品和514份未免疫疫苗牛血清样品的阳性率分别为90.67%和7.39%。本研究建立的间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性、准确性、重复性，为IBRV的临床诊断、流行病学调查、免疫抗体监测、疫苗免疫效果评价等提供了一种简单快速的血清学检测方法。
2025年05期 v.33;No.167 68-75页 [查看摘要][在线阅读][下载 1341K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：482 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 胡一帆;陈玲超;王安铖;李俊波;孟鑫;童武;单同领;于海;孔宁;童光志;郑浩;
以非洲猪瘟病毒(ASFV) p30、p54和pK205R蛋白作为检测线，以兔IgG作为质控线，利用葡萄球菌A蛋白(SPA)和乳胶微球偶联作为免疫探针，建立ASFV抗体检测乳胶微球免疫层析方法。用该方法检测非洲猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪德尔塔冠状病毒、猪瘟病毒和猪流感病毒阳性血清。结果显示：除了ASFV阳性血清检测结果为阳性外，其他阳性血清检测结果均为阴性，未发生交叉反应，表明抗体检测试纸条具有较强的特异性；将ASFV阳性血清倍比稀释用于检测试纸条的敏感性，结果显示p30抗体检测试纸条的检出限为1:51 200，pK205R抗体检测试纸条的检出限为1:12 800，p54抗体检测试纸条的检出限为1:6400，表明3种抗体检测试纸条具有较高的灵敏度；分别用ASFV抗体检测试纸条和商品化ASFV阻断ELISA抗体检测试剂盒对63份临床猪血清样品进行检测，结果显示p30抗体检测试纸条的符合率为96.8%，p54和pK205R抗体检测试纸条的符合率为100%；将室温存放3个月的抗体检测试纸条取出检测血清样品，结果显示不同保存时间段内的试纸条特异性、敏感性和均一性一致，表明ASFV抗体检测试纸条具有良好的稳定性与重复性。本研究建立的ASFV抗体检测试纸条具有良好的特异性、敏感性及重复性，并且操作简便，可以用于猪场现场检测。
2025年05期 v.33;No.167 76-86页 [查看摘要][在线阅读][下载 1611K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：502 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 夏炉明;卢军;王建;刘健;龚国华;朱晓英;吴秀娟;李增强;杨显超;陈伟锋;杨德全;常晓静;白艺兰;赵洪进;
本研究旨在构建适用于上海市的犬只狂犬病防控措施评价指标体系，为狂犬病科学防控与净化提供路径支持。通过文献回顾与研究小组讨论，初步建立评价指标条目池，邀请13位相关领域专家开展两轮德尔菲法咨询。依据专家对指标重要性赋分，筛选并确立最终评价指标体系及其权重。两轮专家咨询的应答率分别为75%和100%，权威系数分别为(0.83±0.06)和(0.82±0.07)。第二轮德尔菲法评议各评价指标的变异系数小于0.25，Kendall协调系数为0.58(X=179.78，P<0.01)。筛选出4项核心指标，包括“对流浪犬进行抓捕和收容”“采取措施提高农村犬免疫密度”“采用口服疫苗免疫流浪犬”“发生犬伤多人(>2)时报告渠道畅通”。结果表明，德尔菲法可有效构建科学、实用的狂犬病防控措施评价指标体系，对提升上海市犬只狂犬病综合防控能力具有重要指导意义。
2025年05期 v.33;No.167 87-93页 [查看摘要][在线阅读][下载 1324K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：402 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 蔡鑫;姚晓慧;聂万森;杜汉宇;周黎笋;李宗杰;魏建超;刘珂;邵东华;邱亚峰;马志永;李蓓蓓;夏利宁;
基于细菌青霉素结合蛋白(PBP)与碳青霉烯药物完整结构和水解产物的亲和力差异极大的原理，建立一种新型的筛选碳青霉烯酶NDM-1抑制剂的ELISA方法。BSA与美罗培南的偶联物(BSA-MEM)包被于ELISA板封闭后，将待筛化合物与NDM-1蛋白同时加入反应，随后加入生物素标记的PBP蛋白(PBP-BIO)，PBP-BIO可与未被水解的BSA-MEM进行结合，通过生物素-链霉亲和素系统产生的信号来表征结合的PBP蛋白以及未被水解的BSA-MEM的量，从而间接指征待筛化合物对NDM-1是否有抑制活性。通过原核表达系统，表达纯化碳青霉烯酶NDM-1，利用EDC偶联法和生物素标记法，制备BSA-MEM和PBP-BIO的偶联物，采用棋盘滴定法确定BSA-MEM量、NDM-1、待筛化合物和PBP-BIO的最佳工作浓度和反应时间等参数，并利用该方法对FDA批准药物库中的300余种化合物进行初步筛选。结果显示，最佳ELISA方案为：BSA-MEM偶联物包被量为1 μg、100 μL/孔；封闭液为1%的牛血清白蛋白，作用时间为2 h；NDM-1使用量为4 μg；待筛化合物的使用浓度为30 μmol/L，反应时间为15 min；PBP-BIO稀释度为1:1000，反应时间为15 min；SA-HRP作用时间为30 min，稀释度为1:3000；TMB显色时间为15 min。利用上述建立的ELISA方法，成功从FDA批准药物库中筛选到两个潜在的NDM-1抑制剂。本研究成功建立了一种新型的NDM-1抑制剂的ELISA筛选方法，具有快速和高通量的优点，为NDM-1抑制剂的筛选提供了新方法和新思路。
2025年05期 v.33;No.167 94-100页 [查看摘要][在线阅读][下载 1437K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：125 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 施远国;陈泓锦;马晟童;蔡良语;李汉锐;孙洁;刘建利;曾少灵;郑晓聪;娄华;秦智锋;李惠芳;何庆华;
通过消毒剂杀灭病毒并完全降解病毒核酸，对阻断疫病传播和避免对荧光定量PCR检测造成假阳性干扰至关重要。本研究以圆环病毒2型(PCV2)阳性血液样本为研究对象，对一种自制消毒剂(核毒清)和6种市售消毒剂的病毒核酸降解作用进行了评估。核毒清的最佳稀释度为1:100，可在10 min内完全降解病毒核酸。稀释液可在10 min内完全降解PCV2病毒核酸PCR产物。核毒清可降解血液、尿囊液、粪便等基质中的核酸，对粪便中猪流行性腹泻病毒(PEDV)核酸有效降解时间为10 min，二元包装有效期可达1年以上。对PEDV阳性猪场的应用研究表明核毒清核酸降解效果良好。这些结果表明，核毒清具有良好的病毒杀灭和病毒核酸降解作用。
2025年05期 v.33;No.167 101-107页 [查看摘要][在线阅读][下载 1596K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 张维谊;丰东升;龚海燕;马颖清;王霞;王敏;
硝基咪唑类化合物可被广泛用于畜禽寄生虫病、厌氧菌感染等治疗，但规定，不得在动物性食品中检出。目前，国家标准中的检测范围不包括鸡蛋，且标准方法步骤繁琐、消耗大、耗时长，因此亟需建立一种适用于鸡蛋中硝基咪唑类药物的快速、简单、高效的检测方法。本研究建立了PRiME HLB固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法以测定鸡蛋中甲硝唑、地美硝唑及其代谢物残留量。组织样品经90%乙腈水溶液提取，PRiME HLB固相萃取柱净化，Waters HSS T3色谱柱分离，超高效液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。方法检出限为0.5 μg/kg，定量限为1.0 μg/kg。甲硝唑、地美硝唑及其代谢物在2.5～125 μg/L范围内线性良好(r~2>0.9994)，加标回收率为85.3%～110.0%，批内RSDs为1.1%～7.9%、批间RSDs为2.1%～8.8%，均符合相关要求。本方法操作简便、快速、准确度和灵敏度高，可用于鸡蛋中甲硝唑、地美硝唑及其代谢物残留量的定量测定。
2025年05期 v.33;No.167 108-115页 [查看摘要][在线阅读][下载 1738K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 吴海燕;王子涵;刘英楠;陈宗艳;刘静宜;陈鸿军;
非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的pS273R在病毒粒子组装与调控宿主中发挥重要作用。本研究将Flag-S273R重组质粒转染HEK-293T细胞，成功表达pS273R蛋白酶，并且获得pS273R在HEK-293T细胞上的表达时相。利用实验室前期构建的底物系统初步验证了pS273R对底物的水解特性。通过比较转染Flag-S273R野生型重组质粒和Flag-S273R-Mut催化位点突变型质粒的结果发现，一定剂量的pS273R会影响细胞周期，且这一影响与酶活性有关。此外，增加Flag-S273R重组质粒的转染量会导致细胞死亡。本研究为进一步探索ASFV pS273R与宿主互作的分子机制研究提供参考。
2025年05期 v.33;No.167 116-121页 [查看摘要][在线阅读][下载 1719K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：166 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 黄心钰;张俊生;卢军;张淼湘;林宏文;黄小武;焦培荣;郭剑英;
本研究克隆鸡TRIM32(ChTRIM32)基因序列，分析其基因序列及其与不同物种TRIM32基因的同源性和遗传演化关系，预测其结构域及蛋白质二级结构，表达鸡TRIM32蛋白，并探究鸡TRIM32在天然免疫信号通路中的作用。试验结果表明：鸡TRIM32基因开放阅读框为1944 bp，编码647个氨基酸，其蛋白质分子质量约为71.84 kDa；鸡TRIM32蛋白包含1个N端RING-HC结构域、1个B-box1结构域和6个重复的C端NHL结构；鸡TRIM32与火鸡、美洲雕、天鹅、枭鹦、鸿雁、绿头鸭、野猪、人、家鼠、狗、水牛、斑马鱼TRIM32的氨基酸序列同源性分别为97.2%、92.6%、91.9%、91.7%、91.6%、88.8%、75.0%、74.8%、74.7%、74.2%、74.0%、63.9%；鸡TRIM32与其他鸟类TRIM32的亲缘关系最近，与哺乳动物TRIM32的亲缘关系较远，与鱼类TRIM32的亲缘关系最远；鸡TRIM32蛋白质二级结构包含无规则卷曲（38.64%）、α-螺旋（29.37%）、延伸链（22.87%）、β-转角（9.12%）；构建pCAGGS-ChTRIM32真核表达质粒；H5N1亚型禽流感病毒（DK212株）感染DF1细胞后，鸡TRIM32基因及其他抗病毒基因（IFN-β、IL-6、OAS、Mx）表达水平上调；过表达鸡TRIM32能增强鸡STING对IFN-β启动子的激活作用。本文成功鉴定并克隆了鸡TRIM32基因，预测了鸡TRIM32蛋白的结构域与二级结构，并研究了鸡TRIM32在天然免疫信号通路中的功能，为进一步探究鸡TRIM32在鸡抗病毒天然免疫信号通路中的作用奠定了基础。
2025年05期 v.33;No.167 122-129页 [查看摘要][在线阅读][下载 1661K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 王陈君;郭旺;吴慧显;崔恒宓;柴文娴;胡序明;
巨噬细胞是机体天然免疫的重要组成部分，最新研究发现内源性反转录病毒产生的转录物(如非编码RNA)在巨噬细胞抵抗病毒感染的过程中发挥着重要作用。前期研究发现鸡内源性反转录病毒ALVE衍生的env转录物受到ALV-J感染调控，但ALVE env转录物在鸡巨噬细胞中是否具有抗ALV-J功能及其作用机制目前尚不清楚。本文首先通过定量PCR、Western blot、ELISA和TCID_(50)实验检测ALVE env转录物过表达对ALV-J感染复制影响，结果发现ALVE env转录物显著抑制ALV-J在鸡巨噬细胞HD11中的感染复制水平。为了进一步明确ALVE env转录物的抗ALV-J能力，通过干扰实验发现降低ALVE env转录物表达会显著促进ALV-J在HD11细胞中的感染复制水平。机制上，ALVE env转录物通过调控抗病毒免疫基因表达来干扰ALV-J感染复制。过表达ALVE env转录物显著上调dsRNA识别受体基因(MARCO、TLR3和IFIH1)和I型干扰素基因(IFN-α和IFN-β)在HD11细胞中表达；相反，干扰ALVE env转录物会抑制这些抗病毒免疫基因的表达。本研究揭示了鸡内源性反转录病毒衍生的env转录物在巨噬细胞中的抗病毒作用机制，为解析鸡内源性反转录病毒在家禽抗病毒免疫中的生物学功能以及家禽抗病育种研究提供理论基础和参考依据。
2025年05期 v.33;No.167 130-135页 [查看摘要][在线阅读][下载 1485K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 曹旭东;桑建君;孟宪臣;姜文杰;赵喆泓;谢泉;李拓凡;邵红霞;钱琨;秦爱建;叶建强;万志敏;
为研制抗H6禽流感病毒HA蛋白单克隆抗体，本研究利用小鼠适应毒株E-Teal/417(MA E-Teal/417)H6禽流感病毒免疫BALB/c小鼠，利用小鼠杂交瘤细胞技术，经间接免疫荧光试验(IFA)和血凝抑制(HI)试验等方法筛选和亚克隆，获得4株没有HI效价的单克隆抗体，分别命名为1D4、4A7、4G2和5E9。IFA结果表明，4株单克隆抗体均能识别转染pDP2002-HA(MA E-Teal/417)质粒的293T细胞中表达的HA蛋白。Western blot试验表明，单克隆抗体4G2和5E9能识别感染MAE-Teal/417病毒的MDCK细胞中表达的HA蛋白。中和试验结果发现，单克隆抗体1D4、4A7和4G2具有一定的体外中和活性，抑制MAE-Teal/417在MDCK细胞中感染和复制。小鼠保护性试验进一步表明，单克隆抗体4A7能提供良好的被动免疫抵抗致死性MAE-Teal/417感染。以上获得的无血凝抑制活性、但具有一定中和活性的抗HA单克隆抗体为H6禽流感病毒HA蛋白新型中和表位解析、疫苗设计及诊断技术开发等提供生物材料。
2025年05期 v.33;No.167 136-142页 [查看摘要][在线阅读][下载 1438K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：193 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 静争;拉巴次仁;王成丽;张晓丽;王文杰;孟婷;尤建嵩;张贺楠;
为制备犬瘟热病毒(CDV)N蛋白的特异性单克隆抗体，本研究采用原核表达系统构建重组表达质粒，经诱导表达并纯化后，所得蛋白用于免疫BALB/c雌性小鼠。通过细胞融合、筛选及亚克隆技术，成功获得1株交瘤细胞株(3D4)，该细胞株能够稳定分泌抗CDV N蛋白单克隆抗体。该株抗体亚型鉴定为IgG1，轻链类型为κ链，腹水效价可达1∶2 048 000。免疫荧光检测(IFA)和Western blot结果显示，该单克隆抗体可特异性与CDV毒株结合。本研究成功制备了针对CDV N蛋白的高效特异性单克隆抗体，为CDV的快速检测方法的建立与相关基础研究奠定了物质基础。
2025年05期 v.33;No.167 143-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 1576K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：246 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 何宇婷;郭晴晴;岳永程;贾静;韩艳辉;周岩;卢丽丹;唐文强;洪炀;傅志强;
片形吸虫病主要是由大片形吸虫(Fasciola gigantica)和肝片形吸虫(Fasciola hepatica)寄生在草食性哺乳动物或人肝胆内引起的一种人畜共患寄生虫病。片形吸虫中存在的硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(TGR)是其氧化还原系统中一个含硒的多功能酶。本研究对大片形吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(FgTGR)进行了克隆、表达及纯化，并制备其多克隆抗体。通过PCR方法扩增了含开放阅读框(ORF)的FgTGR序列与含硒蛋白序列的FgTGR序列(FgTGRsec)，分别构建了克隆质粒pMD19T-FgTGR和表达质粒pET28a(+)-FgTGRsec。将pET28a(+)-FgTGRsec单独转入BL21(DE3)感受态细胞后进行诱导表达，此外，将pET28a(+)-FgTGRsec与pSUABC质粒共同转入BL21(DE3)感受态细胞后进行表达，并对表达后的这两种重组蛋白分别进行纯化。以纯化的重组FgTGR蛋白(rFgTGR)作为免疫抗原对BALB/c小鼠进行皮下免疫，制备多克隆抗体。FgTGR ORF为1920 bp，编码639个氨基酸，理论分子量约为70 kDa，FgTGRsec基因片段为1968 bp，编码656个氨基酸，表达的重组蛋白理论分子量约为72 kDa，两者在大肠杆菌中表达的重组蛋白在蛋白电泳结果中均符合预测大小。成功制备了针对rFgTGR的多克隆抗体，将该抗体1∶400稀释后作为蛋白免疫印迹实验的一抗，可成功地检测到rFgTGRsec条带。本研究成功表达了含硒蛋白和不含硒蛋白的重组FgTGR蛋白，制备了针对FgTGR蛋白的多克隆抗体，为FgTGR的酶动力学研究及其抑制物的筛选提供了基础。
2025年05期 v.33;No.167 150-157页 [查看摘要][在线阅读][下载 1441K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：341 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 张彦兵;解艺璇;李慧;肖长广;葛菲菲;刘珂;魏建超;李宗杰;邵东华;李蓓蓓;马志永;孙延鸣;邱亚峰;
本研究旨在利用PRRSV Nsp2合成肽进行多克隆抗体的制备，并分析了该抗体的特性。应用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp2的抗原肽序列，并通过化学合成的方法获得抗原肽，将其与KLH载体蛋白进行偶联；随后，将偶联好的抗原肽与弗氏佐剂混合，通过对新西兰大白兔进行免疫获得的血清即为针对Nsp2的多克隆抗体；最后，利用ELISA、Western blot及IFA对多克隆抗体的特性进行分析。研究结果显示：ELISA检测该多克隆抗体的效价超过10~5；Western blot检测可以特异性检测到细胞过表达和不同毒株病毒感染的Nsp2蛋白；IFA检测分析得出，该多克隆抗体可有效地区分病毒感染和未感染的样品。此外，PRRSV Nsp2合成肽多克隆抗体还可以应用于不同毒株PRRSV感染样品的检测，这为进一步研究PRRSV Nsp2的功能提供了一个有效的工具。
2025年05期 v.33;No.167 158-164页 [查看摘要][在线阅读][下载 1504K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 王安铖;李俊波;胡一帆;孟鑫;陈玲超;童武;单同领;于海;孔宁;刘雪兰;童光志;徐家萍;郑浩;
为了制备高活性的非洲猪瘟病毒p72蛋白，本研究优化合成了非洲猪瘟B646L和B602L全基因序列，并分别克隆进pFastBac Dual载体中，构建了重组质粒pBac-B602L-B646L。将pBac-B602L-B646L转化感受态细胞DH10Bac中，经过蓝白斑纯化和PCR鉴定，获得重组杆状质粒rBacmid-p72。将rBacmid-p72转染到sf9昆虫细胞中，获得重组杆状病毒。通过IFA和Western blot分析，证实rBac-p72感染sf9表达p72和pB02L。以rBac-p72感染悬浮培养的sf9细胞，并通过Ni柱亲和层析获得了纯化的p72蛋白。以p72蛋白包被酶标板，通过间接ELISA检测，显示纯化的p72蛋白能与ASFV阳性血清中的抗体良好结合。上述研究结果表明，本研究通过杆状表达的p72蛋白具有较高的活性，为下一步开展p72蛋白功能及应用研究打下良好的基础。
2025年05期 v.33;No.167 165-171页 [查看摘要][在线阅读][下载 1464K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 王翠;廖海珍;卢军;吴先华;刘文波;覃艳然;许宗丽;李宇;黄小武;严斯刚;李志源;韦祖樟;欧阳康;韦正吉;
为了解广西柳州地区猪圆环病毒2型(PCV2)的流行病学特点及遗传变异情况，对柳州地区PCV2进行流行病学调查和系统发育分析，以期为柳州地区PCV2的防控提供一定的参考。通过实时荧光PCR(qPCR)对2020—2022年柳州地区屠宰场的989份健康猪和规模猪场或散养猪场的608份患病猪的脾脏、肺脏、肝脏和淋巴结等进行PCV2检测，在此基础上，通过聚合酶链反应随机扩增其中28份阳性样品的Cap蛋白基因(ORF2)，测序并进行系统发育分析。结果显示：柳州地区PCV2阳性率约为50.47%(806/1597)；对获得的28株PCV2的ORF2基因进行系统发育分析，结果显示3株属于PCV2a亚型(10.71%)，6株属于PCV2b亚型(21.43%)，19株属于PCV2d亚型(67.86%)，这说明目前PCV2d亚型是柳州市PCV2流行的主要优势亚型。本试验丰富了PCV2 ORF2基因库信息，同时为柳州地区PCV2分子流行病学研究和防控提供了一定的理论依据。
2025年05期 v.33;No.167 172-181页 [查看摘要][在线阅读][下载 2067K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 左佳坤;连丽燕;扶邵东;吕朝阳;潘子豪;于勇;王梦迪;陈兆国;尹会方;黄翠琴;蒋蔚;邹立扣;陈伟;韩先干;苗晋锋;
为了解当前中国奶牛乳腺炎源大肠杆菌的分子流行病学特征，本研究通过PCR、测序等技术对实验室保存的2020—2022年中国7个省份158株临床型乳腺炎大肠杆菌分离株的系统进化分群、毒力基因及耐药基因进行鉴定和分析。结果显示：乳腺炎源大肠杆菌共生性群落B1群占比最高，为51.6%(81/158)，C群次之，为24.1%(38/158)，A群和D群较少，分别为11.4%(18/158)和10.1%(16/158)，此外有5株大肠杆菌未鉴定到确定进化群；毒力基因检测结果显示，ompA、pqqL、astA存在于所有分离株中，其次，lpfA和traT检出率较高，分别为57.6%(91/158)和65.8%(104/158)，但缺乏致病性大肠杆菌常见的毒力基因；药敏检测结果显示，乳腺炎源大肠杆菌对10种抗生素呈现出不同程度的耐药，其中对四环素(43.0%，68/158)、氨苄西林(38.6%，61/158)、复方新诺明(38.0%，60/158)和链霉素(38.0%，60/158)的耐药率最高，且39.9%(63/158)的分离株具有多重耐药性；乳腺炎源大肠杆菌携带了多种耐药基因，包括β-内酰胺类耐药基因blaCTX-M、四环素类耐药基因tetA以及磺胺类抗生素耐药基因sul2，其检出率分为17.7%、13.3%、14.6%，且blaCTX-M亚型为blaCTX-M14和blaCTX-M15亚型。本研究结果为我国奶牛乳腺炎源大肠杆菌的分子遗传特性研究提供了基础资料。
2025年05期 v.33;No.167 182-191页 [查看摘要][在线阅读][下载 1775K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：844 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 韩紫薇;杨寒;石蒙蒙;齐江坤;孙亚威;吕晨哲;陈陆;
了解河南省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)最新流行变异情况，为河南省PRRS的防控提供科学参考。2022—2023年从河南省18个地市采集1171份疑似PRRSV感染猪的病料样品，采用RT-PCR检测PRRSV阳性率，统计不同季节和地区感染情况；利用RT-PCR扩增阳性样品ORF5基因序列后进行遗传进化分析。共324份样品(27.67%)检测为PRRSV阳性，河南省不同地区和季节PRRSV样品阳性率分别为13.95%～62.50%和21.74%～32.8%。共扩增获得62条完整ORF5基因序列，其中包括61条PRRSV-2和1条PRRSV-1 ORF5序列，61条PRRSV-2序列中有45株属于sublinge 1.8，8株属于sublinge 1.5，1株属于sublinge 8.7，7株属于sublinge 5.1，所占比例分别为73.77%(45/61)、13.11%(8/61)、1.64%(1/61)和11.48%(7/61)。氨基酸序列比对结果显示，部分病毒株氨基酸变异位于GP5细胞表位区域，其中2株类NADC30 GP5存在氨基酸缺失，1株类NADC30在GP5插入1个aa。河南省猪群 PRSSV流行情况严重，且有多样化、复杂化趋势，其中类NADC30为主要流行毒株。
2025年05期 v.33;No.167 192-198页 [查看摘要][在线阅读][下载 1690K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：853 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] - 马思原;姚晓慧;金耀忠;马永国;李琳;李宗杰;魏建超;刘珂;邵东华;邱亚峰;马志永;李蓓蓓;
本研究旨在调查SXT/R391整合性接合元件在我国养殖动物源细菌中的流行状况及其主要宿主菌的耐药性特征。收集了我国21个省市自治区的猪源、鸡源和牛源粪便样本，总计1166份。提取粪便样本总DNA，利用PCR检测SXT/R391元件的特异性整合酶基因，对该元件流行状况进行调查。选取阳性样本分离鉴定携带SXT/R391元件细菌，阐明其宿主菌菌属分布。利用琼脂稀释法测定携带SXT/R391元件的变形杆菌对9种抗菌药物的最小抑菌浓度(MICs)，测试药物包括：氨苄西林、四环素、替加环素、环丙沙星、头孢西丁、美罗培南、庆大霉素、恩诺沙星和氟苯尼考。研究结果表明，SXT/R391元件在我国动物源细菌中的流行率总体达44.3%，其中猪源为50.4%(429/852)，鸡源为33.6%(85/253)、牛源为4.9%(3/61)。对携带SXT/R391元件细菌的分离鉴定结果表明，携带该元件的主要为奇异变形杆菌(32.5%，118/363)和普通变形杆菌(31.4%，114/363)，且在大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、解鸟氨酸拉乌尔菌、幼虫普罗威登斯菌、彭氏变形杆菌、摩根摩根菌和蜂房哈夫尼亚菌等细菌中均有发现。对携带SXT/R391元件的奇异变形杆菌和普通变形杆菌的药物敏感测试结果表明，对四环素、环丙沙星、庆大霉素、氟苯尼考等耐药率极高(>60%)，未发现美罗培南和替加环素耐药菌株。SXT/R391元件作为一个耐药基因捕获的重要载体，在养殖动物源细菌中的广泛流行表明其在动物源耐药性传播扩散中可能起到了重要作用，值得进一步的关注和研究。
2025年05期 v.33;No.167 199-205页 [查看摘要][在线阅读][下载 1461K] [阅读次数：0 ] |[下载次数：0 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ]